Способ выделения

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Н ПАТЕНТУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(72) Йорма-Кески-Ойа, Поль Партанени Осмо Суованиеми (Р 1)(56) Согдоп Р.В., Эгеяз 1 ег Н.К.,флап А.Ь Мс фз 111 схп 1)1.Т. апс 1ТЬовая Д.1, ЕГйесс оЕ юп 1 кп 8 гас 1 хаг 1 оп оп зцвсепе.1 Ьь.1 дгу ой Мс Соусеп сц 1 сцгез йо СЫавусйа ггасйоваг 3.з. - Арр 1. Мь.сгоЬо 1, 1972, 23,р. 1 3-129,.801296011- А 3 б 11 4 С 12 О 1/04, С 12 И 5/00// /ДС 12 Я 1/04 С 12 Р, 1:90)(54) СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ СНЬАМУ 01 А ТВАСНОМАТ 18(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для изучения экспериментальной хламидиальной инфекции клетокэпителия, Цель изобретения - упрощение и ускорение способа за счет использования чувствительной клеточнойкультуры. Пробы подвергают гомогенизацни и центрифугируют. Каждую пробуделят на две равные части и прививаютна клетки Мак-Коя и Мця вцзсц 1 цв сазапеоця (ММС-Е). В качестве контроляиспользуют пробы, привитые на буферс сахарозой и фосфатом. Затем клеткиинкубируют, после чего питательнуюсреду удаляют из культуральных трубок, В каждую трубку добавляют метанол и выдерживают в течение 10 мин,После этого метанол удаляют, добавляют раствор Люголя. Через 20 мин этотраствор удаляют и подсчитывают окрашенные включения.ВНИИПИ Заказ 631/64 Тираж 500 Подписное Произв.-полигр, пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 12960Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выделения Сп 1 ашу 01 а ггасЬошаг 1 я и изучения экспериментальной хламидиальной инфекции клеток эпителия.Цель изобретения в ,упрощение и ускорение способа эа счет использования чувствительной клеточной культуры, не требующей дополнительной под готовки перед заражением.Краткая характеристика чувствительной к СЫашуц 1 а ггасЬошаг 1 я клеточной культуры эпителия эмбриона мьппи Мця шцясц 1 ця саяСапеоця (ММС-Е). В ММС-Е- культуре обнаруживаютсяплотные сочленения и десмосомныеструктуры, небольшое количество фибронектипа на поверхности клеток, нити20кератина. Клетки ММС-Е це являются опухолеродными и на них выявляются значительные количества рецепторов эпидермального фактора роста.25Культура клеток ММС-Е известна и,может быть получена в НациональномИнституте рака, Фредерик, Мд, у доктора Раппа. Клетки ММС-Е восприимчивы к СЫашуй 1 а ггасйошаГгя без дополнительной обработки перед заражением.П р и м е р 1. Клетки ММС-Е выращивают на гибких тканевых пластинкахв ВНК-среде, содержащей 107. фетальнойтелячьей плазмы и 50 ця гентамицинана 1 мл среды, Высевают Зх 10 клетокв 10 мл питательной среды в широкуюпластиковую трубку с плоским дном,имеющую покровное стекло диаметром13 мм, к которому прекрепляются выращиваемые клетки, Трубки инкубируютпри 35 С в 57-ном Со и используютдля инркуляции через 1-2 дня, когдаколичество клеток составляет 10 на5покровное стекло,45Клетки Мак-Коя выращивают так же,как и клетки ММС-Е. Пластиковые трубки с клетками Мак-Коя подвергают облучению до 4500 раз от Со-источни 60ка, Питательная среда заменяется свежей и клетки инкубируют при 37 фС 72 ч.Затем их рассеивают в пластиковыетрубки в количестве 10 клеток натрубку, Послеинкубирования в течение24 ч отбирают жизнеспособные клетки 55для выделения СЫашус 11 а гасЬошаг 1 я. 11 2П р и м е р 2, В качестве исследуемого материала используют пробы из мочеиспускательного канала и из шейки матки пациентов, проходящих амбулаторное лечение. Пробы оттаивают, если они были заморожены, и подвергают гомогенизации при перемешивании в течение 20 с, центрифугируют со скоростью 3000 и в течение 1 ч прио37 С, Каждая проба делится на две равные части и прививается на клетки Мак-Коя и ММС-Е. В качестве контроля используются пробы, привитые на буфер, содержащий 0,2 М сахарозу и 0,02 М фосфат. Затем клетки инкубируют в течение двух дней при 37 С, после чего питательную среду удаляют из культуральных трубок, в каждую трубку добавляют 1 мл метанола и выдерживают клетки 10 мин при комнатной температуре, После этого метанол удаляют, добавляют 1 мл раствора Люголя и клетки оставляют на 20 мин при комнатной температуре. После этого Люголь удаляют и производят подсчет окрашенных включений на покровном стекле под микроскопом, Включения в клетках ММС-Е имеют размер, соответствующий включениям в клетках Мак-Коя и легко обнаруживаются. Однако точные размеры включений не определяются из-за их неправильной формы.Использование клеток ММС-Е вместо облученных клеток Мак-Коя позволяет ускорить выделение СЫашуога ггасЬошаг 1 я от 4-5 до 1-2 дней и значительно упростить способ так как используемая культура клеток не требует предварительного облучения или обработки другими физико-химическими факторами. Формула изобретения Способ выделения СЫашуй 1 а ггасЬовапь.я путем заражения исслецуемым"Ф материалом клеточной культуры с последующим инкубированием, окрашиванием препаратов и учетом включений СЫавуйа вегасюшаггя в клетках ткани, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что; с целью упрощения и ускорения способа, исследуемым материалом заражают клетки эпителия эмбриона мьши Мця вцясц 1 ця саяСапеоця (ММС"Е) непосредственно после их получения.