Способ получения галактоцереброзидного антигена

)19) ЯО1 К 39 00 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ СВИДЕТЕЛЬ У ВТОРСН(56) 0 цропеу Р., 1 оцгпа1972, ч. 109,1, р. 146 -ключения хроматографических эта ления и экстракции этанолом. Гал брозиды (ГалЦ) являются специф гликолипидными антигенами клето верхности клеток-продуцентов миел годендроцитов и шванновских клето линовых оболочек и способны вызь разование специфических антител. определяют антитела к ГалЦ в и гических реакциях с липидным а В качестве липидного антигена вме ГалЦ, холестерина и лецитина ис суспензию, приготовленную из сп раствора общих липидов мозга, по путем экстракции ткани мозга хл метаноловой смесью, отмытых от га дов и нелипидных примесей (и у досуха). им. И. П, ПавлО. С. Лччако о 1 1 пппцпо 1 од53.(54) СПОС ЦЕРЕБРОЗИ (57) Изобре касается пол антигена (Га нейшего испол ностической ни я - повыш антигена и у ОБ ПОЛУЧЕНИЯ Г ДНОГО АНТИГЕН тение относится к учения галактоцере лЦ) из ткани мозга ьзования как компо тест-системы. Цель ение активности, ст прощение способа з АЛАКТОА биохимии, брозидного для дальнента диаг- изобретеабильности а счет истанол 1:1 (10 ил смеси на 1 г исходной ткани), экстракт фильтруют, фильтрат объединяют с первой порцией и общий объем Фи экстракта доводят хлороформом до соотношения хлороформ - метанол 2:1. Липидный экстракт отмывают от ганглиозидов и нелипидных примесей 0,75 о-ным раствором КС (2,0 мл раствора КС на 10 мл экстракта) и оставляют на ночь для расслоения фф фаз. Верхнюю водно-метаноловую фазу отбрасывают, а нижний хлороформный слой повторно промывают половинным объемом чистой верхней фазы, смесью хлороформ- метанол - КС 1 - 3:47:48 и оставляют на ночь. ф Затем верхнюю фазу удаляют, Нижний хлороформный слой представляет собой ОЛЭ мозга быка, отмытый от ганглиозидов и нелипидных примесей. Для приготовления 5 мл липидной суспензии антигена берут О, мл ОЛЭ и разводят смесью хлороформ - метанол 2:1 в 16 - 25 раз, чтобы концентрация ГалЦ составляла 55 - 75 мкг/мл. Отбиии и моия галакиз ткани ания как системы. вышение упрощематог- ьзования ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИПРИ ГКНТ СССР Изобретение относится к биохим жет быть использовано для получен тоцереброзидного антигена (ГалЦ) мозга для дальнейшего использов компонента диагностической тестЦелью изобретения является по активности, стабильности антигена и ние способа за счет исключения хро фических этапов выделения и испол экстракции этанолом. Пример.Для приготовления антигена готовят общий липидный экстракт (ОЛЭ) мозга. Для этого ткань головного мозга быка, крысы или кролика гомогенизируют и экстрагируют лип иды смесью хлороформ - метанол 2:1 (20 мл смеси на 1 г ткани) при нагревании на водяной бане при 50 - 55 С в течение 15 мин. Экстракт отфильтровывают от осадка, а осадок фильтруют с фильтром, повторно экстрагируют смесью хлороформ - мепов выде- актоцереическими чной поина (олик) имие 1 вать обДля этого ммунолонтигеном. сто смеси пользуют иртового лученных ороформ- нглиози- паренных1461465 формула изобретения Составитель М. Васильев Редактор Н. Горват Техред И. Верес Корректор М. Самборская Заказ 508/5 Тираж 644 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгород, ул. Гагарина, 10рают 1 мл этого раствора в пробирку, упаривают растворитель на кипящей водяной ,бане, вращая пробирку, чтобы осадок липидов образовал тонкую пленку на ее стенках, добавляют 1 мл этилового спирта и растворяют в нем липиды, нагревая спирт на водяной бане до кипения. К кипящему спирту добавляют 4,0 мл дистиллированной воды, ,получая концентрацию ГалЦ в антигене 11,0 - 15,0 мкг/мл. Образуется слегка опалесцирующая суспензия липидов, которую используют в качестве галактоцереброзидного антигена.Этот антиген используют для определения антител к ГалЦ в сыворотке крови кроликов, иммунизированных ГалЦ, и контрольных кроликов. Определение антител проводят при помощи реакции связывания комплемента. Способ получения галактоцереброзидного антигена путем экстракции липидов из ткани мозга хлороформ - метанолом, отмывания липидного экстракта от нелипидных приме. сей и ганглиозидов, отличающийся тем, что, с целью повышения активности, стабильности антиген:. и упрощения способа, липидный экстракт упаривают досуха, растворяют осадок липидов в кипящем этаноле и добавляют воду.