Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов

.Л. Тинцев ий,(72) Авторы изобретен сокомолекулярньдерной физикиаследоватещ ский ого Знамени институтенинградский института и Всесоюзный научигриппа Ордена Трудового Кра оединений АН СССР,м. Б. П. Константино институт1) Заявител ь, с,НИТЕВИХ ИВАЦИ ЫХ К 2,лля живых организмовесобеяяо при внутивенном применении, использование культуральной среды, состоящий иэ набора 20незаменимых аминокислот.Целью изобретения является разработка способа термоактивапии полирибонуклеотидного комплекса, расширяющего арсенал воздействия на живой организм,Поставленная цель достигается исползованием в качестве двунитевого долирибонуклеотидного комплекса нетоксичногополйрибонуклеотидного комплекса полирибогуаниловой (поли-Г) и полирибоцитидиловой (поли-Ц) кислот с молярным соотношением полимеров в комплексе 1;1 и молекулярным весом 300,000-600,000дальтон и проведением процесса путемпрогревания при 90-100 С в присутствии0,05-0,3 М раствора хлористого натрияв фосфатном уфере в течение 2-30 мин,что позволяет получить препарат, не содержащий токсичных комплексов н вредныхдля живого организма ионов Са нлиД.,Мд+ среда же (хлористый натрий в фос(54) СПОСОБ ТЕРМОАК ПОЛИРИБОНУКЛЕОТИД Изобретение относится к способу тер моактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов, обладающих интерфероногенными и противовирусными свойствами.Известен способ термоактивации двунитевых полнрибенуклеотидных комплексов (комплексы полиинозиновой и полипитидиловой кислот, полиуридиловой и полиадениловой кислот), заключающийся в прогреве1 О растворов комплексов в культуральной среде, состоящей из набора .20 аминокислот, с добавкой ионов двухвалентного металла (например, Са + нли Мр+) при 32- 56 С в течение 1 мин - 5 ч Щ ,Недостатками известного способа термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов являются плохая воспроизводимость термоактивации, получение препарата, содержащего токсичные высокоактивные полирибонуклеотидные комплексы, введение в водный раствор комплексов ионов двухввлентного металла, что приводит к нежелательным побочным аффектам нова, Н. С, Сидорова Аксенов и А. А. Сморо.71387 фатном буфере ) является физиологической по ионному составу и применение ее не вызывает побочных явлений в живом организме, прогревание при 90-100 С исключает стадию стерилизации, необходимую при биологических экспериментах на животных и в культуре ткани.Способ термоактивации двунитевых полирибонуклеотидных комплексов заключается в прогревании раствора двунитевого 1( полирибонуклеотидного комплекса поли-Г и Поли-Ц с молярпым соотношением полимеров в комплексе 1:1 .и молекулярным весом 300.000-600.000 дальтон при 90-100 С в присутствии 0,05-03 М 15 раствора хлористого натрия в фосфатном .буфере в течение 2 30 мин, предпочти тельно 5-15 мин.: Пи м е р 1. Растворы поли-Г и пали-Ц в калийфосфатном буфере (КФБ) 2 а с рН 7,4, содержащем 0,15 М хлористый натрий, сливают и оставляют до получения комплекса поли-Гполи-Ц на 16 ч при комнатной температуре. Концентрация полученного комплекса 1,63 мг/мл. 1 мл раствора комплекса поли-Г поли-Ц соотношением полимеров в комплексе 1 1 и молекулярным весом 300,000-600,000 дальтон помещаютв ампулу, запаивают ее к выдерживают при 90 С в течение 10 мни, охлаждают до комнатной температуры, разбавляют до концентрации 0,5 мг/мл в О,005 М натрий-фосфатном буфере (НФЬ) рН 7,4, содержа 1 цем О, 1 М хлористый натрий, и исследуют профиль гель-хроматографии комплекса на сефарозе 2 В и стандартных условиях, Исследуют противовирусную активность термоактивированного комплекса при интраназальном введении белым мышам. Полученные результаты сопоставляются с профилем гель-хроматографии и противовирусной активностью исходного комплекса до термоактивации (контроль). Кумулятивная выживаемость мышей 87%, в контроле 60%.П р и м е р 2-23.Результаты термоактивации ксмплекса поли-Г поли-Ы при концентрации комплекса 1, 63 и О, 5 мг/мл, концентрации хлористого натрия 0,05- 0,3 О М, температуре 90-1 О О С, времени прогрева 260 мин после предварительного хранения поли-Г или комплекса прий-14 С в течение различного времени приведены в таблице.11 713871Кроме НФБ и КФБ используют калий,3 М раствора хлористого натрия в фоснатрий-фосфатный буфер (КНФБ). фатном буфере в течение 2 ЗО мин.2, Способ по п. 1, о т л и ч а юФормула изобретения щ и й с я тем, что комплекс прогрева 1. Способ термоактивации двунитевых 5 ют в течение 5-15 мин.полирибонуклеотидных комплексов, о т- Источники информациили ч а ющи Йс я тем, что комплекс принятые во внимание при экспертизе подирибогуаниловой и полирибоцитидиловой 1 Е 26 СМсд Й.Ъ ФюК 5 Р.с бгсб кислот с молярным соотношением подиме- ТС.ВЕГмцсе ТЪЮРМОГ асОчООои О 1 ЮЕ меров в комплексе 1;1 и молекулярным щ апОчедС ас 6 чйч о зидЕЬс дооЫЕ- в, ом 300,000-600,000 дальтон прогре- -Ыгцаей роЮзЬопосСЕоМЕэ а.М Е.о9 . О вают при 90-100 С в присутствии 005- В 106.,5 Ь,93-10 ОО 971)Составитель Л. НикулинаРедактор Т. Шарганова Техред МПетко Корректор И, МускаЗаказ 9210/18 Тираж 495 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий11.3035, Москва, Ж, Раушская набд, 4/5Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4