Способ определения тиамина в биологических жидкостях

СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИ 19) 1) ЛИК и 4 С 01 И 33/4 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ с Пример 1на в крови.ВкровипятятдобаврН 5,предел ие тиами две пробирки вносят по, добавляют 3 мл 0,2515 мин на водяной банляют по каплям 207 Иа2. В одну пробирку добдистиллированной водына свободный тиамин),пробирку 1 мл 17-ной су НС 1 и кие затем СОз до авляют (для анаа во вто- спензии ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ. И ОТНРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Всесоюзный онкологический научный центр АИН СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИАИИНАБИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ(57) Изобретение относится к ме Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии, в частности к способам определения тиамина в биоло гических жидкостях и тканях.Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет удаления не прореагировавшего феррицианида перекисью водорода, а также добавлением в контроль феррицианида, предварительно инактивированного добавлением перекиси водороне, в частности к способам определения тиамина в биологических жидкотях. Целью изобретения является повышение чувствительности и точностиспособа, а также его упрощениеСущность способа состоит в том, что инкубирование проводят в течение 1520 мин, водный слой отделяют центрифугированием при 1000 об/мин, вконтроль добавляют феррицианид, предварительно инактивированный Н 0, аэкстракцию изобутанолом проводят присоотношении раствор - изобутанол1:0,7. препарата кислой фосфатазы и инкубиоруют 15 мин при 37 С с последующим кипячением в течение 10 мин,. на водяной бане (для анализа на общий тиамин), В обе пробы добавляют по 0,5 мл 20%-ной ТХУ, кипятят 3 мин и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, надосадочную жидкость встряхивают с 5 мл изобутилового спирта и эмульсию центрифугируют при 1000 об/мин в течение 1 мин. Для определения тиамина флоу". р риметрическим способом отбираютводную фазу и обрабатывают окислительной смесью для превращения тиамина в тиохром. С этой целью из каждой пробы 1,5 мл водного слоя, полученного после центрифугирования,вносят в пробирку, содержащую 2 мп окислителя (1 часть 307 ИаОН и 1 часть 17-ного феррицианида калия), перемешивают, а затем добавляют 2 капли 37-ной перекиси водорода для разру= 0,5 мкг слоя, который смешивают с 2 .мл окислительной смеси, предварительно инб концентрация свободного тиамина вактивированной путем добавления ви о анной путем добавления в кРови составляет 0,5 мкг., асчетысодержания общего тиамина проиэворода. Опытные и контрольные пробы дят по аналогичнй формул) р этом2 5 изобут ово о длЯ приводимого пРР Ртся85, б - равняется 40 ед. по шкале1000 об/мин. Отбирают 2 мп изобута- при ора(85 - 40) х 10 мкг.кола и флуориметрируют при длине С90 - 30 , :волны возбуждения 370 нм и длине.,волцы испускания 420 нм. 15 = 7,5 мкг.Расчеты содержания тиамнна в кро- Общая концентрация тиамина составви производят по следующей формуле; ляет 7,5 мкг.,Формула изобретения20 Для конкретных значений, приведенных в скобках, расчет имеет следующий Виде Редактор Н.Горват Составитель Л.СабуроваТехред М.Ходанич Корректор С,ПатрушеваМ Заказ 667/41 Тираж 788 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5(где С - концентрация ",тиамина вкрови в мкг.;а - показания опытной пробы(43 ед. по шкале прибора);б - показания .контрольной пробы (40 ед. по шкале прибора);С - концентрация тиамина в стандартной пробе (10 мкг);а - показания стандартной про-.бы (90 ед. по шкале прибора);б - показания контроля к стан(дарту (30 ед. по шкале прибора). Способ определения тиамина в биологических жидкостях путем добавления к исследуемой пробе соляной кислоты, кипячения, нейтрализации, обработки кислой фосфатаэой, инкубации, осаждения ТХУ, добавления изобутанола к надосадочной жидкости, феррицианида в качестве окислителя, экстракции изобутанолом с последующим флуориметрированием в сравнении с контрольной пробой, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, проводят повторную экстракцию изобуЗ танолом, при этом предварительнонепрореагировавший феррицианид удаляют обработкой смеси перекисью водорода, а в контрольную пробу допол" нительно добавляют феррицианид, ин-активированный перекисью водорода.