Способ получения диэтилдитиокарбамата холина

ОЮЗ СОВЕТСНИХ ОЦИАЛИСТИЧЕСН ЛИК)5 С 07 С 333/ ПИСА ЕТЕНИПЕН 1 Ф 46 А. (С н, Жа пэн 88,8) С 1 гп р. 70 о 1 Ицгггг,720. ТИЗЩИ к способуного диэтилв частносолина форв п ти му э 0 анал проявляющ ность при неративных старческо АлземейерЦель и ого соединения высокую терап ектпри лечении церных заболеваний ОСУДАРСТВЕНКЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР(72) Дат Хуонг Нгуи Таде Старон (РК)(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНБАМАТА ХОЛИНА зобретение относитсячения новогопроизвоокарбаминовой кислотьиэтилдитиокарбамата СИВ-С-Ь СН -И-СН д В Ъ его терапевтическую активлечении церебральных дегезаболеваний, таких каке сумасшествие, болезньа.зобретения - изыскание новпроявляющего болееевтическую активностьебральных дегенерати(57) Изобретение касается четвертичных аммониевых соединений, в частности получения диэтилдитиокарбаматахолина, проявляющего активность прилечении церебральных дегенеративныхзаболеваний (старческого сумасшествия и болезни Алземейера), Пельизобретения - создание нового соединения указанного класса с лучшей активностью, Синтез ведут обработкойхлорида холина трехводным диэтилдитиокарбаматом натрия, выход 993. Новое сое единение практически не токсично, ЛЛ , 1,4-1,7 г/кг, эААективнаядоза 0,1-0,3 г/кг. 1 табл. Диэтилдитиокарбамат холина (мол. с. 252,40) представляет собой меле бесцветные или слегка желтоватые исталлы с т.плав.96-97 С, они легорастворяются в воде, спиртах, глиле и значительно меньше в органиских растворителях, Кристаллы дитилдитиокарбамата холина сильно гигоскопичны, поэтому их необходимоанить в герметичном и охлажцаемом осуде.Элементный из дает следующие езультаты.Рассчитано, Х: С 48,85 Н 9,64;11, 12; Б 25,55; О 6,35,СН,Р,ОБНайдено, 7: С 48,18-48,47; Н 9,37- 54; И 11,59-11,51, Б 24,94-24, 75Среднее значение, 7.: С 48,339,45; М 11,55; 8 24,85 оИК-, УФ-, ЯМР-спектры и масс-сп метрия показывают наличие характе 161461ристических полос нового продукта в соответствии с изобретением,Диэтилдитиокарбамат холина может быть получен из трехводного диэтил цитиокарбамата натрия и хпорида холина. Реакция идет следующим образом: С,Н11 о+ СНз-К-СН-СНОН+01 ь 8 С 2 Н 5 СНЗ- 9С Н- ССН-СН-СНОН +1 ОС 1 15 35 П р и м е р. В двух колбах Эрлен,мейера или в двух химических стаканах соответствующей емкости раство.ряют раздельно 56 г (0,040 моль) хлорида холина в 100 мл абсолютного этаиола, слегка нагревая при помощиэлектрической плитки или водяной бани 25и. встряхивая раствор, чтобы обеспечить лучшее растворение, 90 г(0,40 моль) трехводного диэтилдитиокарбамата натрия в 100 мл абсолютного этанола Когда оба раствора 30,станут прозрачными, медленно тон 1 сойструйкой наливают спиртовой растворхолина в раствор натриевой соли присильном помешивании и наружном охлажцении баней с холодной водой,,так как реакция сильно экзотермичес,кая. После добавления около однойтрети раствора образуется большойосадок, Приливание продолжают при сильном помешивании. Добавление спирто 40вого раствора холина в спиртовойраствор натриевой соли продолжаетсяоколо 15 мин. Затем перемешивание продолжают 30 мин. Полученный продуктохлаждают в течение ночи, при этомсосуд с реакционной смесью закрыт.На другой день удаляют хлорид натрия путем просушивания и промыванияабсолютным спиртом по 50 мл два разана Аильтре.Получают 23 г хлорида натрия.50Спиртовой 1 маточный раствор диэтилдитиокарбамата холина в этаноле концентрируют на водяной бане под вакуумом, создаваемым водяным насосом,чтобы удалить избыток этанола. Затембыстро выливают очень вязкий растворв химический стакан или стекляннуюили АарФоровую ступку, После этого высушивают в вакууме в сушильном шкаАу, используя в качеств осушителяпятиокись ЬосАора, Полученный продуктимеет Аорму блока, которнй измельчаютна мелкие кристаллы или в мелкокристаллический порошок (порошок бесцветный или слегка желтоватый). Количественный выход по диэтилдитиокарбамат холину 100 г. Выход целевогопродукта 997. Полученный диэтилдитиокарбамат холина должен храниться вгерметичном сосуде, так как он гигроскопичен,В соответствии с изобретением установлены терапевтические свойства новой. соли холина, проведено полное исследование токсичности этого продукта, Токсикологическое исследование проведено на белых швейцарских мьшах породы Ю 1 ББ, На этих животных изучалась острая токсичность, хроническая токсичность, влияние на размножение, тератогенез, способность к размножению во времени и продолжительность жизнивлияние на эАЬективность иммунных характеристик диэтилдитиокарбамата холина, Для всех опытов животные были рандомизированы, разделены по полу и распределены на группы по 30 особей, беременные женские особи изолировались в индивидуальных клетках, Всех животных кормили подходящим кормом, дпя питья применялась обычная вода.и с добавлением исследуемого продукта, т.е, диэтилдитиокарбамата холина. В применяемом корме содержались зерновые продукты, растительные белки, животные белки, минеральные соли и витамины. Измерения острой токсичности нового соединения в сбответствии с изобретением, которое вводилось интраперитональным или подкожным путем, показало, что токсичность очень слабая: при дозе ниже 1 г/кг смертельных исходов нет. Величина50 находилась в пределах 1,4-1, г/кг. При этом было установлено, что применение нового соединения значительно задерживает старение. Этот эААект особенно заметен на му - ских особях и, по-видимому, связан с изменениями характера и поведения животного, приводящими к умейьшению уязвимости, что обычно связано с высокой агрессивностью, Контрольные мужские особи больше дрались, уставали, ранились и погибали.35 40 45 50 55 Исследовалось также влияние новогосоединения на эффективность иммунныххарактеристик у белых мьшгей БИ 1 ББ.Дпя получения одинаковой иммуннойзащиты необходимо 100 мкг специАической вакцины для контрольных животныхи только 20 мкг - для мьшгей, которымвводилось предлагаемое соединениев виде 1 Я-ного раствора в питьевойводе,Из данных экспериментов следует,что токсичность нового соединенияпрактически нулеваяВидно также,что введение новой соли холина белыммышам БИ 1 ББ благоприятно сказываетсяна размножение, продолжительньстьжизни, на поведение и эААективностьиммунных реакций.фармакологические исследованияпредлагаемого соединения показали,,что оно обладает хелатным действиемтяжелых и переходных металлов, иммунностимулирующим эффектом, антидегенеративным эААектом и оказываетвлияние на нейтронные передачи и,следовательно, имеет очень интересную терапевтическую активность в области церебральннх дегенеративныхзаболеваний, таких как старческоесумасшествие, болезнь Ллземейераи сумасшествие Ллземейера, При этихзаболеваниях первыми поражаются холинэрговые центральные нейроны либона уровне синтеза нейромедиатора -ацетилхолина, либо на уровне мембраны, которая использует холин для своего биосинтеза. С терапевтическойточки зрения нельзя непосредственновводить ацетилхолин, который не проходит через мембраны, а результаты,полученные при введении холина только в Аорме хлорида, недостаточны,Предлагаемое соединение использовали в ряде экспериментов, проведенных на двух моделях животных с нервной дегенерацией, которая была вызвана или за счет основных холинэрговых ядер, или за счет повторного введения гидроксида алюминия, В обоих случаях наблюдалось, что способности животных к обучению, разрушаемые в связи с дегенерацией, восста-. навливались при оральном (через рот) введении диэтилдитиокарбамата холина. После лечения в течение трех недель определялась эААективная доза ЛЕз величина которой составляла 0,10- 0,30 г/кг животного5 10 15 20 25 30 Клинические исследования диэтилдитиокарбамата холина проводили в клинических экспериментах на пациентах, имеющих церебральное дегенеративное заболевание, которое определялось в соответствии с критериями РБМ 111 ММБ, на основе углубленного психометрического анализа и радиографии БЛИЦЕВ Эксперименты проводили в больничной среде, лечение продолжалось от шести до двенадцати недель и состояло из плацебо, хлорида,холина, диэтилдитиокарбамата холина.Применяли дозы активного вещества 125 мг при разовом приеме через рот три раза в день, т.едневная доза составляла 375 мг. Результаты показывают, что в 701 случаев лечения данным соединением наблюдается исчезновение или значительное уменьшение расстройств поведения и настроения пациентов. Результаты объективно подтверждены психометрическими тестами.При лечении плацебо или хлоридом холина в ЗОБ случаев наблюдались легкие улучпщния, менее четкие и более короткие, чем в сггучае лечения пациентов данным соединением.Терапевтические составы, содержащие диэтилдитиокарбамат холина (в качестве активного составляющего), могут вводиться орально (через рот), ректально или могут инъектироваться в зависимости от психоАизиологического состояния пищеварительного тракта . больных,1, Лктивность ДТС-холина (диэтилдитиокарбамата холина) в качестве преднественника ацетилхолина у взрослой крысы.Крысам в возрасте 26 мес. (1 контрольная партия крыс, 1 партия с хлоридом холина, 1 партия с ЛТС-холином) в течение 8 дней перорально вводили ДТС-холин в количестве 50 мг/кг/день, причем эти дозы холина эквиваленты хлориду холина.После умерщвления животных определяли содержание холина и ацетилхолина в разных областях мозга (кора лобная, затылочная, боковая, конек, полосатое тело, мозжечок и луковица) радиоэнзимологическим методом, Во всех этих областях содержание холина относительно контрольных животных увеличилось, но в случае применения ДТС-холина увеличение было гораздо знаштельнее, чем при применении хлориде холи 1614761на. В частности, показательным результатом является результат р ( 0,05 науровне лобной коры. Кроме того, синтез ацетилхолина также увеличивалсяна уровне лобной коры у животных, по 5лучивших ДТС-холин, в гораздо большейстепени по сравнению с животными, получившими хлорид холина: содержаниеацетилхолина в лобной коре возрослосна .101 (хлорид холина) и на 357 (значительная разница) - с ДТС-холином,,Эти результаты показывают, что приэквивалентных дозах холина (хлоридхолина и ДТС-холина) гораздо большеесодержание холина и ацетилхолина вразных областях мозга обеспечиваетсяДТС-холином,Клинические опыты с ДТС-холином,были проведены в больнице Сальпетриер, Паржи. Ниже приведены описаниеэтих опытов и результаты.ДТС-холин вводили в количестве500 мг/день (1 капсула с 250 мгДТС-холина утром и в полдень) Лечение продолжалось 3 мес.,двойные слепые опыты или плацебо проводили на.параллельных группах. Результаты(р ( 0,01) тестов мозгового наруше-ния (мини психическое состояние ЧКТБентон) и нарушения памяти (АКТ Бентон, ИА 1 Б, профиль мнезической производительности, ККМ 2) - это улучшение имеет значительное клиническоевыражение (р ) 0,05).35Клинические исследования ДТС-холина,Предварительная Фаза 11: исследование эффективности и толерантности ,40ДТС-холина у больных, страдающих старческим слабоумием типа Алземейра(профеесор Ранкурель, больница Сальпетриэр)Речь идет .о двойных слепых опытах 45или плацебо на параллельных группах,проведенных на 30 амбулаторных пациентах в возрасте 50-70 лет, страдающих прогрессирующей дегенеративнойформой слабоумия типа Алземейера,50диагностированной по следующим критериям: критерии слабоумия ЭСМ, мини психическое состояние между 10и 20 (Мп Мепа 1 Буайе) ММБ, шкалаКашинского с 7, отсутствие депрессиипо МАЭКБ, отсутствие причин излеченияф токсическая, метаболическая,3Формула изобретения Способ, получения диэтилдитиокарбамата холина ФормулыН СгНь ОН - С-Ь СН-Х-СН - СН 0 СгНьСН,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что хлорид холина обрабатывают трехводным диэтилдитиокарбаматом натрия. эндокринная, опухолевая, гидроцефалическая (сканирование).Все больные были в стадии 11 по классификации Б 10 СКЕТ критериями оценки были (день 0 и день 90)ф ИА 1 Б, тест на визуальное восприятие Бентона, Фигуры Рея, ММБ профиль мнезической производительности КВМ 2, клиническая оценка врачом и семьей (аналогичные шкалы)Больные, разделенные на две параллельные группы по 15 пациентов, получали в течение 3 мес, либо 2 кап-, сулы по 125 мг ДТС-холина (250 мг/24 ч), либо 2 капсулы плацебоЪРезультаты, приведенные в предлагаемой таблице, являются очень обнадеживающими по следующим причинамф резкое улучшение по Бентону, значительное улучшение всех исследуемых параметров, включая такой инструментальный анализ как мини ментальстат, чувствительность которого к изменениям всегда считается слабой, резкое улучшение активности пациентов как по мнению врача, так и по мнению семьи.Данное соединение проявляет болеевысокую терапевтическую активность при лечении церебральных дегенеративных заболеваний, таких как старческое сумасшествие, болезнь Алземейера исумасшествие Алземейера в сравнениис известным средством (хлоридом холина) вследствие способности полученного соединения выделять в различныеучастки мозга холин и нейромедиатор -ацетилхолин, которые обычно поражаются при церебральных заболеваниях.1614 7 б 1 Каракте рис тн ДТС-коли ль га 0-й день й день Рази)п 1 ипа з 0 11)07 4,20 12)404,2 4,98+1,49 6,40 И)50 НАХЯ,63 Я 1)30 08 с+1,1 О+О,3,43+1,4 3,33+1)2 7 О,ЛИЙНЬ 1 К Корректор А. Обруча хре ОВ едактор п Тираж 333комитета по иМосква, Ж) ноетиям при ГЕНТ СССР4/5 обр изводственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул, Гагарина, 101 Ииии психическое состояние(М 8)ПроФиль инеэической производительности Оценка врача Заказ 3900ВНИИПИ Госуд твенног 113035 г,ЗЗ+0,9 1,47+1,0 07+0,59 93+0,86 4,33+3,50 5,73+1,28 3)36+1,29 3, 20+1, 18 ениям и отк кая наб д