Среда для дифференциации энтеробактерий

СОЮЗ СОНЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 9).пиО 4 50 С 12 И 1 ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ АВТОРСКОМ 8-13 414921 4.03,8 3.10.8 .Н.Кар анова,(21) 3 (22) 2 (46) 2 (72) С А.Н.Ив ченко (71) С юзного инстит ной пр ий Филиал Всесоовательскогоой и сыродельеверо-Кавказ научно"иссл ута маслодел омышленности 63. 15 (088. 8)Проспект Оксоид(54)(57 ЭНТЕРОБ аэотист основно ный Фос натрия, дистили я с я СКго ДА ТЕРИЙ, спитанисульф ит орнокислы хлорид на ованную, ем, что,т натриянатюия Дв ОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ Вюл. Р 39иканова, В.В.Молочников Л.Г.Бендас и А.Я.СыпДИФФЕРЕННИАПИИ держаща я источниклактозу, Фуксин натрия, двузамещеннатрий, карбонат рия, агар, воду т л и ч а ю щ а целью повышения чувствительности среды и снижения ее себестоимости, в качестве источника азотистого питания, лактозы и витаминного питания среда содержит панкреатический гидролизат смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока взятых в соотношении 1:1, с содержанием аминного азота 2600-2800 мгЪ, общего азота 5700-5970 мг% и лактозы 62-65 в сухом гидролизате и.диаммонийфосфат при следующем соотношении ингредиантов, г/л дистиллированной воды;Панкреатический, гидролизат молочной сывороткии обезжиренногомолока 16,00-20,00 Диаммснийфосфат 2,30-2,50 Сульфит натрия 1,60-1,61 фуксин основной 0,30-0,33ДвузамещенныйФосфорнокислыйнатрий 0,46-0,48 Карбона 0,01-0,02Хлорид 3,40-3,60Агар 9,40-9,60Изобретение относится к микробиологии, в частности к микробиологическим исследованиям, основаннымна применении питательных сред,включая методы контроля.Известна среда Эндо-с-Агар, предназначенная для дифференциации энтеробактерий. Основными компонентамиэтой среды янляются пептон, как источник азотистого питания, мяснойэкстракт, дифференцирующий комплекс, лактоза-Фуксин оснонной - сульФит натрия и соли (лнузамещенный ФосФорнокислый натрий и карбонат натрия), обеспечивающие определенноезначение рН среды. Она используетсядля дифференциации эшерихии и другихмикроорганизмов кишечной группы,При этом ферментирующие лактоэу эщерихии образуют на средах темно-красныеколонии с характериным металлическимблеском вследствии взаимодействияобразующихся в процессе ферментативной реакции альдегидов с Фуксином нприсутствии сульфита натрия (1 ).Недостатком этой среды являетсяналичие в состане дополнительныхкомпонентов для обеспечения достаточной питательной .ценности, например мясного экстракта, получаемогоиз ценного пищевого продукта,Наиболее близкой к изобретению потехнической сущности и достигаемомуположительному эффекту является среда для дифференциации знтеробактерий (агар Эндо), содержащая источниказотистого питания(пептон )и дрожженой 35экстракт, дифференцирующий комплекслактоза-Фуксин основной - сульфитнатрия и соли для обеспечения буферности среды днузамещенный фосфорнокислый натрий и карбонат натрия),хлорид натрия, агар и воду 2 .Однако пептон предстанляет собойФерментатинный гидролизат кильки,который получают из ценного пищевого продукта. К тому же, он не обеспечивает достаточного азотистого ивитаминного питания микроорганизмов, поскольку в состав среды вводится дополнительно дрожжевой экстракт,который содеркит набор угленодородов, отрицательно влияющих на проявление дифференциальных свойств среды.Пель изобретения - повышение чувствительности и снижение себестоимости йреды.Поставленная цель достигается тем, 55что среда для дифференциации энтеробактерий, содержащая источник азотистого питания и лактоэу,фуксиносновнОй,сульфит натрия,двузамещенный фосФорнокислый натрий и карбонат натрия 60хлорид натрия,агар, воду дистиллированную,н качестне источника азотистого питания, лактозы и витаминного питания,содержит панкреатический гидролиэатсмеси молочной сыворотки и обезжиренного молока, взятых в соотношении 10:1, с содержанием аминного азота 2600-2800 мгЪ, общего азота 5700- 5970 мгЪ и лактозы 62-65 в сухом гидролизате идиаммонийфосфат при следующем содержании ингредиентов, г/л дистиллированной воды;Панкреатическийгидролизат молочФной сыв оро тк и иобезжиренногомолока 16,00-20,00 Диаммонийфосфат2,30-2,50 Сульфат натрия 1,60-1,61 Фуксин основной 0,30-0,33 Двузамещенныйфосфорнокислыйнатрий 0,46-0,48 Карбонат натрия 0,01-0,02 Хлорип натрия . 3,40-3,60 Агар 9,40 "9,60 При данном составе среды питатель". ную основу составляет панкреатический гидролизат молочной сыворотки и обезжиренного молока (ПГСМ), являющийся одновременно источником пептонов, витаминов и лактозы. Необходимая питательная ценность спелы обеспечивается определенным соотношением молочной сыворотки и обезжиренного молока при составлении смеси перед гидролизом - 10:1. Содержание лактозы в ПГСМобеспечивается наличием сыворотки, В зависимости от исходного количества лактозы в сыворотке определяется доза ПГСМпри введении его в среду. Содержание лактозы в сыворотке колеблется в пределах 4,2- 5,63 и зависит от свойств сырья, Этим определена необходимость использования при составлении смеси 10 ч сыворотки. Увеличение содержания сыворотки н составе смеси приводит к снижению содержания пептонов эа счет уменьшения количестна обезжиренного молока, что снижает рос.- товые свойства среды. Содержание сыворотки в смеси менее 10 ч создает дефицит углеводного состава и ухудшает дифференциальные свойства среды. Колебания содержания лактозы н ПГСМопределяют дозу его и составе среды.. Панкреатический гидролизат получают путем ферментативного гидролиза смеси молочной сыворотки и обезжиренного молока панкреатином в присутствии хлороформа. В процессе гидролиза происходит расщепление белка до легко усвояемых Форм азотистого питания бактерий, Это сопронождается накоплением аминного азота, которое достигает 2800 мгЪ в сухой основе. Аминокислотный состав гидролизата: треонин, серии, аспапгин, поолин.аланин валин, цистин и цистатнонин, метионин, иэолейцин, лейцин, тирозин, Фенилаланин, ф -аланинр аминомаслянная кислота, лизин,1-метилгистидин, креатинин и глутаминовая кислота.Гидролиэат содержит минеральныесоли, летучие жирные кислоты муравьиную, уксусную, масляную, пропионовую ,. кальций, фосфор, магний ижелезо, витамины А, Е, В , В 2, Вб,холинРР и С.Таким образом, панкреатическийгидролизат представляет собой белково-углеводный продукт, содержащий2600-2800 мг аминного азота и5700-5970 мг общего азота, Содержание сухих веществ 95-96; степеньрасщепления белка 0,467-0,469, 15содержание лактозы в сухом гидролизате 62-65.Дополнительное введение в средудиаммонийфосфата обеспечивает яркое окрашивание Ферментирующихлактозу колоний эшерихий и усиливаетих металлический блеск, что являетсяосновным дифференциальным признакомсреды данного назначения,П р и м е р 1, К 100 г сухого препрепарата ПГСМ, полученного из25смеси сыворотки с содержанием лактозы 4,2 )и обезжиренного молокав соотношении 10:1, добавляют 65 глактозы. Для обеспечения необходи"мого количества лактоэы в среде в ЗОсостав вводится 20 г сухого ПГСМ; 3,4 г хлорида натрия 0,3 г фуксина основного; 1,6 г сульфита натрия 0,46 г двузамещенного фосфата натрия; 0,01 г карбоната натрия и 9,4 г агара.Данное соотношение компонентов рассчитано на приготовление 1 л среды.П р и м е р 2, В 100 г сухого препарата ПГСМ, полученного из сме си сыворотки (ссодержанием лактозы 5,6) и обезжиренного молока в соотношении 10:1, содержится 86 г лактоэы. Для обеспечения необходимого количества лактозы в среде в состав вводится 16 г сухого ПГСМу 2,5 г диаммонийфосфата; 3,6 г хлорида натрия; 0,33 гфуксина основного 0,48 г двузамещенного Фосфата натрия;0,02 г карбоната натрия и 9,6 г агара.Полученный препарат по питательной ценности обеспечивает интенсивный рост энтеробактерий. Содержание лактозы в составе ПГСМобеспечивает дифференциальные свойства среды на уровне агара Эндо, имекщего в составе кристаллическую лактоэу в количестве 12,9-13,0 г. В результате сравнительных испытаний выявлено явное преимущество предлагаемой среды, что подтверждается данными, приведенными в =аблице.+ггс вц сс оЬ 3а сОРи л л О В3 М вО Йа аОЗ Охд Е а а Оа х а д Э=С Ц е о ах щх е цо ца соа ех ее едо ао ак адо о= ид и х".цаво О Х 1 вкое Вх б цебоя ц в ж ЛвФ еедх 2 ха ах длоад . д х д м о хдо ОЕ Х оаов орех ха 1 1 1 1 11049541 Составитель И.ПриваловаРедактор Г.Безвершенко Техред И.Метелева Корректор В.Бутяга Эаказ 8361/28 Тираж 523 , Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Е, Раушская наб., д.4/5филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная,4 Производство предлагаемой дифференциальной среды взамен известной позволяет высвободить и направить на производство пищевых продуктов ежегодно 150 т кильки высокого качества глубинного улова, а также 20 т високоочищенной кристаллической лактозы " дефиаитного компонента, используемого при производстве продуктов детского питания илечебных препаратов.Экономический эффект от произ водства и использования предлагаемой среды составит 344 100 руб.