Способ получения микроносителей для культивирования клеток
Формула | Описание | Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Формула
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОНОСИТЕЛЕЙ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК, включающий приготовление желатиновых гранул и их обработку диальдегидом, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения выхода жизнеспособных клеток, желатин механически раскалывают в жидком азоте, полученные гранулы гидратируют, обработку проводят 25%-ным раствором глютарового альдегида из расчета 0,2 - 0,4 мл на 1 г сухого желатина.
Описание
Целью изобретения является упрощение способа и повышение выхода жизнеспособных клеток.
П р и м е р 1. 50 г пищевого желатина помещают в камеру, покрытую теплоизоляционным слоем, и заливают 50-100 мл жидкого азота. С помощью пестика раскалывают желатин до получения осколков требуемого размера, например 70-300 мкм. Измельченный желатин промывают 3-4 раза фосфатно-буферным раствором (рН 7,2-7,4), при этом со смывами удаляют мелкие пылевидные частицы. Используя разную скорость оседания частиц, можно отделить и более крупные гранулы, которые возвращают в камеру для повторного раскалывания. После промывки, при которой происходят одновременно калибровка и гидратирование гранул, проводят стадию обработки сшивающим агентом, для чего к осадку добавляют 15 мл 25%-ного раствора глутарового альдегида. Смесь оставляют на 2-3 ч при комнатной температуре для полимеризации поверхностного слоя. Затем реагент удаляют путем слива и не менее 5-кратного промывания дистиллированной водой. В результате проведенной процедуры получают примерно 550 см3 микроносителей с линейными размерами гранул 100-400 мкм.
П р и м е р 2. 50 г пищевого желатина размалывают в течение 3-4 мин между стальными дисками с регулируемым зазором при постоянной подаче в камеру жидкого азота (общий расход азота не превышает 200 мл). Полученные частицы промывают 3-4 раза дистиллированной водой. Далее процедуру повторяют, как описано в примере 1. В результате получают микроносители (общий объем около 600 см3) с линейным размером гранул 150-250 мкм.
П р и м е р 3. 30 мл плотного осадка готовых микроносителей, полученных, как в примерах 1 и 2, стерилизуют автоклавированием (0,7 атм, 45 мин) в фосфатно-буферном растворе. Затем буфер удаляют и осадок промывают одноразово питательной средой. Если микроноситель хранится в этиловом спирте, то автоклавирования не производят, а перед употреблением его промывают несколько раз фосфатно-буферным раствором и питательной средой.
К промытому микроносителю добавляют суспензию клеток ВНК-21 из расчета (0,6-0,7)
107 клеток/см3 микроносителя и проводят адсорбцию в течение 5 ч. После прикрепления клеток к поверхности гранул всю систему клетки - микроноситель переносят в 5-литровый биореактор с перемешивающим устройством, доводят объем до 3,0 л, добавляя питательную среду с 10% сыворотки крупного рогатого скота, и проводят культивирование при известных условиях. Через 36-60 ч на поверхности всех гранул образуется плотный пласт клеток, который длительное время может удерживаться на микроносителях (более 120 ч).Аналогичным образом культивируют клетки других линий, например МДБК, ТR, ПО, ПТ-80, и первично трипсинизированные клетки.
Таким образом, микроносители пригодны для культивирования различных типов клеток.
Простота и технологичность способа делает данный микроноситель более доступным и дешевым по сравнению с известными, что позволит широко использовать его в ветеринарной и медицинской практике для производства клеточных культур и вирусов.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению клеточных культур. Целью изобретения является упрощение способа и повышение выхода жизнеспособных клеток. Микроносители получают механическим раскалыванием желатина до заданных размеров в присутствии жидкого азота, их гидратирование проводят одновременно с отмывкой и калибровкой с помощью солевых растворов или дистиллированной воды, обработку 25%-ным раствором глутарового альдегида ведут из расчета 0,2 - 0,4 мл реагента на 1 г сухого желатина с последующей отмывкой дистиллированной водой. На микроносителях, полученных данным способом, культивируют клетки разных типов перевиваемых линий и первично трипсинизированные. Через 38 - 60 ч культивирования на поверхности микроносителей образуется плотный пласт клеток, который может длительно удерживаться на поверхности гранул микроносителя (более 120 ч).
Заявка
4434120/13, 19.04.1988
Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности
Иванов В. С, Пухова Н. М, Хайкина Л. С, Сенько Е. Ф
МПК / Метки
Метки: клеток, культивирования, микроносителей
Опубликовано: 10.03.1995
Код ссылки
<a href="https://patents.su/0-1565026-sposob-polucheniya-mikronositelejj-dlya-kultivirovaniya-kletok.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения микроносителей для культивирования клеток</a>
Способ получения желатиновых микроносителей для культивирования клеток
Номер патента: 1321748
Опубликовано: 07.07.1987
Авторы: Грачев, Гутманис, Завальный, Зицманис, Клявиньш, Попова
МПК: C12N 5/00
Метки: желатиновых, клеток, культивирования, микроносителей
...микроносителей обеспечивает культуральную площадь около 50 см/мл,оКультивирование проводят при 37 Си плавном перемешиваниц суспензии микроцосцтелей: в первые сутки культи - вирования со скоростью 10 об/мцн, во вторые и третьи - 20 об/мин, а далее 50-60 об/мин, Начиная со вторых суток культивирования, ежесуточно проводят замечу части среды; на вторые и третьи сутки - 507. объема среды, далее 707 объема среды, Спустя 5-6 сут после начала культивирова. ния, на частццах микроносителей формируются сливные культуры первичных клеток куриных эмбрионов. Плотность культур к концу срока культивирования (6 сут) достигает 5,80,3 млн.кл/мл, т,е. число первичных клеток куриных эмбрионов возрастает в11 раз за 6 суток,Подсчет числа клеток,...
Способ анализа смеси азотная кислота-пятиокись азота четырехокись азота
Номер патента: 1179199
Опубликовано: 15.09.1985
Авторы: Амирова, Бусыгина, Гарифзянов, Каргин, Марченко, Смоленцев, Хусаенов, Чичиров
МПК: G01N 27/52
Метки: азота, азотная, анализа, кислота-пятиокись, смеси, четырехокись
...содержание четырехокиси азота в растворе, вблизи точки, соответствующей Е(Сйо 4) и по приведенной формуле определяется концентрация И 04 в ис,ходном раствореК Вн О 4 Ь + Ь Р )я 204 5 О где Ся о - содержание И 04 в исое 1 4ходном растворе, вес.%Су 04- содержание Н 04 вКт 4 55растворе вблизи точки,соответствующей Ен,вес. %; 199в, - масса исходного растКвора, г;Чт - объем добавленноготитранта, мл,Рт - плотность титранта,г/см .Далее по графику (Фиг. 3), связывающему положение точки перегиба(9 п) с содержанием четырехокиси азота в растворе, находим поправочнуюконцентрацию пятиокиси азота (Сц о ),а затем по Формуле определяют содержание И, Ор в исходном растворе,иЧтРтСно 10818. гпоЯ О (2огде Ся о - содержание И,О в исходном...
Способ получения биомассы
Номер патента: 421199
Опубликовано: 25.03.1974
Авторы: Джеймс, Джон, Иностранцы, Институт, Нострапна
Метки: биомассы
...чем на 50% против обычно содержащихся в среде А. 4,021,361,000,200,000750,00050,000190,00015 Иа,НРО, 7 НОКН,РО(ИН 4)804МАЗО,.Н,ОСаС 1,ге 804 7 Н,ОМпЮ, НОМоОз 4,02 1,36 1,00 0,20 0,0075 0,005 0,0019 0,0015 4,02 1,36 1,00 0,20 4,02 1,36 1,00 Время удвоения АТСС 21310 Сухой вес АТСС 21310, мг/мл среды Содержание азота АТСС 21320, вес, о Клеточный азот, мг/мл среды Наличный неорганический азот, утилизованный клетками, вес. Ц Содержание протеина АТСС 21310,вес, ,Г Полученные результаты показывают, что содержание протеина у клеток примерно одинаково и независимо от выбранного источника азота. Ион аммония обеспечивает более короткие промежутки времени удвоения, более высокие плотности клеточного материала и более высокую степень утилизации...
Способ приготовления корма из растительного сырья для сельскохозяйственных животных
Номер патента: 1255096
Опубликовано: 07.09.1986
Авторы: Ахмедов, Ездаков, Ицыгин, Огрызкин, Павлова
МПК: A23K 1/12
Метки: животных, корма, приготовления, растительного, сельскохозяйственных, сырья
...кг. Ферментативный гидролиз прооводят в течение 50 мин при 45 С. После гидролиза смесь нагревают острымопаром до 80 С и выдерживают в течение 15 мин для инактивации ферментовВ последующем в массу вводят минеральные источники азота, фосфора,калия, серы, магния, хлора и натрия.Температуру смеси снижают до 28 Си в нее вводят суспензию дрожжейСапйЫа Тгорхса 3 Лз штамм КС(100 млн, клеток в 1 мл) в количестве 6,0 л. Массу дрожжуют в течениеэ. Э9 ч при аэрации 1 м воздуха на 1 мв течение 2 мин через каждые 20 минПо истечении времени дрожжеваниякорм готов к скармливанию. При необходимости корм сушат на АВМ,5 игранулируют.П р и м е р 2. Готовят состав ис-.ходных компонентов корма в количестве 1000 кг, содержащий, кг;Клевер в стадиибутонизации...
Способ получения -лактамов (его варианты)
Номер патента: 1272981
Опубликовано: 23.11.1986
Авторы: Алан, Вильям, Дэвид, Кристофер, Ричард
МПК: C07D 201/02, C07D 205/08
Метки: варианты, его, лактамов
...р и м е р ы 133-134, Выполнение процедуры примера 70, но замена калиевой соли д.ЗБ(Е)3-3-(2-амино- -тиазолил)2-(дифенилметокси)-2-окКолонка 1133, ЗБ(Е)1-3- Ш 2-Амино-тиазолил)-12-(1,1-диметилэтокси)-1-(метилтио)-2-оксоэтокси имино 1 ацетил амино"1-2-оксо-азетидинсульфокислота, калиевая соль (см. пример 78)134. ЗБ(Б" ) -2-Оксо- 2-оксо-З-, (Ьенилметокси)-карбонил)амино)- -1-имидазолидинилкарбонил 1 аминофесоэтоксиимино 1 ацетиламино-оксо- -1-азетидинсульфокислоты соединениями,перечисленными в колонке 1, дает соединения, перечисленные в колонке 11,Колонка 11ЗБ(ЕЦ -3- (2-амино-тиазолил)- -карбокси(метилтио)метокси 1 имино 1 ацетиламино 1-2-оксо-азетидинсульфокислота калиевая соль (1:2), т. пл, 165 С...
Предыдущий патент: Гранулятор расплавов
Следующий патент: Изложница для отливки заготовок, раскатных колес, труб, колец
Случайный патент: Дизельная форсунка