Способ определения иммунокомпетентных клеток

ИДЕТЕЛЬСТВУ вательский институт гиссиональных заболеваМюллер С. Одновремен - и Д-розеткообразуюи нулевых клеток у нь экспер. биол, и мед.,54) СПОСОБ КОМПЕТЕНТН 57) Изобретен биологии и мо честве скринин О ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР(71) Научно-исследогиены труда и профний АМН СССР(56) Гришина Т,Иное выявление Т - , Вщих лимфоцитовчеловека, - Бюллете1978, М 4, с,503,ОПРЕДЕЛЕНИЯ,ИММУН 1 Х КЛЕТОКие относится к медицине и ет быть использовано в ка - теста в клинической иммуИзобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано в качестве скрининг - теста в клинической иммунологии и в практике массовых иммунологических обследований населения и промышленных рабочих,Цель изобретения - повышение информативности, упрощение и сокращение времени определения розеткообразующих и фагоцитирующих лейкоцитов периферической крови.П р и м е р. Кровь забирают из пальца в количестве 0,05 мл в пробирку с сухим гепарином (10 ЕД) и проводят гемолиз эритроцитов путем добавления 2 мл охлажденной до +4 С дистиллированной воды. Пробирку встряхивают, добавляют 2 мл двойного (1,80 ь) физиологического раствора и центринологии и в практике массовых иммунологических обследований. Целью изобретения является повышение информативности, упрощение и сокращение времени исследования, Для этого в 0,05 мл крови проводят гемолиз эритроцитов дистиллированной водой, к лейкоцитам добавляют в двойном объеме (по 0,1 мл) индикаторы для двух типов мембранных рецепторов - 0,03 - ную суспензию эритроцитов барана и 0,1-ную суспензию комплекса комплемент - зимозан, Образовавшиеся розетки фиксируют 1,5 ф - ным глютальдегидом, готовят один препарат и окрашивают 5 мин смесью 1- ных растворов в соотношении 1:2 Азура Н и зоэина, В препарате определяют Т - , В - , Д-, О - лимфоциты, Е - СЗ - нейтрофилы и нитрофилы, фагоцитирующие комплекс комплемент - зимоэан,фугируют 5 мин при 200 д, Надосадочную жидкость удаляют, добавляют 0,1 мл питательной среды 199 и для устранения шока Ь клетки инкубируют 10 мин при 37 С. Затем Я к клеткам добавляют в двойном объеме, т, е, (Д по 0,1 мл 0,30 - ную суспензию эритроцитов К) барана и 0,10 - ную суспензию комплекса сзимозан - комплемент. Без предварительной инкубации (при 37 С) проводят мягкое осаждение клеток центрифугированием в течение 1 мин при 200 д и инкубируют 30 мин при 4 С, Для мягкой фиксации образовавшихся розеток добавляют 0,1 мл 1,5 ф - ного водного раствора глутарового альдегида, выдерживают 5 мин, сливаютнадосадочную жидкость и добавляют 0,1 мл физиологИческого раствора. Готовят мазок, который высушивают на воздухе и фиксируют 10 мин в1642397 Формула изобретения Составитель Б.МануйловТехред М.Моргентал Корректор И.Муска Редактор А,Огар Заказ 1145 Тираж 415 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета но изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 абсолютном этиловом спирте, Для окраски препарата смешивают ех 1 евроге 1 ч. 1 ф - ного водного раствора Азураи 2 ч. 1-ного водного раствора эозина и окрашивают препарат 5 мин. Препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. При этом просчитывают по 100-200 лимфоцитов и нейтрофилов, принимая за розеткообразующие клетки присоединившие три и более частиц соответствующего индикатора. В препарате определяют следующие лейкоциты;с рецепторами в эритроцитам барана, т. е, Т-лимфоциты и Е-розеткообразующие нейтрофилы (Е - РОН);с рецепторами к комплементу, адсорбированному на эимоэане, т. е. В - лимфоциты и СЗ-розеткообразующие нейтрофилы (СЗРОН);с рецепторами к обоим индикаторам, т, е. О (двойные)-лимфоциты и двойные розеткообразующие нейтрофилы (Е-СЗ - РОН);не имеющие рецепторов к соответствующим индикаторам, т. е. нулевые клетки (О - лимфоциты и О - РОН);фагоцитирующие клетки среди нейтрофилов, т, е. опсонизирующие комплекс зимозан - комплемент,Положительный эффект подтверждается совпадением результатов определения Т- и В - лимфоцитов периферической крови по. предлагаемому способу и известному (в микроварианте раздельного определения Т - и В-лимфоцитов), а также возможностью определения по предлагаемому способу О- и О-лимфоцитов в препарате, Показана зависимость направленности и глубины изменения количества роэеткообразующих лимфоцитов от статуса здоровья обследованных лиц: снижение Т - и повышение В - и Д-клеток при аллергических реакциях, осо бенно при обострении процесса, и выраженное снижение всех розеткообраэующих субпопуляций при вторичном иммунодефиците. Нулевые лимфоциты перераспределяются в зависимости от изменения 10 количества розеткообразующих субпопуляций.Таким образом, предлагаемый способпозволяет значительно повысить информативность, упростить приемы и сократить 15 время исследования. Способ определения иммунокомпетен 20 тных клеток путем добавления к лейкоцитарной взвеси эритроцитов барана споследующей фиксацией глютаровым альдегидом, окраской Азуроми эозином иопределением розеткообразующих Т- и 825 лимфоцитов, отличающийся тем,что,с целью повышения информативности, упрощения и сокращения времени, в качествемаркера В-лимфоцитов используют 0,1 -ную суспензию комплекса комплемент-зи 30 мозан, при этом добавляют 0,03-нуюсуспензию эритроцитов барана, фиксируют1,5-ным глютаровым альдегидом, окрашивают 1 - ной смесью Азураи зозина всоотношении 1;2 и дополнительно опреде 35 ляют Д - , О - лимфоциты, Е - СЗ-нейтрофилыи нейтрофилы, фагоцитирующие комплекскомплемент - зимозан,