Способ получения ацетилхолинэстеразы из мембраны эритроцитов крови человека

(5) ВСЕСОЮЗНАЯПАТЕНТНЗ Тй,п"1 ЧЕС БИБЛИОЕг А ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ 4 ь Ж ав М ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ. И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР Н Д ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистыхбиопрепаратов(56) БЬ 111 огат 8 К. Асеьу 1 сЬо 1 хпезегазе апс 1 1 з аззосьасьоп чгП 1 ьрЫ.Еиг. ,1.Вьосйев, 1976, ч. 63,рр. 519-524. Изобретение относится к препаративной биохимии, касается способов вьщеления ацетилхолинэстеразы и может быть использовано в медицинской и микробиологической промьпдленности.Цель изобретения - повышение удельной активности ацетилхолинэстеразы.Способ заключается в том, что к взвеси мембран эритроцитов добавляют хлористый натрий до концентрации 1,0-1,2 М, а затем проводят об работку раствором дезоксихолата натрия (ДХН) . Пример 1. К 20 мгстромы добавляют 1,0 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5) и 1,0 мл Н О. После, выдерживания в течение 2 ч определяют активность АХЭЧ и концентрацию белка в растворе, проводят центрифугирование при 80000 об/мин в течение 15 мин. В супернатанте определяют 2 Ъ 1 9/00 // В 01 1 20/24(54) СПОСОБ НО 11 УЧЕШ 151 А 1 ЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЪ ИЗ МЕМБРАНЪ 1 ЭРИТ 1 ОЦ 11 ТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА(57) Изобретение относится к препаративной биохимии, касается способов вьщеления ацетилхолинэстеразы и может быть использовано в медицинской и микробиологической промьпцленности, Целью изобретения является повынение удельной активности ацетилхолинэстеразы Способ заключается в том, что к взвеси мембран эритроцитов в фосфатном буфере добавляют хлористый натрий до концентрации 1,01,2 М, а затем проводят обработку раствором дезоксихолата натрия.1 табл, с активность фермента. Активность АХЭЧ в супернатанте составляет 17 от исходной.П р и м е р 2. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5), 0,177 г Ъ 1 аС 1 и 1,0 мл Н О. После выдерживания в течение 2 ч определяют активность фермента и концентрацию белка. Затем проводят центрифугирование раствора при 80000 об/мин в течение 15 мин. ваай В супернатанте определяют активность АХЭЧ и концентрацию белка. Активность фермента в супернатанте составляет 30 Е от исходной.П р и м е р 3. К 20 мг стромы до- )фью бавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5) и 1 мп 2%-ного раствора ДХН. Происходит полное растворение вэвеФ си стромы. В растворе измеряют активность фермента и концентрацию белка. После вьщерживания в течение 2 чФормула изобретения Пример Концентрация БаС 1 Удельнаяактивность,ГЕ/мг белка КонцентрацияДХН,охранеие акивности 1 2 3 4 5 6 7 130601001009390 0,9 0,9 1,2 1,3 2,5 2,1 1,9 0,117 0,058 0,117 0,173 0,231 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,5 1,0 1,5 2,0+ Концентрацию белка определяли до центрифугированияСоставитель В.Варламов Редактор Н.Киштулинец Техред М,Ходанич Корректор М.МаксимишинецЗаказ 4406/29 Тираж 501 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 11303.5, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г,Ужгород, ул. Гагарина,101 3 149721 сохраняется 60 . активности АХЭЧ от исходной.П р и м е р 4. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М Фосфатного буфера (рН /,5), 0,058 г 11 аС 1 и 1 мл 2%-ного . раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После выдерживания в течение 2 ч и центрифугирования со скоростью 80000 об/мин в течение 15 мин 10 определяют в супернатанте активность фермента и концентрацию белка. В супернатанте сохраняется 100% активности ЛХЭЧ.П р и м е р 5. К 20 мг стромы 15 добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5), 0,117 г 11 аС 1 и 1 мл 2 -ного раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После выдерживания в течение 2 ч проводят центрифугиро вание со скоростью 80000 об/мин в течение 15 мин. Б супернатанте определяют активность фермента и концент рацио белка. Сохраняется 100 активности ЛХЭЧ. 25П р и м е р 6. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М Фосфатного буфера ,(рН 7,5), 0,173 г ИаС 1 и 1 мл 2 -ного раствора ДНХ. Наблюдается выпадение. осадка. После выдерживания в течение ) 2 ч центрифугируют со скоростью 8000 об/мин в течение 15 минут. Из 64меряют активность АХЭЧ и концентрацию белка. Сохраняется 93 Е активнос ти фермента.П р и м е р 7, К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М Фосфатного буфера (рН 7,5), 0,234 г 11 аС 1 и 1 мл 2%-ного раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После выдерживания в течение 2 ч и центрифугирования в течение 15 мин со скоростью 8000 об/мин определяют в супернатанте активность АХЭЧ и концентрацию белка. Сохраняется 90% активности отисходной.Полученные данные приведены в таблице. Способ получения ацетилхолинэстеразы из мембраны эритроцитов крови человека, предусматривающий солюбилизацию Фермента с помощью дезоксихолата натрия в фосфатном буфере, о т - л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения удельной активности ацетилхолинэстеразы, солюбилизацию проводят в присутствии хлористого натрия в концентрации 101,2 М, введение которого осуществляют перед внесением дезоксихолата натрия.