Способ получения белков, меченых изотопом иод-125

,6%. Е 25- гоГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЭОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ПНТ СССР А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Институт биооргдцицес кой химиАН БССР(56) Макаренко М.В. ц лр, Способполучения антигецоц, м ецых изотовомиод; Изобретение относится к биохимии и медицине, а именно к усовершенство ванному способу полуцецця белков, меченых изотопом иод, которые могут найти применение в иммунохимических исследованиях и в качестве компонентов радиодидгностических наборов для радиоиммунологического медицинского микроаналцзд.Целью изобретения является повыше нне стабильности образующегося комплекса белка и радиоактивной метки.П р и м е р 1. Получение иодинсулина.В ампулу с 1вносят 0,5 мкгна Т, 4 мкг (0,7акцию проводят вном буфере, содерия. Перемешиваюют реакцию приб(57) Изобретение относится К биохимии ц медцццце, в цлс тцостц к радиоцодировднию белков цэотопом цод.Целью изобретения является повышениестдбильности обрлзуюегося комплексабе лкд ц рлдцодктцвцой метки, что достцгдется введением в ицку 1 и 1 оцлцнуюсреду, содержащую рлдиолктцвцую метку белок и;хлорамиц Т,лзилл цлтрияц коццецтрацци 0,3-5,0%. ИЯунореактцьцость полученного комцц ксд после40 1 ц. хрдцсция состлцпяет 65,3%а фосфатцом буфере. Выделяют цонев продукт хроматорэфией цл ефдде се С -50. Радиохимический выход 8 Связывание избытком лцтите,1 95% специФическое связывание 33%.П р и и е р 2. ПОлуцеци иоддльфд-субъединицы хорцОцнцеского нддотропица. В ампулу с 0,5 мКи натрий-цодвносят .мкг (3,55 нмоль) хлорлмина Т 5 мкг (0,33 нмоль) альфасубьединицы хорионичеокого гоцадотропина. Реакцию проводят в 0,1 М натрийфосфатном буфере, содержащем 5% ази- да натрия. Перемешивают 15 с. Остатанавливают реакцшо прибавлением 20 мкл (0,68 мкг ) метдбисульфцта натрия в О, М натрийфосфдтцом буфере. Выделяют целевой продукт хроматографией на сефадексе О, Радиохимический выход 75,3%. Связывание58814 избытком антител 97-99,3 . Неспецифическое связывание 3,5 ,П р и и е" ц, 3. Получение иодзорцоцического 1 оцадотропица.В ампулу с 1 мКи натрий-иод 5вносятмкг 3,55 цмоль) хлорамицц Т, 7 мкг0,18 цмольхорионичес"кого гоцадотропицв. Реакцию проводятв 0,1 М цатрийфосфатцом буфере, со" 1 Одержащем 0,3 аэида натрия. Перемешивают 1 О с. Останавливают реакциюприбавлением 20 мкл (0,5 мкг) цистеица в О, М цатрийфосфатном буфере.Выделяют целевой продукт хроматогра.5фией ца сефадексе С. Радиохими"ческий выход 62%. Связывание избыт- .ком антител 94 , неспецифическое связывание 3,6 .Радиоиодиронацие хорионического 20гоцадотропина человека хлорамицовымметодом известным способом не поэво"лило получить стабильный меченый белок: при хранении маркер теряет способность связываться с антителами, 25эа первые 1 О дц, на 15-20 , эа 3 недели ца 30-Ь 5%. Такая метка не моглабыть использована для создания радиоиммуцологического набора, срок годности которого установЛен 30 дн.Предлагаемый способ радиоиодированияв присутствии азида натрия позволилполучить стабильный меченый гормон:иьяуцореактивность на день получения94 , а после 40 дней хранения составила 65,3 ,. Стабильность такой метки,Жпользуемой в РИА-наборе, подтверждена с помощью контрольной сывороткифирмы цОИБ" (Франция) с деклариро-;:наицой концентрацией хорионическогогонадотропина человека 78 гмоль/л.Стабильность набора определяется ста 4бцльцостью используемого маркера -. более продолжительные сроки годности антител и стандартов не лимитируют срок годности набора. Процент открйтия после 40 днхранения составил 102,6+3,1 (и 11). Поскольку для данного нида анализа коэффициент вариации допустим.в пределах +10 Е, то определенная концентрация контрольной сыворотки подтверждает. качество и стабильность метки, полученной предлагаемым способом. Формула изобретенияСпособ получения белков, меченых изотопом иод,путем составления инкубационной смеси из 0,5-1,0 мКи натрий-иод, О, М фосфатного буфера с рН 7,4, 1;0-8,0 мкг хлорамина Т, 4,0-40,0 мкг белка, инкубации с перемешиванием в течение 10-30 с при комнаткой температуре,остановки реакции добавлением в инкубационную смесь 0,68-5,4 мкг метабйсульфита натрия или 0,3-0,5 мкг цистеина, затем ,О, М фосфатного буфера, содержащего 200 мкг К 1, 200 мкг бычьего сывороточного альбумина и 0,023 азида натрия, последующегохроматограФирования на колонке с сеадексом С+50-100 и элюирования целевого продукта раст,вором, содержащим О, М фосфатного буфера, 0,1 Й бычьего сывороточного альбуйина и 0,02 азида натрия", о тл и ч а ю щ И й с я тем, что, с целью повышения стабильности образующегося комплекса белка и радиоактивной метки, в инкубационную смесь азид натрия вносят в концентрации 0,3-5,03.Составитель О. КононоваРедактор Л. Лашкова Техред М.Дцдык Корректор М. Шарошиаащюа юю ааащааававаеаиваййЗаказ 3724 Тираж ПодписноеВНИИПИ Гцсударстненного комитета по йэобретениям и открытиям при,ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5йПроизводственно-издательский каибццат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,10