Способ определения содержания алифатических альдегидов в растворе

(50 4 С 12 Я 1/66 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР(56) Попова Л.Ю, и Шендеров А.Н.Классификация мутантов с измененнойинтенсивностью свечения по чувствительности к экзогенному альдегиду.Генетика, 1979, т. 15, У 9, с. 15551560.Е,А.МехдЬеп, К,Б.Б 11 яяогапй 0,0,0 гап 1, Бее 1 оршеп 1 о а Ыо 1 пшепеяепсе аяяау а 16 епусп рЬегошопея оГ пяс 1 я. 1. Спеш, Его 1 ояу,1982, т, 8, 1 Ф 6, р. 911-921,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯАЛИФАТИЧЕСКИХ АЛЬДЕГИДОВ В РАСТВОРЕ(57) Изобретение относится к спосо 1Изобретение относится к способам определения количества алифатических альдегидов в растворе и может быть применено в аналитической химии, биохимии, медицине и Сельском хозяйстве.Цель изобретения - повышение чувствительности способа.Изобретение заключается в том, что берут культуру люминесцирующих бактерий РЬо 1 оЬасСегпш ГхясЬег или ВепесКеа Ьагчеу с содержанием клеток 10 - 10 в 1 мл.водного раствора8хлористого натрия 0,3-0,5 мас.%, обрабатывают клетки 5-70 10 мас.% нитрозогуанидина в течение 10- 30 мин; рассеивают бактерии на чашки ЯО 1472509 А 1 бам определения содержания алифатических альдегидов в растворах и может быть применено в сельском хозяйстве, медицине, аналитической химии,биохимии. Целью изобретения являетсяповышение чувствительности способаопределения содержания алифатическихальдегидов в раствореСпособ заключается в том, что клетки альдегидза"висимых мутантов люминесцирующихбактерий РЬо+оЬас 1 ег 1 цт Лс 11 ег илиВепесКеа пагчеу 1 инкубируют в воцномрастворе хлористого натрия с глицерином и Тритоном Х, затем добавляют раствор алифатических альдегидов и регистрируют интенсивностьбиолюминесценции смеси, по которойсудят о содержании альдегидов. Чувствительность предлагаемого способасоставляет 1 10 - 110 мас.% алифатических альдегидов, 1 табл. Петри с твердои средой состава,мас.%: пептон 1-1,5; агар 1,8-2; мясопептонный бульон 5-6; морская во-да 3,6-3,8 на 1 л воды, после чегоотбирают отдельные тусклые колонии,которые отвечают светоизлучениемна добавку 10 -10 % тетрадеканаляи высеивают колонии на жидкую питательную среду состава, мас,%: натрийфосфорнокислый двузамещенный 0,50,7; калий фосфорнокислый одноэамещенный 0,2-0,3; аммоний фосфорнокислый двуэамещенный 0,04-0,06; магнийсернокислый 0,009-0,011; пептон 1,0,дрожжевой экстракт 0,2, хлористыйнатрий 0,3, остальное вода; культивируют при 18-25 С в течение 8-16 ч, 1472509затем осаждают бактерии центрифугированием, отделяют клетки и вносят ихв водный раствор, содержащий, мас.7,:хлористый натрий 0,3-0,5; глицерин0,03-0,05; тритон Х10 -10 ,инкубируют суспензию клеток нри перемешивании при 20-23 С в течение3-4 ч; разводят суспензию клетокводным. раствором хлористого натрия0,15-0,35 мас,7. до оптической плотности 0,1-1, 0; переносят О, 25-1,0 млсуспензии клеток в кювету люминометра; добавляют 0,01-0,05 мл исследуемого раствора и измеряют уровень 15биолюминесценции в течение 5 с,по которому судят о содержании алифатических альдегидов в растворе.Предлагаемый способ имеет пределчувствительности определения альдегидов в 1000 в 100 раз вьппе известного 2,1 ф 10 -10 мас,%), с диапазоном измерения количества альдегида впределах 8 порядков,Материалы, представленные в таблице, иллюстрируют достижение цели.Из таблицы видно, что чувствительность предлагаемого способа в 100010000 раз выше, спектр определенияалифатических альдегидов шире и число используемых мутантов больше,П р и м е р 1, Берут культурулюминесцирующих бактерий Р. ГЫсЬегхс содержанием клеток 10 в 1 мл в0,3 мас.7. хлористого натрия; инкубируют 30 мин с 5 10 мас.7 нитрозо-з35гуанидиномр рассеивают на чашки Петри со средой состава мас.7: пептон 1; агар 2; мясопептонный бульон6;.морская вода 37,5; остальное вода; через 2 суток отбирают отдельныеколонии несветящихся клеток, которыеотвечают светоизлучением на добавку10" % тетрадеканаля; переносят полученные клетки.в жидкую питательнуюсреду состава, мас.%: натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,7; калийфосфорнокислый однозамещенный 0,2;аммоний фосфорнокислый двузамещеи-.ный 0,05; магний сернокислый 0,01;пелтон 1,0; дрожжевой экстракт 0,2;хлористый натрий 0,3; остальное вода;культивируют при 18 С в течение16 ч; сепарируют клетки; инкубируютсуспензию клеток при перемешиваниипри 23 С в течение 3 ч в водномрастворе, содержащем, мас,Е: хлористьп натрий 0,3; глицерин 0,03; Тритон Х10 ; разводят суспензию клеток в 0,35%-ном водном растворехлористого натрия до оптическойплотности 1,0 при 540 нм; переносят1,0 мл суспензии клеток в кюветулюминометра; добавляют 0,01 мл раствора (Е-гексадеценаля и измеряютуровень биолюминесценции в течение5 с, Получают нижний предел определения гексадеценаля, равный1.10 мас.%,П р и м е р 2, Берут культурулюминесцирующих бактерий Р, Ьагеуь.с содержанием клеток 10 в 1 мл втводном растворе 0,3 мас.% хлористого натрия; инкубируют с 10,10 мас,%нитрозогуанидина в течение 20 мин;далее рассеивают на чашки Петри, отбирают колонии альдегидзависимыхклеток, культивируют 8 ч, сепарируют бактерии, как указано в примере 1; инкубируют клетки в водномрастворе, содержащем, мас.7: хлористый натрий 0,4; глицерин 0,04; Тритон Х00 10" в течение 3 ч прио23 С; доводят клетки водным раствором 0,3 мас.% хлористого натрия дооптической плотности 0,3 при 540 нм,переносят 0,5 мл суспензии клетокв кювету люминометра, добавляют0,02 мл раствора с различным содержанием деканаля и измеряют уровеньбиолюминесценции в течение 5 ч, Изтаблицы видно, что предел чувствительности способа на деканаль сос 1)тавляет 1 10 мас.7., диапазон измерения содержания альдегида до1 10 мас.7, т.е. 8 порядков изменения содержания альдегида. П р и м е р 3. Берут культуру люминесцирующих бактерий В, Ьагеу с содержанием клеток 10 в 1 мл8в водном растворе 0,5 мас.7, хлористого натрия, инкубируют с 70 "-э10 мас.% нитрозоуганидина в течение 10 мин; далее рассеивают на чашки Петри, отбирают альдегидзависимые клетки, культивируют 8 ч, сепарируют клетки, как указано в примере 1; инкубируют в водном растворе, содержащем, мас %: хлористый натрий 0,4; глицерин 0,05; Тритон Х10в течение 4 ч при 10 С; доводят клетки водным раствором 0,15 мас.% хлористого натрия до оптической плотности 0,1 при 540 нм, переносят 0,25 мл суспензии клеток в кювету люминофора, добавляют 0,05 мл водноСпособ Чувстви- Опреде- Мутанты лютельность, ляемые минесцирующихмас.Х альдегиды бактерий 10 - 10 Изв естный Р. шапйарашепяя Тетрадеканаль Предлагаемый.1 10 - 10 Тетрадеканаль В. Ьехчеу. Деканаль В. Ьагчеу (Е)-11-гексадеценаль Р. ГхясЬег 10 - 10 10 - 10 5 14725го раствора с различным содержаниемтетрадеканаля и измеряют уровеньбиолюминесценции в течение 5 ч, Каквидно из таблицы нижний предел чув 15ствительности способа составляет1 ф 10 мас.Ж тетрадеканаля,П р и м е р 4. Все операции проводят аналогично примеру 1, но клетки мутантов Р. ЫсЬег инкубируют 10в водном растворе,. содержащем, мас.7.;хлористый натрий 0,2; глицерин 0,02;Тритон Х10 в течение 2 ч прио19 С, все остальные компоненты ипроцедуры неизменны. Получают нижний 15предел определения (Е)-11-гексадеценаля, равный 1 ф 1 0 7, т.е, низкуючувствительность.П р и м е р 5. Все операции проводят аналогично примеру 1, но клетки мутантов В, Ьагеух инкубируютв водном растворе, содержащем, мас,7:хлористый натрий 0,6; глицерин 0,06;Тритон Х10 в течение 5 ч при24 С, Получают нижний предел определения тетрадеканаля, равный 1 ф 10 Е,т,е. низкую чувствительность.Предлагаемый способ по сравнениюс известным повышает чувствительностьопределения содержания алифатических 30альдегидов в растворе,Формула изобретения Способ определения содержания алифатических альдегидов в растворе, включающий инкубацию люминесцирующих 35 бактерий РЬо 1 оЪас 1 егйдп 1 хясЬег и 096Вепес 1 еа Ьагеу 1 в течение 10-30 мин на среде, содержащей нитрозогуанидин, хлористый натрий, пересев бактерий на твердую среду, содержащую пептон, агар-агар, мясопептонный бульон, морскую воду, отбор отдельных тусклых колоний, отвечающих светоизлучением на добавку тетрадеканаля, пересев на жидкую среду, содержащую натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый оцнозамещенный, аммоний фосфорноЪислый двузамещенный, магний сернокислый, пептон, дрожжевой экстракт, хлористый натрий и культивирование при 18 - 25 С в течение 8 - 16 ч, полученную суспензию клеток разводят водным раствором хлористого натрия в концентрации 0,15 - 0,35 мас.Е до оптической плотности 0,1 - 1,0, переносят 0,25 - 1,0 мл суспензии клеток в кювету люминометра, добавляют 0,01 - 0,05 мл исследуемого раствора и оценку результатов проводят по уровню биолюминесценции, о т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью. повыщения чувствительности способа, отбор тусклых колоний ведут при концентрации тетрадеканаля 10-610 мас.7., а после культивирования клеток проводят их истощение в водном растворе, содержащем, мас,Е:Хлористый натрий 0,3-0,5 Тритон Х10- -10" Глицерин 0,03-0,05 в течение 3-4 ч при 20-23 С.