Способ определения токсинов сине-зеленых водорослей

еспубли ВИДЕТЕЛЬСТВУ АВТОР СКО(61 нительно авт, св 21) 2035483/28-13аявкио 1) М. Кл.з б 01 Х 31/ 2) Заявлено 14.06.7 с присоединением Ьсуаарствееных комите Совета Миеис 1 ров СССР ло делам изобретенийи открытий 3) Приоритет 53) УДК 576.345(088.8 но 30.04.76. Бюллетень16икования описания 02.06,76 Опублико Дата опуб(72) Авторы изобретения ко, Л. Ф. Лукина, Л. А. Сиренко, В. М. Орловскийи В. А. Песковгидробиологии АН Украинской ССР и Киевскийвательский институт общей и коммунальной гигиень Ю. А. Кирпе Инститаучно-иссле) Заявители 54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИНОВ СИНЕ-ЗЕЛЕНЫХ ВОДОРОСЛЕЙмедицине и может агностики и профи- оценки токсичности таминных концен- тарно-гигиенической ение относится кльзовано для дитравлений, дляении белково-витакже для саничества воды. Изобрет быть испо лактики о при полу тратов, а оценки ка Контролем служит смекомпоненты и дистпллирисследуемого экстрактаактивности холпнэстеразвычитания показаний опдля раствора с токсиномство токсина рассчитываму графику,сь, содержащая все ованную воду вместоРасчет изменения ы производят путем тпческой плотности и контроля. Количеот по калибровочноИзвестен способ определения токсинов сине-зеленых водорослей, заключающийся втом, что клетки водорослей высушивают вымораживанием, ресуспендируют в 0,1 н. НС 1,а затем полностью разрушают растираниемв течение 6 мин с толченым стеклом. Супернатант обрабатывают 1 н. КОН до рН 5,5.Полученный осадок удаляют центрифугированием. Частично очищенный центрифугатлиофилизируют. Разделение и очистку производят хроматографированием,Однако известный способ не обеспечиваетколичественного определения токсинов биомассы водорослей.С целью количественной оценки токсичности биомассы водорослей экстракт инкубпруют с холинэстеразой и ацетилхолином споследующим фотометрированием в присутствии индикатора бромтимолового синего.Способ осуществляют следующим образом.П р и м е р. Для количественного определения токсинов навеску (5 - 10 г) водорослейизмельчают в гомогенизаторе при 8000 об/мин 3 в течение 20 мин. Полученную массу разбавляют водой до 20 мл и фильтруют при помощи фильтра Зейца. Аликвотную часть исследуемого раствора (0,1 - 0,5 мл) переносят в пробирку, добавляют 1 - 2 мл раствора холинэстеразы в боратном буфере, Смесь инкубируют в течение 10 мин при 37 С при периодическом перемешивании, затем в эту пробирку приливают точно 0,1 мл бромтпмолового синего и 0,2 мл. 2%-ного раствора ацетилхолина и повторно инкубируют в течение 10 мин. Пропорционально количеству токсина изменяется активность холинэстеразы и субстрат не полностью разлагается на уксусную кислоту и холин. Образовавшаяся уксусная кислота изменяет рН раствора и интенсивность окраски индикатора бромтимолового синего. Изменение оптической плотности исследуемого раствора определяют на фотоэлектроколориметре в кюветах 0,5 прп красном светофильтре.Заказ 1220/6 Изд, Ле304 Тпракк 1029 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д.:1,5Типография, кр. Сапунова, 2 3Калибровку реакции проводят с серией растворов токсина, полученного из исследуемого материала любым извеспным методом.Оптимальное рабочее разведение - от 1% до 0,000001%. В пробирку наливают 1 - 2 мл раствора холинэстеразы в боратном буфере, добавляют 0,1 - 0,5 мл раствора токсина известной концентрации. Смесь инкубируют в течение 10 мин, перемешивая при 37 С. Затем в пробирку вносят 0,1 мл бромтимолового синего и 0,2 мл ацетилхолина и повторно инкубируют в течение 10 мин. Измеряют оптическую плотность раствора. По показаниям оптической плотности строят калибровочную кривую,Количество токсина в водорослях рассчитывают по формуле: где Т - количество токсина по сухому веще.ству мг/га - количество токсина по калибровочной кривой, мг;1 - объем исследуемого образца (разведение при проведении реакции);1, - объем после фильтрации, мл;Р - навеска сухого вещества, г;Ря - количество исследуемого экстрактадля проведения реакции, мл. Ф ор мул а изоб ретенияСпособ определения токсинов сине-зеленыхводорослей, включающий их выделение путем 15 экстратирования водой, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью количественной оценки токсичности биомассы водорослей, экстоакт инкубируют с холинэстеразой и ацетилхолп:1 ом с последующим фотометрированием в присут ствии индикатора бромтимолового синего.