Способ обнаружения микробов в ткани

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК А 1 4 19) 5) 4 6 01 Х 1 30 1 ОБР А ййяф" гатогистологи, с. 234 - ИЯ МИКРООСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Научно-исследовательский институт морфологии человека АМН СССР(57) Изобретение относится к медицине,касается инфекционной патологии, гистологии, предназначено для выявления микроорганизмов в патолого-анатомическом материале. Цель изобретения - повышениеточности способа за счет установления локализации микробов. Для этого исследуютпосмертные гистологические срезы. Кусочкиматериала фиксируют в 2,5%-ном р-ре глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буферес рН 7,4 с последующей дофиксацией в 200-ном р-ре осмиевой кислоты, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, заливают в эпонараладит. На ультра- томе 1.КВ готовят полутонкие срезы, обессмоливают, покрывают генциан-виолетовой фильтровальной бумагой, на нее капают 3 - 4 капли дистиллированной воды и окрашивают 5 мин. Удаляют фильтровальную бумагу, промывают срез, погружают его в р-р Люголя на 5 мин, Промытые и высушенные срезы погружают в ацетон, затем промывают. Далее красят срезы р-ром карболового фуксина в конечной концентрации 0,1 - 0,15% 3,0 - 3,5 мин. Затем промывают срезы, просушивают, опускают в ацетон на 2 с, окрашивают 5,0 - 5,100-ным р-ром пикриновой кислоты в ацетоне 10 - 15 мин. Срезы обрабатывают 3 с ацетоном с ксилолом в соотношении 1:1. Препараты исследуют методом световой микроскопии. Микроорганизмы обнаруживают в виде окрашенных компонентов: грамположитель. ные - синее окрашивание, граммотрицательное - красное окрашивание.(:оста)витель В. Фролова Редактор 11. Т) пипа Техрса И. Верес Корректор В. Рирняк Закан 38)46,;58 Тираж 847 Подписное 131 ИИ 11 Рос 1 ларстнс ппо и копнитеи (:С:Г:Р по делая изобретений и открытии13035, Моски, Ж 35, Раусиская наб., л. 45 111 н)иаволс Гвспно-поен)прас)ияс скос пр,п)риятие, с. Ужгород, т,. 11 роскп)ая,Изобретение относится к медицине, к инфекционной патологии, в частности к гистологии, и может быть использовано для выявления микроорганизмов в патологоанатомическом материале.Цель изобретения - повышение точности способа за счет установления локализации микробов,Способ осуществляют следующим образом.От инфицированного трупа человека через 1 - 3 ч после смерти или зараженного , животного берут кусочки ткани органов ве,личиной не более 1 мм, Этот материал фиксируют в 2.5 Я-ном растворе глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,4+. +.0,1 с последующей дофиксацией в 2 Я-ном растворе осмиевой кислоты, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации и заливают в эпонараладит. На ультратоме .КВ готовят полутонкие срезы толщиной 2 - 3 мкм. Затем известным методом обес смоливают испытуемые среды и переходят непосредственно к окрашиванию. Срезы покрывают генциан-виолетовой фильтровальной бумагой, на которую капают 3 - 4 капли ,; дистиллированной волы и окрашивают в те, чение 5 мин, Фильтровальную бумагу удаля, ют и промывают срез проточной водой допрекращения отхождения краски. Срезы по гружают в раствор Люголя на 5 мин. Опо ласкивают водопроводной водой. Срезы под, сушивак)т фильтровальной бумагой, погружают в ацетон до прекращения отхожде ния синей краски, затем промывают водопроводной водой до полного удаления ацетона. Далее красят срезы растворов карболового фуксина с конечной концентрацией 0,1- - 0,15 Я в течение 3,0 - 3,5 мин, затем промывают препараты в проточной водопроводной воде. Срезы держат в растворе в тече.ние 5 мин, вновь промывают проточной во допроводной водой. Срезы подсушивают фильтровальной бумагой, опускают в ацетон на 2 с, окрашивают 5,0 - 5,1 Я-ным раствором пикриновой кислоты в ацетоне в течение 10 - 15 мин. Вновь опускают в ацетон на 2 с. Срезы обрабатывают ацетоном с ксилолом в соотношении 1:1 в течение 3 с.Препараты опуска 1 от в первую порцию ксилола на 5 с, во вторую порцию ксилола на 1 мин. Срезы заключают.Препараты исследуют методом световоймикроскопии, при этом присутствующие микроорганизмы обнаруживают в виде окрашен.ных компонентов: грам положительные 5 10 15 20 25 30 35 синее окрашивание, грамотрицательные красное окрашивание.Пример 1, Часть толстой кишки умершего от сепсиса больного исследовали предлагаемым способом. При окрашивании полутонких срезов карболовым фуксином в концентрации 0,1 Я в течение 3,0 мин и дифференцировке 5,0 Я-ной пикриновой кислотой в течение 10 мин в срезах были выявлены грамположительные и грамотрицатель. ные микроорганизмы, расположенные как вне-, так и внутрилейкоцитарно. Микробы выявились на серозной оболочке кишки, а также в собственной пластинке ворсинок кишки.Пример 2. Кусочек головного мозга умершего от сепсиса больного исследовали предлагаемым способом. Для окрашивания срезов использовали раствор карболового фуксина в концентрации 0,15 Я. Окраску проводили в течение 3,5 мин. Дифференцировку производили 5,о"-ным раствором пикриновой кислоты в течение 15 мин Грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы выявляли в гипофизе и в оболочках головного мозга.Исследован патолого-анатомический материал от 30 человек, умерших от различных причин инфекционной природы, и материал от экспериментально зараженных мышей. Исследования по известному способу не показали локализации микробов, в то вре. мя как по предлагаемому способу выявлена локализация микробов во всех случаях в тканях мозга, кишечника, почках, печени, и других органов.Применение предлагаемого способа в медицинской и ветеринарной практике поможет установлению верного диагноза, что является важным с точки зрения эпидемиологии, а также для разработки препаратов для лечения и профилактики некоторых заболеваний. Способ обнаружения микробов в ткани при посмертном исследовании путем окрашивания по Граму гистологических срезов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет установления локализации микробов, дополнительно прово. дят окрашивание в 0,1 - 0,15 Я-ном растворе карболового фуксина в течение 3,0 - 3,5 мин и в 5,0 - 5,1-ном растворе пикриновой кислоты в течение 10 - 15 мин.