Способ инактивации грибного токсина

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик н 1740249( 088.8) по делам изобретений и открытийОпубликовано 15,06.80. Бюллетень22 Дата опубликования описания 18,06.80.(72) Авторы изобретения С, Н. Харченко и В. П. Литвин Украинский ордена Трудового Красного Знаменисельскохозяйственная академия(54) СПОСОБ ИНАКТИВАЦИИ ГРИБНОГО ТОКСИНА 1Изобретение относится к области ми,котоксикологии, в частности к способаминактивации грибных токсинов, конкретно токсина дендродохина остротоксичес-кого метаболита гриба ОеМтодосЬтиа1 ок 1 сов Р 1 с 1 ор, Е 1 81 Ьэ.5Известен способ инактивации токсинаафлатоксина в пищевых продуктах .смесьюокиси этилена с метилмормиатом Ц .Известен также способ инактивациибактерийных токсинов, основанный на. использовании поверхностно-активноговещества - гексаметилендиизоцианата,избыток которого при гидролизе превращается в гексагетилендиамин и угольнуюкислоту Я .. Однако ни одиним из этих способов.нельзя инактивировать токсин дендродохин.Целью изобретения является созданиеспособа, позволяющего эффективно инак, тивировать токсин дендродохин,Указанная цель достигается тем, чтов качестве поверхностно-активного вещества используют этоний или додецоний, ко 2торые берут в 0,1-1,0%-ной концентра-,ции водного раствора на 10-30 мг/млдендродохина, а инактивацию проводят втечение 1-3 сут.П р и М е р , Инактивацию образуемого грибом токсического метаболитадендродохина проводили путем добавленияк спиртовым растворам, содержащим различные концентрации (1 100 мг/мл)кристаллического препарата токсина,0,1; 0,5; 1,0%-ных растворов атония.или дедоцония,Реакционные смеси объемом 2-10 млинкубировали при комнатной температурев течение 1 -7 сут. В качестве контроляиспользовали соответствующей концентрации спиртовые растворы дендродохина, ккоторым добавляли определенные объемыдистиллированной воды без инактивато-ров,Присутствие дендродохина в реакционных смесях после контакта с поверхностно-активным веществом ( ПАВ) устанавливали по изменению фунгистатической акВремя контакта токсина с ПАВ, сут/ция токси.на, мг/мл Концентрация токсина, мг/мл Радиусзоны,Концентрациятоксина,мг/мл Радиус зоны, Ям Радиус .зонь 1,мм Концентрациятоксина,мг/мл Этоний01( 1) 3005 ( 5) 3010 ( 10) 30-40100 20 10 30,5 3тивЬости микотоксийа по отношению кчувствительной к нему тест-культурыСопдДО МеЮоЫдеа штамм 63 методом бумажньи дисков или серийных разведений, хроматографинески, кожной пробой в опытах на лабораторных животнь 1 х.Бумажные диски диаметром 4 ммсмачивали в контрольных растворах иопытных смесях, затем наносили на поверхность агаризованного сусла (среда, 10оптимальная для роста тест-культуры),засеянного С Майсйойемштамм 63, ивыдерживали в термостате при 37 Со24 ч. О количественном содержании дендродохина в контроле и реакционных смесях судили по величине стерильных зонугнетения роста тест-культуры, образуемых вокруг дисков.Серийные разведения применяли дляучета степени дендродохининактивирующего действия ПАВ по изменейию антибиотической активности токсина в контрсае и реакционных смесях (до и послеконтакта с ПАВ), которую выражаликонцентрациями дендродохина в 1 мл 25жидкого сусла (7 по Баллингу) в пробир,ках, где отмечали попное угнетение роста тест-культуры, Нагрузка тест-культуры составляла 200 000 микробных клеток в 1 мл питательной среды, Время30инкубации 18-24 ч.при 37 С,На полости хроматографической бумаги (Ленинградская фбыстрая") шириной1 см и длиной 20 см, на расстоянии3 см от нижнего конца наносили 0,03 мл" исследуемого -раствора "и после подсушивания помещали хроматограммы в хроматографические камеры с хлороформом. 40После прохождения растворителем от-меченного расстояния (20 см) хроматограммы высушивали на ввздухе и проявляли биавтографически в специальных кюветах на агаризованном сусле, засеянномчувствительной к дендродохину культурой С,8 еИа 1 оиЯОа штамм 63 в течение 24 ч при 37 С,О присутствии в контрольных и опыт-,ных пробах дендродохина или других ток-сических компонентов судили по наличию,величине и расположению стерильных зонугнетения роста тест-культуры. Я дендродохина в хлороформе 0,8-0,9. Кожную пробу на кролике осуществля- ли следующим образом. На депелирован ный участок кожи стеклянной палочкой наносили контрольные растворы, содержащие соответственно разные концентрации дендродохина или ПАВ, а также опытные реакционные смеси (по 0,5 мл). Учет дерматонекротической реакции проводили через каждые 24 ч на протяжение 7-10 сут. Характеристика дендродохининактивирующего действия этония и додецония по степени фунгистатической активности и изменению содержания дендродохина в реакционных смесях в зависимости от концентрации и времени контакта токсина е ПАВ представлена в табЛице. Как видно из таблицы, 1 мг/мл этопия инактивирует в течение 1 сут до 4 мг/мл дендродохина, 1 мг/мл додецония - 3 мг/мл дендродохина..3 0,5 1,0 0 100 3 онтрол 30 0 2 3 йендродо Гбез контактас ПАВ 400 40 40 1%-ный аствор т водны одецоний%.-ный Водныйаствор Отсутствие зоны угнетения роста тест-культуры. Полная детоксикация дендродохина вовсех вариантах опыта отмечалась на третьи сутки контакта токсина с исследуемыми концентрациями ПАВ.Проверка дерматонекротического действия реакционных смесей в контрольных растворах, содержащих разные количества дендродохина, показала, что токсин до контакта с ПАВ также, как и контрольные растворы дендродохина, при навесе нии, на депелированную кожу кролика вызывает воспалительную реакцию четвертой степени, которая характеризовалась : покраснением, сильным отеком, глубоким сухим некрозом, захватывающим и подкож ную клетчатку, образованием долго не заживающих язв. такта дендрог/мл са также двух- в концентра, О,Ъ-ными,После трехсуточного кон охина в концентрации 30 м 0,1%-ными растворами ПАВ уточного контакта токсина ии 30 40 мг/мл с 0,5 и Увеличение концентрации ПАВ в реак-ционных смесях (5,10 мг/мл).Характеристика дендродохининактиви-рующего действия этония и додецония( по величине стерильных зон угнетенияроста 0.МеИМодес штамм 63 и изменению концентрации токсина в реакционных смесях). приводило к сокращениюсроков инактивации и повышению количества обезвреженного токсина. Содержание в реакционных смесях 5 мг/млэтония или додецония за 24-48 ч приводило к инактивированию до 40 мг дендродохина, 10 мг/мл - в течение 2 сутобезвредили 100 мг токсина,Установленная биологическим путеминактивация дендродохина ПАВ в зави/симости от концентрации и времени действия инактиваторов подтвердилась хроматографически, Зона угнетения ростатест-культуры (К дендродохина в хлороформе 0,8-0,9) при биавтографическом.проявлении хроматограмм отсутствовала, - Продолжение таблицы7402 Формула изобретения 10 7растворами ПАВ, дерматонекротнческая реакция на коже кролика не отмечалась.Полученные данные позволяют считать возможным испОльзование изученных инактиваторов для обезвреживания кормов, пораженных остро токсическим грибом ОЕпдгодос Ь ив 1 о бсип.Способ инактивации грибного токсина, основанный на использовании поверхностно-активного вещества, о т л и ч а ю498щ и й с я тем, что, с целью эффективного инактивирования токсина дендродохина, в качестве поверхностно-активного вещества используют атоний илидодецоний, которые берут в 0,11,0%ной концентрации водного раствора на10-30 мг/мл дендродохина, а инактивацию его проводят в течение 1-3 сут.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Заявка ФРГ2557589,кл, А 01 Й 9/02, 1877,2. Патент ФР 1 Мо 2137630,кл, А 61 К 9/02, 1975.Заказ 3072/4 Тираж 673 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изоретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская набд, 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4