Способ получения 1, 4 -дисахаридов, состоящих из звеньев структуры -глюкозамина и гликуроновой кислоты

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 74 С 07 Н 15 61 К 31 70 ГОСУДАРСТВЕННЫЙПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ ИПРИ ГКНТ СССР ИТЕТРЫТИЯМ САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ПАТЕНТУ соба полу 040076 (28.04 Цель - созданиечения указанныхведут реакцией общей формулы 1 новог вещес вух ми 11 Их синте сахаридов ОАС СООТГ ОВ ОВ в,о х "ю, ВСгос Сцге агЫез, - 69-377. ЛИСАХ- СТРУКТУРЫ КИСЛОТЫ оизводных учения(Ог),ОМ;4 алкилу ой меде 2 К- н талл, .торые может ь неко е. 2 туры 0-глюк ислоты обще из звеньев стр(72) Морис Петиту, Пьер СинаЖан Шоай и Жан-.Клод Лормо (Р(54) СПОСОБ ПОЛУЧГН 1 Л 1)44 РЩОВ, СОСТОЯИХ ИЗ ЗВЕЬГВ(57) Изобретение касается прдисахаридов, в частности пол1,4 -е-дисахаридов общей ф-л МН,; НН-С(О)СН,;,МНЯ( 0)ОК,; С(0)ОМ; К -С - эший анкил; М - щелоч озволяющих регулиров стадии коагуляции кро быть использовано в мИзобретение относится к химии ди сахаридов, а именно к способу получения новых дисахаридов, состоящих 80 1470196 где АС - ацил; Вв - бензил; Х - галоген; К и К, указаны. В процессе используют катализатор (соль серебра трифторметансульфокислоты) и акцептор НС 1 (симколлидин) и органический раствори- тель, Затем полученный продукт последовательно обрабатывают сильным основанием, алкилирующим сульфатирующим - (СН з) зЯ/ЯОз, и гидрирующим агентами с использованием в последнем случае Рй/С. Выделение целевого продукта ведут либо обработкой уксусным ангидридом в слабоосновной, среде, либо гидроокисью щелочного металла с комплексом (СН,)з 1/80 . Полученные вещества могут быть использованы в качестве субстракта для изучения ферментной активности, 2 ил.Бо О аю где Е-МН,2, ЯНСОСЙз, ИНБОз ИК - С- С:.1А - СООТГ Соои;К - низший алкил;И - щелочной металл,которые могут быть использованы вкачестве активного начала в лекарственных средствах, позволяющих регулировать некоторые стадии коагуляции крови 1Целью изобретения является разработка доступного способа получения1,4 с.-дисахаридов, состоящих из звеньев структуры Э-глюкозамина и гликуроновой кислоты аП р и м е р 1. Получение метил(метил3-ди-О-бензпл"И-гликопиФранозид)уроната.В 20 мл метиленхлорида вводят,при перемешивайии в течение ночи втемноте смесь 0,75 г (2 ммоль) метил 2,3-ди". О-бензил-с-О-глюкопиранозида,20 мг. (0,08 ммоль) диметиламинпиридина, 0,6 мл (4 ммоль) триэтиламинаи 0,84 г (3 ммоль) тритилхлорида(трифенилметилхлорид).Методом тонкослойной хроматограФии (метанол/хлороформ 0,2/20,объем/объем) установлено, что реакция полностью завершена.К этой смеси последовательно добавляют 0,6 мл (4 ммоль) триэтнламина, 0,35 мл (3 ммоль) бензоилхлорида,50 мг (0,20 ммоль) диметиламинпиридина и прбдолжают перемешивание еще втечение 2 сут.Для удаления группы тритил к смеси добавляют 0,5 М раствор и толуолсульфокислоты в метаноле (20 мл).Через час смесь разбавляют метиленхлоридом, затем промывают водой донейтральной реакции, Продукт очищают методом колоночной хроматографии(40 г) с применением смеси эфир/гексан (3/1, объем/объем). Получ тчистую белую пену (0,84; 87,7 Ж),которую немедленно окисляют.Растворяют 480 мг (1 ммоль) продукта в 8 мл ацетона и добавляютпри 0 С к охлажденному раствору приперемешивании раствор оксида хрома(71) в 3,5 М серной кислоте (1,15 млраствора хрома содержит 1,17 г в5 мл).аа;Смеси дают нагреться до температуры окружающей среды, затем через2 ч добавляют лед и воду и экстрагируют продукт хлороформом, Хлороформную фазу промывают водой и вйсушенный,растворитель выпаривают.Полученную пену растворяют в метаноле (10 мг/мл) и добавляют едкийнатр (5 мл ЗМ раствора).Через 3 ч водную фазу промываютдважды эфиром, затем подкисляют соляной кислотой. После этого продуктэкстрагируют эфиром, Органическуюфазу промывают водой, сушат и концентрируют,Полученный таким образом растворметилируют диазометаном в эфиреи очищают на колонке с силикагелем+ 17,5 (с = 1, хлороФорм); ЯИР-спектрЗО 1 Н (внутренний стандарт МецБх);2,9 Й, 1 Н, ОН)а 3,35 (Б, ЗН, ОСН );3,69 (Б, ЗН; СООСН ); 7,27 (12 Н;2 РЬ).Найдено, Хй С 65,53 а Н 6,29.5 СЯ ОямааВычислено, Х: С 65,65; Н 6,51.П р и м е р 2, Получение дисахарида (3 - см. схемы на фиг. 1 н 2).Синтез этого дисахарида (3) осуществляют исходя из моносахарндов(1) и (2) по следующей методике,.Реакцию проводят при О С в атмосфереоазота и под защитой от света,К раствору соединения (2)(2 мл) постепенно добавляют соединение (1) (98 мг), сим-коллидин (35 мкл)и трифлат серебра (серебряная сольтрифторметансульфокислоты) Ь 6,5 мг).0Через 1 5 ч реакционную смесь разЭбавляют дихлорметаном (50 мл), Раствор фильтруют, промывают насыщеннымраствором бикарбоната натрия (два раза по 20 мл), затем водой н в за-.ключение высушивают.ПЬлученный сироп после выпаривания хроматографируют на силикагеле70196 8,45 50 55 5 14Получают таким образом дисахарид(3) (60,2 мг; 74 Х)., ЯМР-спектр подтверждает требуемую структуру: наблюдаемые сигналы (внутренний стандартМецБд); 8; 1 95 (Б ЗНэ ОСОСНз) э3,34 (Б, ЗН, ОСН ); 3,68 (Б, ЗН,СО-О-СНэ) 553 И 1 Н 35 ГцН -1); 7,20 - 7,40 (в 20 Н, 4 РЬ).П р и м е р 3. Получение дисахарида (6).На первой стадии а) осуществляютомыпение группы " ОАС в положении6 звена П-глюкозамина затем выполняют стадию в) сульфатирование группы - ОН в положении 6, и на стадиис) гидрирование - удаляют защитныегруппы Вг и одновременно переводятгруппу - Из в группу - МН,Получение дисахарида (4) омыпением.Растворяют соединение (3) в метаноле (10 мл), затем добавляют 1 н.раствор едкого натра (2 мл,). Через3 ч раствор нейтрализуют пропусканием его через ионообменную смолуЭОЯЕХ 50 Я х 4 Н(5 мл). После концентрирования остаток метилируютдиазометаном с целью повторного введения метиловой группы, удаленнойодновременно с ацетатом. Таким образом получают соединение (4).Получение дисахарида (5) сульфа- .тированием.Соединение (4) растворяют в безводном диметилформамиде (3 мл). Затем добавляют комплекс триметиламина/БОз (20 мг) и оставляют на ночь при65 С, Потом смесь выпаривают досуха, растворяют в хлороформе, разбавляют метанолом, затем пропускаютчерез колонку со смолой 0 ОИЕХ 50-ЯаОрганическую фазу промывают водой,сушат, затем выпаривают хлороформ.Получают соединение (5) (40 мг).Получение дисахарида (6) гидрированием.Соединение (5) растворяют в метаноле (1 О мл) и воле (1 мл). Добавляют 40 мг 57.-ного палладия на углеи подвергают действию водорода в те-чение 48 ч, После фильтрования и выпаривания получают соединение (6)(29 мг).П р и м е р 4. Получение дисахаридов (7) и (8).Эти производные получают, подвергая дисахарид (Ь) реакции ацетилирования группы - 1 Н,звена глюкозаминовой структуры глюкозамина с последующим омь 1 лением группы - СООМе звена структуры уроновой кислоты.Соединение (6) (14 мг) растворяют в метаноле (3 мл). рН доводят до 8 при помощи 1 н. раствора едкого натра. Затем добавляют уксусный ангидрид (100 мкл), Через 30 мин выпаривают досуха. Остаток растворяют в воде (1,5 мл) и добавляют 1 н. раствор едкого натра .(0,5 мл), После выдержки в течение ночи при темпера" туре окружающей среды раствор ней" трализуют соляной кислотой. Затем продукт обессоливают пропусканием через колонку БерЬайех С - 25 (1,8 х х 20 см). Фракции, содержащие про" дукт, соединяют и хроматографируют на анионообменной смоле (АС 1 х 2 200-400 меш; слой 1 мл). Продукты элюируют с повьшением концентрации элюента хлорида натрия от 0 до ЗМ, После соединения фракций, содержащих соединение (8), последнее обессоливают путем пропускания через колонку БерЬайех С - 25, примененную выше, ш = 3,4 мг.Строение соединения (8) подтверждено определением содержания уроновой кислоты, глюкозамина и сульфатов, а также ЯМР-спектром, Его УФ-спектр показывает максимум абсорбции при 205 нм.П р и м е р 5. Получение дисахаридов (9) и (10).Для получения этих производных дисахарид (6) подвергают сначала реакции сульфатирования е целью превращения группы ХН в группу СНБО. Яа затем реакции омыления группы СООСНз как указано выше. 5 10 15 20 25 30 35 40 Продукт (6) (14 мг) растворяют вводе (5 мл) РН доводят до 9,5 пУтем)добавления 0,1 н, раствора едкого натра и поддерживают на этом уровне автоматически. Добавляют комплекс триметиламин(БОз (20 мг), По прошествии ночи еще добавляют комплекс (30 мг). Через 24 ч добавляют 1 н. раствор едкого натра (1 мл) и оставляют на 1 ч при температуре окружающей среды. После пропускания через+ катионообменную смолу (ВОЪБХ 50 ИН ) и последующей нейтрализации едким натром соединение (10) очищают, как описано для соединения (8) (обессоливание, ионный обмен, .обессоливание).9 147019Однако во всех перечисленных случаях речь шла о продуктах, полученных деполимеризацией гепарина илиэкстрагированием, а не путем синтеза,Очевидно, что лишь путем синтеза5можно с уверенностью, воспроизводимостью и более высоким выходом получить продукт заданной структуры снеобходимыми замещениями.10Важно отметить, что деполимеризация гепарина сопровождается видоизменением звена в начале или в концецепи олигосахарида,При разложении гепарина ферментативным путем в начале цепи образуется ненасыщенное уроновое звено, а приразложении химическим путем конечноеглюкозаминовое звено преобразует взвено структуры 2,5-ангидроманно.Дисахариды, получаемые разложениемпод действием азотистой кислоты, т.е,указанные гексасахариды, не обладаютантитромбической активностью и немогут использоваться в качестве эта 25лонных продуктов при исследованияхсвязи между структурой и активностью.А в силу видоизменения концевогозвена они представляют значительноменьший интерес в сравнении с про- . З 0дуктами по данному изобретению, обладающими неповрежденной структуройв отношении звеньев, образующих гепарин,Олигосахариды также получали путем экстрагирования, т.е. не происходило видоизменения их звеньев, какпри деполимеризации. Однако такиеолигосахариды содержат от 4 до 2 бсахаридных звеньев и имеют активность 4011 п - Иезз 1 ега выше 100. В силу большой активности такие продукты не.могут быть эталонами, как продуктыпо данному изобретению, пригодныеименно по причине их малой активности.Формула .из обрет ения Способ получения 1,4 Ы -дисахаридов, состоящих из звеньев структуры Ь 10Э-глюкозамина и гликуроновой кислоты, общей формулы где 2 - ИН, ИНСОСНз, ОНЯОзМА - СООК СООМ;К - С,-С,=алкил;К,- низший алкил;,М - щелочной металл,взаимодействием двух моносахаридовобщей формулы Оф СООТГОовов во х ю овИ ОВ где Ас - ацил;В - бенэил;Х - галоген;Е и К - имеют укаэанные значения,1в присутствии в качестве катализатора соли серебра трифторметансупьФокислоты и ацептора кислоты, такого как сим-коллидин, в среде органического растворителя, с последующей обработкой полученного.дисахарида сильным основанием, а затем алкилирующим агентом с последующим сульфатированием полученного дисахарида с помощьй комплекса триметиламин/80 з, гидрированием с использованием в качестве катализатора палладия на угле, выделением целевого продукта или обработкой его уксусным ангидридом в слабоосновной среде и вьщелением полученного продукта или обработкой его гидроокисью щелочного металла и комплекснья соединением триметиламин/ /БО