Способ получения силибинина

,.80 (51)4 С 07 0 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ПАТЕНТУ ублик. ОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Др. Мадаус ГМБХ Унд Ко (ИБ) (72) Рольф Мадаус, Клаус Герлер и Хартвиг Зоике (ПЕ).(56) Выложенная заявка ФРГ Р 3225688, кл, С 07 0 407/02, оп 1984.Патент ФРГ В 1923082,кл. 12 Ч 24, опублик. 1974. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СИЛИБИНИНА (57) Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения силибинина - средства для лечения печени. Цель изобретения - полу- чение целевого силибинина без примеси его изомера - изосилибина. Процесс ведут переработкой высушенных. плодов растения ЯИцЬцш шагхапуш Ь. СаегСЬ. Способ включает следующие стадии; отделяют основное количество жирного масла за счет разрушения клеток плодов под действием высокого механического давления; отпрессованный остаток (с содержанием 5-103 масла) экстрагируют этилацетатом с последующей его отгонкой; полученный остаток (2 Х от исходного) растворяют в нижней фазе смеси метанола, воды и петролейного эфира (т.кйп. 40-60 С) при их массовом соотношении в смеси 95;5: 100; для удаления хлопьевидных частиц твердого вещества раствор центрифугируют до получения прозрачной жидкости; сухой остаток подвергают противоточному многократному равномерному диспергированию в указанной системе растворителей при равном соотношении объемов верхней и нижней фаз; последнюю фазу упаривают в вакууме досуха с выделением коричневого порошка, т.е. 70-807-ной смеси полиоксифенилхроманонов - силимаринов 1-18 групп; 1 мас.ч. указанного порошка суспендируют с 0,7-1,5 мас.ч. насыщенного водой этилацетата и выдерживают суспензию в течение 1-2 сут; осадок отделяют фильтрованием, промывают охлажденным насыщенным водой этилацетатом, взятым в количестве О, 07-0, 15 мас.ч., сушат в вакууме Я при 30-50 С; полученный продукт.раст" воряют при кипении в 30-50 мас.ч. безводного этилацетата и обрабатывают в течение 2 ч при кипении активированным углем, взятым в количестве Я 0,2-0,4 мас.ч., и фипьтруют; фильто рат упаривают в вакууме при 30-50 С ффффф до объема 3,33 л и к концентрату до аЬ бавляют 0,5-0,8 мас.ч. насыщенного ф водой этилацетата с последующей вы- фф держкой 5-10 ч; отфильтрованный остаток суспендируют в 0,9-1,5 мас.ч. и технического этилацетата, отделяют осадок и сушат в вакууме при 30-50 С с последунщим перемалыванием и повторным высушиванием в вакууме при 30-50 С. Полученный силибинин практически не содержит изосилибина и при лечении печени, пораженной алкоголем, в сравнении с известным плацебо превосходит последний по достигаемому эффекту (меньшее время лечения). Кроме того, предотвращаются поражения печени при операциях брюш 1456013ной полости или употреблении лекарст- например хлорпромазина, хлороквинавенных средств, влияющих на печень, или аспарагиназы.Изобретение относится к усовершенствованному способу получениясилибинина, который является ценнымсредстврм для лечения печени.Силибинин и лекарственные средства, которые содержат это соединение Маг 1 епй 1 зге 1-811 уЬцтп тпагдапттш1 . СаеггЬ (Сагс 1 иаз шагт.апета 1),представляют собой известное лекарственное растение. Из 4 щаволигнанов,присутствующих в плодах этого растения, выделяют компонент, а именно силибин (силимарин 1), которыйсодержит два изомера: силибинин иизосилибин, Свободный от присутствия изосилибина силибинин обладаетпреимуществами по сравнению сосмесью этих двух изомеров.Цель изобретения - получениесилибинина без примеси изосилибиназа счет многократной экстракции70-807-ной полиоксифенилхроманоновой смеси этиловым эфиром уксуснойкислоты.П р и м е р 1. А. Получениеполиоксифенилхроманоновой смеси,100 кг высушенных плодов растений Бх 1 ттЬуш шагапуш СаегСЬ на шнековом прессе для масляных семян подвысоким давлением освобождают от основного количества жирных масел, причем получают 75-80 кг отпрессованного остатка с остаточным содержанием масла 5-10780 кг отпрессованного остатказатем исчерпывающе экстрагируют этилацетатом. После испарения этилацетата получают 5-6 кг маслянисто- жирного, отчасти комковатого остатка после высушивания с содержанием биологически активного вещества 20-ЗОБ. Остаток после высушивания в количестве 2 мас.7 растворяют в состоящей из метанола и воды нижней Фазы смеси растворителей, состоящей из 95 мас.7. метанола, 5 мас.ч. воды и 100 мас.ч. петролейного эфира (т.кип. 40-60 С), и центрифугируют 2для отделения от хлопьевидных твердых веществ до получения прозрачнойжидкости. Конечный объем нижней фазы составляет 300 л. Затем осущест вляют многократное равномерное диспергирование в противотоке следующимобразом: шесть отдельных центрифужных сепараторов для разделения жидкость - жидкость при промежуточномподключении по стадии эмульгирования подключаются последовательно,так, чтобы нижняя Фаза проходилачерез верхнюю в противоположном направлении, причем (смотря по обстоятельствам) в стадии эмульгированияобе Фазы с целью обмена веществэмульгируются одна в другой. В соответствующей следующей стадии отделения эмульсия снова разделяется на тяжелую и легкую Фазы.Трубопроводы расположены так,что отделенная верхняя Фаза противотоком к нижней Фазе попадает в соответствующий предшествующий этапэмульгирования и т.д.Сначала верхнюю и нижнюю фазыуказанной тройной смеси растворителей непрерывно одну против другойподводят в батарею для диспергиро вания без нагрузки веществом, причемустанавливается Фазовое равновесие.В протекающую нижнюю Фазу после этого непрерывно вводят верхний 27-ныйраствор вещества. При подпитке на 35 входе нижней Фазы необходимо, чтобысоотношение общего количества протекающих объемов верхней Фазы к нижгней не изменялось и оставалось равным 1:1.40 Скорость протекания обеих Фаз зависит далее от степени действияэмульсионного агрегата и разделений,Оптимальное установление можно определять гравиметрически путем коли" 45 чественных определений величин перехода веществ.Вытекающая из батареи для диспергирования нижняя Фаза (примерноСодержание изосилибина 0,1-0,37Данный способ позволяет получитьсилибинин практически без содержанияизосилибина. з145601 300 л) лод давлением 20 мм доводится досуха, причем получают 3,1 кг окрашенного от бежевого вплоть до коричневого цвета порошка, который состоит на 70-807 из полиоксифенил 5 хроманоновой смеси, представляющей смесь силимаринов 1-1 Ч (силимарин 1-1 Ч = силимарин 1-1 Ч-группа), Выход биологически активного вещества составляет 2,.27, в расчете на исходный материал.Б. Получение не содержащего иэосилибина силибинина.500 г полученной полиоксифенилхроманоновой смеси (707) суспендируют в 2 кг метанола (примерно 2,53 л) и кипятят при перемешивании в течение 15 мин. Из полученного таким образом раствора спустя это время может выпадать уже немного силибинина. Затем удаляют в вакууме 0,75-1,25 кг (примерно 0,96- 1,58 л) метанола и остаток оставляют стоять в течение 10-28 дней при 25 комнатной температуре. Выпавший в осадок силибинин отфильтровывают и дополнительно промывают дважды по 50 мл холодным метанолом. После высушивания при 40 С в вакууме изоли рованный сырой силибинин очищают следующим образом: 60 г сырого силибинина растворяют при нагревании в 3 л технического уксусного эфира, после этого смешивают с 20 г активного угля и перемешивают следующие 2 ч в условиях кипения с обратным холодильником. Затем отфильтровывают до получения прозрачного раствоР ра и раствор концентрируют при 50 С при пониженном давлении вплоть до примерно 250 мл. Концентрат перемешивают в течение 15 мин при применении прибора Б 1 гга-Тцггах и при перемешивании смешивают с 25 мл метано ла. Затем смесь оставляют в течение ночи при комнатной температуре. Перед отсасыванием на нутч-фильтре осадившегося при этом силибинина смесь еще раз в течение 5 минут размешивают с помощью аппарата ЫггаТцггах, Отсосанный на нутч-фильтре осадок дополнительно промывают 2 раза по 50.мл уксусным эфиром и высушивают в вакуумном сушильном шкафу в течение ночи при 40 С. После этого продукт размалывают и дополнительно высушивают при тех же условиях. Выход силибинина (в расчете на сили 34бинин в сыром силибинине) 79-857 при содержании 96-98,57, силибинина в зависимости от качества сырого силибинина.Содержание изосилибина 0,1-0,37,Константа диссоциацйи: 9,6 х 10 (С = 4,15 х 10 мол/л), т пл. 167 С. Растворимость в воде 19 мг/л при 25 С, рКа = 6,42.П р и м е р 2. Получение не содержащего изосилибина силибинина.1 кг полиоксифенилхроманоновой смеси (снлимарин 1-1 Ч-силимарин 1-1 Ч-групп, содер.707) суспендируют в 1 л насыщенного водой уксусно" го эфира в течение 3 мин с интенсив" ным перемешиванием. Спустя 48 ч стояния при комнатной температуре осадок отсасывают, промывают 100 мл холодного, насыщенного водой уксусного эфира и высушивают в течение 48 ч при 40 С в вакууме. Выход этого промежуточного продукта (сырого силибинина) составляет в зависимости от качества сырого силимарина 80-857 (в расчете на содержание силибинина в сыром силимарине) при содержании 80-847, Сырой силибинин растворяют в 40 л сухого уксусного эфира в точке кипения, кипятят,с обратным холодильником в течение 2 ч с 360 г активного угля, отфильтровывают и концентрируют в вакууме при 50 С до общего объема 3330 мл. В этот раствор при интенсивном перемешивании и при комнатной температуре добавляют 667 мл насыщен ного водой уксусного эфира, Спустя 1-3 ч после этого происходит кристаллизация силибинина, После стояния в течение ночи осадившийся силибинин отделяют путем отфильтровывания, дважды суспендируют с техническим уксусным эфиром, беря каждый раз по 1200 мп, в течение 5-10 мин, снова отфильтровывают и предварительно вы- . сушивают в течение 24 ч в вакууме при 40 С. После размалывания дополниотельно высушивают в течение 48 ч при 40 С в вакууме. Выход силибинина (в расчете на силибинин в сыром силибинине) 79-857. при содержании 96- 98,57. силибинина в зависимости от качества сырого силибинина.5 1456Клинические испытания силибинина.В последние десятилетия чрезвычайно сильно увеличилось количество токсических повреждений печени. Наиболее частой причиной повреждения является алкоголь.В результате контролированного изучения удалось доказать превосходство силибинина по сравнению с плаце О бо и другими сравниваемыми методами лечения. В двойном опыте на 66 пациентах с пораженной алкоголем печенью силибинин (и = 31) испытывали в сравнении с плацебо (и = 35)15Подвергнутые статистической оценке результаты показывают, что силибинин значительно превосходит плацебо. При этом значительно сокращается время выздоровления по сравнению с плацебо. 20 Во втором двойном слепом опыте с 76 пациентами, из которых 39 получили дилибинин, а 37 подверглись контрольному лечению, обнаружены очень большие различия, говорящие в пользу силибинина.При токсичном по отношению к печени действия наркоза в связи с оперированием органов брюшной полости может быть доказано, что предоперацион- о ное введение силибинина приводит к значительному уменьшению послеоперационного повышения содержания ферментов печени в крови. С помощью сипибинина эффективно предотвращаются также возникающие в настоящее время все чаще и вызываемые определенными лекарственными средствами поражения печени. Это может быть показано на примере индицированного фенилгидантоином 40 гепатоэа, при котором, несмотря на дальнейшее назначение безусловно необходимого и предотвращающего спазмы медикамента, при одновременном назначении силибинина в более короткое время нормализуются все лабораторные показатели.Другие испьггания при заболеваниях шизофренией и с тяжелыми поражениями печени, возникающими при назначенииЮ хлорпромазина, также показали положительное действие силибинина. Другие опьггы касаются предотвращения связанного с поражением печени воздействия, например, хлороквина или аспарагиназы. В случаях поражения печени, обусловленных профессией, у всех подвергнутых лечению пациентов могут быть значительно улучшены патологи 013 6чески повышенные данные лабораторного исследования, причем независимо от причины илк возможных дополнительных заболеваний.Кроме того, силибинин вызывает также значительные улучшения при хронических воспалительных заболеваниях печени и при циррозе печени. Например, пациенты с циррозом печени в рамках продолжительного исследования были использованы в двойном слепом опыте, в котором силибинин испытывали в сравнении с плацебо. Критерием для оценки терапевтического успеха было прежде всего время переживания. Здесь обнаружилось значительное превосходство силибинина в сравнении с плацеболечением. Сравнительные испьггания между сипибииином и изоснлибином и силибином (смесь силибинина и изосилибина) на модели фаллоидини празеодим-интоксикации проводили на мышах после внутривенного введения.Антигепатолоксическое действие силибинина, изосилибина и силибина в виде 11-метилглюкаминовой соли испытывали в дозах 50 и 100 мгкг- .(в расчете на силибинин) на модели отравления валлоидином или празеодимом на мышах после внутривенного введения, Введение исследуемого вещества производили за 1 ч до отравления фаллоидином или эа 1 ч до или же через 6,24 и 48 ч после отравления празеодимом. В случае отравления валоидином оценивали степень переживания, а в случае отравления празеодимом оценивали различные параметры сыворотки и печени через 72 ч после интоксикации.В случае интоксикации фаллоидином степень переживания после введения силибинина в обеих дозах составляла 1007,. При применении остальных веществ степень переживания не превышала 40 Е у необработанных пораженных контрольных животных.Изосилибин оказался в связи с интоксикацией празеодимом непереносимым, вследствие чего доза 100 мг кг- должна быть разделена на два частичных приема.1 Формула изобретения 1. Способ получения силибининаформулы 114560 ОН ОСК ОН ОН О 25 5 че ектор М.Самборская при котором высушенные плоды растения Яд 1 цЬцш шагдапут 1 СаегЖ освобождают от основного количества жирного масла посредством топо, чтоклетки плодов разрушают под воздействием высокого механического давления, затем отпрессованный остаток, 1характеризующийся содержанием масла5-103, полностью экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют,после чего полученный сухой остаток 2в количестве 2 мас.Е растворяют всостоящей из метилового спирта и воды нижней Фазы смеси трех растворителей, состоящей из 95 мас.ч. метилового спирта, 5 мас.ч. воды и100 мас.ч. петролейного эфира (т.кип.40-60 С), для удаления хлопьевидныхчастиц твердого вещества производятцентрифугирование до получения прозрачной жидкости, а затем в этой 3системе растворителей сухой остатокподвергают многократному равномерному диспергированию в противотоке,причем соотношение общих протекающихобъемов верхней Фазы и нижней фазыподдерживают равным 1:1, и непосредственно после этого из вытекающейнижней фазы в результате упариванияв вакууме досуха вьщеляют в видеокрашенного в коричневый цвет порошкообразного вещества 70-807.-ную поСоставитель И.едактор М. Петрова Техред Л.Олийнык Заказ 7460/58 Тираж 352ВНИИПИ Государственного комитета по из113035, Москва, Ж,Производственно-полиграфическое пр 13 8лиоксифенилхроманоновую смесь (силимарин 1-1 Ч = сипимарин 1-1 Ч-групп), о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью получения целевого продукта, свободного от примеси изосилибина, одну массовую часть полученного и окрашенного в коричневатый цвет порошка суспендируют с 0,7-1,5 мас.ч. насыщенного водой этилового эфира уксусной кислоты, приготовленную суспензию выдерживают в течение 1-2 сут, осадок отделяют Фильтрованием, промывают охлажденным и насыщенным водой этиловым эфиром уксусной кислоты, который берут в количестве 0,07-0,15 мас.ч и сушат в вакууме при 30-50 С, полученный продукт растворяют при нагревании до температуры кипения смеси в 30- 50 мас.ч. сухого (безводного) этилового эфира уксусной кислоты, раствор обрабатывают в течение 2 ч. при температуре кипения смеси в сосуде, снаб женном обратным холодильником, акти= вированным углем, взятым в количестве 0,2-0,4 мас.чпроизводят фильтрование, после чего Фильтрат упаривают в вакууме 30-50 С до общего объема 3,330 л, к концентрату прибавляют 0,5-0,8 мас,ч. насыщенного водой этилового эфира уксусной кислоты, выделившийся в осадок силибинин через 5-10 ч. отфильтровывают и суспендируют в 0,9-1,5 мас.ч. технического этилового эфира уксусной кислоты, осадок фильтруют и подвергают предварительной сушке в вакууме при 30 о50 С , предварительно высушенный продукт перемалывают и вновь сушат в вакууме при 30-50 С. Подписноеретениям и открытиям при ГКНТ СССушская наб д. 4/5 тие, г, Ужгород, ул. Проектн