Способ получения эфиров андростан-17 -карбоновой кислоты

где Х - хлор или ФторХ - водород;К - линейный или разветвленный(С -С -алкил или С -С-цик 1 з 5лоалкил, или дициклогексилметильная группа, или / -хлорэтильная группа;16-метильная группа находитсяв- положении10или Х=Х= Р;К- изопропил,16-метильная группа находитсяв О -положении.Цель изобретения - получение новых глюкокортикостероидов, обладающих более ярко выраженными локальными противовоспалительными и антиаллергическими действиями.,П р и м е р 1, Получение 1-этоксикарбонилоксиэтил-Фтор-окси 16-метил-оксор(-пропионилоксиандроста,4-диен-карбоксилата,Смесь раствора 4,0 г бетаметазона в 45 мл тетрагидрофурана и 7,0 г 25иодной кислоты, растворенной в 25 млводы, перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, после чегодобавляют 40 мл воды и отгоняют органический растворитель при пониженном давлении. Остаток в виде кристаллического осадка отфильтровывают,промывают водок и высушивают.В результате получают 4,0 г 9 Фтор, 17 К-диокси-метил-ок 35соандроста,4-диен-карбоновойкислотыПолученную кислоту суспендируютв 80 мл хлористого метилена и 4,1 млтриэтиламина и добавляют к суспензиипри 0 С 3,5 мл пропионилхлорида. После перемешивания в течение 80 мин прио0 С реакционную смесь разбавляют хлористым метиленом и последовательнопромывают ЗЖ-ным раствором бикарбоната натрия, 2 .н, соляной кислотой иводой, а затем высушивают и упаривают в вакууме.Твердый остаток обрабатывают втечение 9 Э мин при комнатной температуре раствором 3,0 мл диэтиламинав 130 мл ацетона, После отгонки органического растворителя к смеси добавляют воду и проводят экстракциюэтилацетатом, После подкисления 2 н,соляной кислотой и экстракции этил-.ацетатом с последующей обычной обработкой получают 3,8 г 9 Ж-фторокси-метил-оксо(-пропионилоксиандроста,4-диен/3-карбоновойкислоты в виде белого кристаллического порошка.Смесь 9 М-фтор/5, 170-диоксиметил-З-оксоандроста,4-диен/5 карбоновой кислоты (2,5 г), 800 мгбикарбоната калия, 10,5 мг 18-краун и 1,2 г хлорэтилкарбоната в 50 мл диметилформамида перемешивают в течение 3 ч при 80 пС. Реакционную смесьзатем разбавляют 200 мл 10 Ж-ногораствора хлористого натрия и триждыэкстрагируют хлористым метиленом,порциями по 100 мл, Органическую фазу промывают последовательно 100 мл5 Е-ного раствора бикарбоната натрияи трижды водой по 75 мл, высушиваюти упаривают в вакууме,По данным хроматографии на Берйайех ЬНс использованием в качестве подвижной Фазы хлороформа образующийся продукт представляет собойсмесь эпимеров целевого соединенияПосле хроматографии на Яерпайех"ЬНс использованием в качествеподвижной Фазы смеси гептана, хлороформа и этанола в соотношении 20:20:1получают, как это следует из данныхвысокоскоростной жидкостной колоночной хроматографии, отдельные эпимерыс высокой степенью чистоты,Эпимер А: 1,14 г (727 теор.),т.пл. 187-190 ОС; К 86,7 (с= 0,2 СНС 1); высокоскоростная жидкостная колоночная хроматография99,33,МС-С 1 (СН): МН = 551; М + 29 == 0,2 СН С 1 ); высокоскоростная жидкостная колоночная хроматография99,2%,МС-С 1 (СН 4): МН = 551, М + 29 щ-О-СН-О).СН 3При проведении этерификации при80 С в течение 3 ч, но без добавкио18-краунвыход смеси эпимеров целевого соединения составляет 847Смесь 435 мг 901;фтор(3"оксифметил-З-оксоф,-пропионилоксиандроста,4-диенф-карбоновой кислоты,111 мг бикарбоната калия и 209 мг,;бромэтилкарбоната в 50 мл ацетонитрила перемешивают в течение 5 ч при40 С. После этого растворитель отго няют в вакууме, а остаток растворяютв хлористом метилене. Органическуюфазу последовательно промывают 5 .-нымраствором бикарбоната натрия и водой,высушивают и упаривают в вакууме.После хроматографического разделенияполучают 155 мг чистого эпимера Аи 170 мг чистого эгимера В 1 -этоксикарбонилоксиэтил-фторЩ-окси 16-метил-оксоК-пропионилоксиандроста,4-диен-карбоксилата.Указанную реакцию можно также про 1водить в среде, например, диметилформамцда или диметилсульфоксида,Смесь 250 мг 91-фтор-оксиРметил-оксоК-пропионилоксиандроста,4-диен-карбоновой кислоты,69 мг бикарбоната калия, 102 мгЫ-хлорэтилкарбоната и 240 мг бромистого лития в 25 мл ацетона кипятят втечение 17 ч с обратным холодильником. Получают 20 мг смеси эпимеров1 -этоксикарбонилоксиэтилЫ-фтор 11 р-окси-метил-оксо-пропионилоксиандроста,4-диен-карбоксилата.Если кипятить 2 ч с обратным холодильником смесь 1,5 г М -хлорэтилкарбоната и 3,4 г бромистого литияв ацетоне, то образуется 0,8 г маслянистой жидкости Ф -хлорзтилкарбоната (58 ) и М -бромэтилкарбоната (42 ).К калиевой соли 9 М;фторР-окси 16-метил"оксо"17 о(;пропионилоксиандроста,4-диен(3-карбоновой кислоты (475 мг) в смеси 20 мл хлористогометилена и 10 мл воды добавляют приперемешивании 340 мг гидросульфататетрабуталаммония рН смеси устанавливают равным 7, добавляя к ней 2 Игидроокись натрия. Органический растворитель отгоняют, а остаток растворяют в 50 мл ацетона и добавляют к растнору 150 мл Ы -хлорэтил этилкарбоната, Раствор перемешивают в течение4 ч при 50 оС. После этого ацетон отгоняют в вакууме, а остаток подвергаютэкстракции Н-бутилацетатом. Органическую фазу промывают З -ным раствором бикарбоната натрия и дважды водой, высушивают и упаривают. С помощью хроматографического разделенияполучают чистые эпимеры А (81 мг)и В,(83 мг) целевого соединения. 4161 бК раствору 451 мг 9 о-фтор-окси-метил-оксо-пропионилоксиандроста,4-диен-карбоновой5кислоты и 152 мг 1,5-диазабицикло(5,4,0) ундеценв 10 мл бензола добавляют раствор М, -хлорзтил этилкарбоната (152 мг) в 5 мл бензола. Раствор кипятят в течение 6 ч с обратным10 холодильником при перемешивании,после чего оставляют на ночь при комнатной температуре. Затем раствори=тель отгоняют в вакууме, а остатокрастворяют в хлористым метилене, про 15 мывают бикарбонатом натрия и дваждыводой, высушивают и упаривают. С помощью хроматографического разделенияполучают чистые эпимеры А (48 мг) иВ (55 мг) целевого соединения,П р и м е р 2, Получение 1 -изопропилкарбамоилоксиэтил(-, фтор-окси-метил-оксоК-пропионилок сиандроста,4-диен-карбоксилата.При нагреве в течение 3 ч при80 С 1,4 г 90(-, фторР-оксиР-метил"оксо-пропионилоксиандроста 1 4-диен-карбоновой кислоты сУГ450 мг бикарбоната калия и 695 мг 1хлорэтилизопропилкарбамата (получен 30 ного из ф-хлорэтилхлорформиата иизопропиламина в среде диэтиловогоэфира) в 30 мп диметилформамида споследующей обработкой по примеру 1получают эпимер А (110 мг, т,пл. 210214 С; высокоскоростная жидкостнаяо,колоночная хроматография 99,7 ; ЯМР= 592) и эпимер В (28 мг, т.пл. 18340 186 С, высокоскоростная жидкостнаяколоночная хроматография 99,1 ; ЯМРда при комнатной температуре в течение 48 ч с последующей обработкойпо примеру 1 получают эпимер А(120 мг, т.пл, 184-187 С, высокоскоростная жидкостная колоночная хроматография 99,8/; ЯМР ( Н): 6,71 ррш(квартет, О-СН(СН)-0-); МС-С 1 (СН ):ИН г = 606; М) + 29 = 634) и эпимерВ (104 мг, т.пл. 156-160 С; высокоскоростная жидкостная колоночная хроматография 99,8 Е; ЯИР (" Н); 6,81 ррш(полученного путем взаимодействияхлористого ацетила, паральдегида ихлористого цинка при "10 ОС в течение2 ч в атмосфере азота) в 40 мл диметилформамида при 50 С в течение 20 чс йоследующей обработкой по примеру1, получают эпимер А (391 мг, высокоскоростная жидкостная колоночная хро-матография 99,7/, ЯИР ( Н); 6,79 ррш, 35МН+ = 521; М+ + 29 = 549) и эпимерВ (393 мг, ,пл, 211-212 С; высокоскоростная жидкостная колоночная хроматография 99,8%, ЯМР(н): 6,93 ррш(СН): МН = 521 М+ + 29 = 549) 1ацетилоксиэтилК-фтор-оксиметил-оксо-пропионилоксиандроста,4-диен-карбоксилата. 45П р и м е р 5. Получение 1 -изо)пропилтиокарбонилоксиэтилЫ-фтор 11)-оксибр-метил-оксо-пропионилоксиандроста,4-диен-карбоксилата,50При взаимодействии 1,0 г 9 ф-фтор 11-окси-метил-оксоМ-пропионилоксиандроста,4-диенр-карбоновой кислоты с 350 мг бикарбоната калия и 600 мг М-хлорэтил-изопро)5. взаимодействия р 6 -хлорэтилхлорформиата и 2"пропантиола в среде пиридинаи диэтилового эФира) в 20 мл диметилформамида при комнатной температуре в течение 48 ч с последующей обработкой по примеру 1 получают эпимер А (14 мг, ЯМР ( Н); 6,92 ррш (квартет, О-СН(СН,)-О-) МС-С 1 (СН ): МН =У ф а = 581, М + 29 = 609) и эпимер В (18 мг, ЯМР ( Н): 6,98 ррш (квартет, -О-СН(СН )-0-); МС-С 1 (Сн ): = 581) 1 -изопропилтиокарбонилоксиэтилЫ-фтор-окси-метил-оксоК-пропионилоксиандроста,4-диен-карбоксилата.В табл.1 приведены составы и свой" ства соединений по примерам 6-23, полученных аналогично примерам 1-5,Биологические испытания.Для характеристики противовоспалительной активности целевых соединений использовалось их свойство как глюкокортикоидного рецептора, Их рецепторные свойства сравнивали с аналогичными свойствами будезонида (222, 8-16, 170-бутилидендиокси, 21-ди" оксипрегна,4-диен-З, 20-диона), являющегося высокоактивным глюкокортикоидом с благоприятным соотношением локального и систематического эффекта.В опытах использовали самцов крыс Бргаде-Паю 1 еу в возрасте от одного до двух месяцев, Животным удаляли зобную железу и помещали ее в охлажденный льдом рассол. Ткань гомогенизировали в гомогенизаторе в 10 мл буферного раствора с рН 7,4, содержащего 20 мМ триметилоламинометана, 1 О(масса/объем) .глицерола, 1 мМ ЭДТА, 20 мМ БаИоО), и 10 мМ меркаптоэтанола. Гомогенизат центрифугировали в течение 15 мин при 20000 д, Порции надосадочной жидкости (230 мкл) выдерживали в течение 24 ч при 0 С с 100 мкл фенилметилсульфонилфторида (ингибитор эстеразы конечная концентрация 0,5 мМ), 20 мкл немеченого компетитора и 50 мкл меченного тритием декса" метазона (конечная концентрация 3 нМ), Связанный и свободный стероиды разде". ляли, выдерживая смесь в 60 мкл 25 -ного (масса/объем) древесного угля и 0,25 -ной,(масса/объем) суспензии декстрана.Т 70 в буфере с рН 7,4, содержащем 20 нМ триметиламинометана, 1 мМ ЭДТА и 20 нМ ИаМоО в течение 10 мин при 0 С, После центрифугирования в течение 10 мин при 500 е отбирали 230 мкл надосадочной жидкости и определяли ее активность9 160416в 1 О мл паа"геля на сцинтилляционном спектрофотометре Рас 1 агд. Указанные пробы надосадочной жидкостивыдерживали с а) меченным тритиемдексаметазоном; б) меченным тритием5дексаметазоном с добавкой 1000-кратного избытка немеченого дексаметазона, в) меченным тритием дексаметазоном с добавкой 1000-кратного избытка немеченого дексаметазона; г)меченным тритием дексаметазоном сдобавкой 0,03-300-кратного избыткакомпетитора. Неспецифическую связьопределяли при добавке 1000-кратногоизбытка немеченого дексаметазонак дексаметазону, меченному тритием,Радиоактивная связь с рецепторомв присутствии компетитора, деленнаяна радиоактивную связь с рецептором 20в отсутствие компетитора и помноженная на 100, дает специфическую связьо процентах меченого дексаметазона.Для каждой концентрации компетиторапостроили график зависимости специфически связанной:радиоактивности(в %) от логарифма концентрации компетитора. Из полученных кривых нахо;дили 50%-ный уровень специфическойсвязи (ИВА) и сравнивали его с уровнем будезонида.Данные представлены в табл.2.Противовоспалительное действиецелевых соединений,Дифференциацию между действиемглюкокортикоида в области обработан-.ных легких и вне этого участка проводили следующим образом.Крыс штамма Яргадие Рач 1 еу весомпо 225 г анестезировали эфиром, глюкокортикоидный тестовый препарат вобъеме 0,5 мл/кг инстиллировали прямо в левое легкое. Спустя 2 ч суспензию сефадекса 5 мг/кг в объеме1 мг/кг инстиллировали в трахею над 45бифуркацией, так что суспензия попадала как в левое, так и в правоелегкое, Через 20 ч крыс умерщвляли,иссекали левое и правое легкие йот-дельно взвешивали. Контрольнойгруппе вводили носитель вместо глюкокортикоида и солевой раствор вместосуспензии сефадекса.Результаты сравнительных исследований представлены в табл,3, Фармакологические свойства целевых соединений сравнивали с будезонидом, выбранным в качестве обычного глюкокортикоида, обладающего некоторой ло1 10 кальной активностью, установленной при проведении кожных тестов,Предлагаемые соединения обладают гораздо более высокой селективной активностью при нанесении в область легких. Все они полно блокируют отек левого легкого, что, как оказалось, сочетается с очень низким или умеренным защитным действием в другому- легком.Все предлагаемые соединения мало- токсичны,Предлагаемые соединения обладают выраженным локальным антиаллергическим действием. Формула изобретенияСпособ получения эфиров андростан-карбоновой кислоты общей формулы сн, оо - сн - о- с - о - , 1 о=с осос,н,СНЗ о1х где Х 1 - фтор или хлор; Х - водород, К - линейный или разветвленный 1 С 1-С -алкил или С -С -цик 5 Э 6 лоалкил, или дициклогексилметильная группа, или 1-хлорэтильная группа; 16-метильная группа находится,в Р-положении; или .Х Х фтору. К 1 - этил или изопропил; 16-метильная группа находится:в ь 1,-положении, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что соединение формулы11 1604161 12где Х и Х имеют указанные значения; где К имеют укаэанные значения;или его соль щелочного металла под- Л - хлор или бром,вергают взаимодействию с соединени- с последующим хроматографическим выем общей формулы5делением эпимеров целевых соединен-ся(СН 5)-о-сооКний с активным центром по эфирнойгруппе. 1ТаЬп,и па 1 Х . 16-Ие т160416 14 Продолжение табл,2 3 Таблица 3Отек легких, вызванный Сефадексом Фактор разделения левое-правое легкое для ингибирования при ЗДСоединение по примеру,У 17 В 20 В Составитель И, ФедосееваРедактор Л. Пчолинская Техред М.Дндык Корректор 1 ф Самборская Заказ 3395 Тираж 282 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по иэобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раущская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 1 В 12 В 13 В 14 15 В 16 В 17 В 18 В 19 В 20 В 21 В Бутезонид17 В8 В9 А+9 В12 В13 В15 А + 15 В 0,821,31,21,10,451,261,00,581,20,990,28 0,872,61,66,27,05,64,110,02,09,11,8