Способ получения полипептидов

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯЯ ПАТЕНТУ Союа СоветскихСоциалистическихРеспублик 1 ц 884565(3) 7576/77; 7577/77; (33) Швейцария7513/77; 13862/77Опубликовано 23.11.81 Бюллетень43 Государственный комитет СССР но делам нэаоретеннй н открмтнйДата опубликования описания 23.11.81 ИностранцыФрансуа Кардино, Янош Плесс(72) Авторы изобретения Иностранная фирма(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ 20, 11 1Изобретение относится к способу получения новых полипептидов - биологически-активных соединений, которые могут найти применение в медицине.Известны способы получения пептидов путем отщемления защитных групп от соответствующих защищенных по ами"ногруппе пептидов. Использование известного метода позволяет получить новые пептиды, обладающие интересными фармакодинамическими свойствами 11.Цель изобретения - получение новых биологически-активных полипептидов, расширение арсенала средств воздействия на живой организм. 15Поставленная цель достигается способом получения полипептидов Формулы А-В-С 1 у-О, (Х) где А - остаток Формулый НО СН, - С - СО -МН 7. де В- водород; В- водород или вместе с В- СН-СН-группа; 22 - водород, алкил (С.), алкенил (С ), цикпопропилметил,циклобутилметил или ВСО-,где В- остаток 1.-аминокислоты, 1.-аланин, 1.-глутамин,1.-метионин, 1-тироэин, 1.-триптофил, -фенилаланин, 1.-метилтриптофил или В-метионинсульфоксид, 1.-метионинсульфон,1-3,4-диоксифенилаланин, причем свободные аминогруппымогут быть замещены алкилом(С 1,1), причем, если В-О-аланин, Вне может быть фенилаланином или тирозином,В - О-аланин, О-серии, О-метионин,О-метионинсульфоксид, О-мети"онинсульфон, остаток д -амино"масляной кислоты (А 1 Ь);О - остаток формулы5 8845 3,8 г Н-Мес-С 1 у-ОН (трифторацетат), который предварительно получают из Вос-О-Мес-С 1 у-ОН посредством обработки последнего смесью трифторуксусной кислоты и хлористого метилена, взятыхв соотношении 1;1, и 3,3 мл триэтиламина. Через 2 ч раствор упаривают в вакууме, полученный остаток разбавляют 150 мл воды и производят обработку реакционной смеси так, как описано ф в пункте а. Указанное соединение кристаллизуют из смеси этилового спирта и петролейного эфира. Температура разложения продукта 195 С;( с. ) = +11,6 ц(с = 1,0 в диметилформамиде).с) Вос-МеРЬе"Мей"ОВ.Раствор 3,1 г Вос-МеРЬе-ОН в 30 мл тетрагидрофурана охлаждают до -20 С при перемешисании добавляют к нему 1,45 мл й-этилморфолина, затем добав ляют 1,45 мл изобутилового эфира хлор- муравьиной кислоты, после чего продолжают перемешивание реакционной смеси в течение 5 мин при -20 С. Затем к реакционной смеси прибавляют охлажденный раствор 1,80 г метионинола в 8 мл тетрагидрофурана и реакционную массу выдерживают в течение 2 ч при температуре от -5 до 0 С, после чего перемешивание продолжают в течение 30 2 ч при комнатной температуре Непосредственно после этого реакционную .массу разбавляют350 мл этилового эфира уксусной кислоты, раствор несколько раз промывают водой 1 н. 35 лимонной кислоты, 104-ным раствором кислого углекислого калия, 303-ным раствором хлористого натрия. Затем органическую фазу сушат сернокислым натрием, упаривают раствор, получают 4 о Вос-МеРЬе-Мей-ОВ в виде аморфного продукта; ()= -54 (с = 1,24 в метиловом спирте).б) Н-МеРЬе-Мей-ОВ (трифторацетат).,Раствор 4,3 г Вос-МеРЬе-Мей-ОЙ в аз 20 мл хлористого метилена, 5 мл СН- -СН-СН и 0,2 мл Н 5-СН-СН-ОН смешивают при ОС с 40 мл 983-ный трифтор-. уксусной кислоты. Реакционную смесь выдерживают в течение 1,5 ч при ком- о натной температуре, затем упаривают в вакууме до 5- 10 мл. Продукт дважды переосаждают из смеси диэтилового и петролейного эфиров, Маслообразный продукт сушат в глубоком вакууме,Получают Н-МеРЬе-Мей-ОЙ (трифторацетат) в виде аморфного продукта;,(с- )10 + 3,2. (с = 0,98 в метиловом спирте) .е) Вос-Туг-О-Ме-С 1 у-МеРЬе-Мей-ОВ. 65 аК 47 г Вос-Туг"О-Мей-С 1 у-ОН,2,7 г 1-оксибензотриазола, 4,1 гН-МеРЬе-Ией(трифторацетат) и1,1 мл М-метилморфолина в 40 мл диметилформамида прибавляют при 0 С,2,3 г дициклогексилкарбоди;мда.Реакционную смесь выдерживают в течение1 ч при 0 С и в течение 15 ч при комнатной температуре, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме,полученный остаток растворяют в этиловом эфире уксусной кислоты и раствор несколько раз промывают разбавленным раствором кислого углекислогокалия, соляной кислотой и водой, послечего растворитель отгоняют в вакууме,Полученный остаток чистят с помощьюхроматографии на колонке, заполненнойсиликагелем, используя для элюирования смесь хлористого метилена и метилового спирта. Получают указанноесоединение в виде аморфного продукта;( ) = - 23,3 (с 1,2 в диметилФормамиде),П р и м е р 2. Н-Туг-О-Мег(0)-С 1 у-МеРЬе-МеТ(0)-0 (трифторацетвт).7,9 г Вос-Туг-Мей(О)-С 1 уМеРЬе-Мей(0)-01 растворяют при 22 Св 100 мл смеси трифторуксусной кислоты и хлористого метилена, взятых всоотношении 1:1. Через 5 мин растворупаривают в вакууме и осаждают указанное соединение диэтиловым эфиром;(3.)= -3,1 (с = 1 в 953-ной уксусной кислоте).Примененный в качестве исходногоматериала Вос-Туг-Мес(0)-С 1 у-МеРЬеМей(0)-01 получают следующим способом.К раствору 7,5 г Вос-Туг-МейС 1 у-МеРЬе-Мейв 75 мл уксуснойкислоты при 22 С прибавляют 2,0 мл11 М перекиси водорода. Через 5 минреакционную смесь вводят при перемешивании в 1,5 л диэтилового эфира и отделяют выделившийся в осадок неочищенный продукт фильтрованием.Неочищенный продукт чистят с помощью хроматографии на силикагеле, используя для элюирования смесь метилового спирта и хлористого метилена, Указанное в заголовке соединение получают в аморфной форме, причем продукт тотчас подвергают обработке трифторуксусной кислотойПо аналогиии с приведенными приме" рами, при использовании соответствующих исходных соединений, получают пептиды, укаэанные в табл, 1 и 2,-Туг -Туг РЬе РЬе МеРЬе МеРЬе МеРЬе Мей(0)-0Мей(0)-0ецРгого-О Форма с -соли АсОНград ТФУ +1,0 ТФУ +28, ТФУ +2 9 ТФУ +25 5ТФУ +23,НС -53,5 0 ТФУ -8,2ТФУ -5,ТФУ +17, ТФУ -8,1(Р-форма) Соединение формулы ЧО ща2 2 форма ()Ю 1 соли Ра вАсОН 95 т ТФУ -35,7 НС 1 -18,9 24 формула изобретения 1. Способ получения полипептидов 40формулы 1-Н н(Ь О или 1) СНВ- водород;30Р - водород или вместе с Я,1.-метионине .-тирозин, .-триптофил, -фенилаланин, -метилтрифтопил или Р- .-метио 40нинсульфоксид, .-метионинсуль.Фон, .-3,4-диоксифенилаланин,причем свободные аминогруппымогут быть замещены алкилом(С,( ), причем В - О"аланин,Вне может быть фенилалани 45ном или тирозином;В - О-аланин, О-серин, О-метионин,О-метионинсульфоксид, О-метио- нинсульфон, остаток с -аминомасляной кислоты (АЬ)О - остаток формулы-("(-СН - СО личаюестве без" льзуют трилористом кам; В- все укагде В 4- водород остаток-- СН - СН ОНгде Ву водород СН3Р- а) -СН - СНСНб) -СН, СНСН(О) г (г = 1,2); остатки А и О имеют конфигурацию . или О.-ряда; : -конфигура цию 1,О или О.-ряда, если Ви В вместе означают -СН-СН-групйуе А также может иметь О-конфигурацию, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, замещенный полипептид с последовательностью аминбкислот, отвечающих формуле 1, подвергают деблокированию в безводной кислой среде. 2. Способ по и.1, ощ и й с я тем, что в кводной кислой среды испфторуксусную кислоту вметилене,Приоритет по призна16.05 77 при д - Рзанные значения;.-метионин, -метионинсульфоксид.21.06.77 при А - Р 1,Р -все указанные значения;2 - водород, алкил (С -С.), алкенил (С-С), циклопропилметил, циклобутилметил, или группа ВСО , гдеРЪ-остаток 1.-аминокислоты; аланин,12 глутамин, метионин, триптофил, фенилаланин, метионинсульфоксид, метионинсульфон;В - О-алании, О-метионин, Огме" з тионинсульфоксид, О-метионинсульфон;О - Р водородб, метил;Р и Р, вместе означают, аланин, глутамин, метионин, триптофил;фенилаланин, метионинсульфоксид,метионинсульфон или 3,4-диоксифенилаланин, свободные аииногруппы востатке Рмогут быть замещены алкилом (С,) .23.06.77 при А - Ри В вместе-СН-СН-, А имеет О-конфигурацию;все указанные значения;В - О-алании, О-метионин, О-метионинсульфоксид, О-метионинсульфон;О - все указанные значения;.Е - все указанные значения.14.11.77 при А,О, - все указанные значения;30В - О-серии.Источники информации,принятые во внимание при экспертизеШредер Э., Любке К. Пептиды,М., "Мир", 1967, ч,1, с. 112. Составитель В. ВолковаТехред А.Савка Корректор Г. Назарова Редактор А. Шишкина филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Заказ 10271/89 тираж 446 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5