Способ получения -глицерофосфата, меченого фосфором-32

,ЯО 6712 4 С 07 Г 90 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГЛИ 1 32УДАРСТЕЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71) Пермский ордена ТрудовогоКрасного Знамени государственныиуниверситет им. А.М.Горького(54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЫЦЕРОФОСФАТА, МЕЧЕНОГО ФОСФОРОЦс использованиемДВ -изопропилид глицерина, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения процесса и повышения удельной активности целевого продукта, смесь четыреххлористого углерода, о,1-изопрочилиденглицерина и пиридина, взятых в мольном соотношении (100-100,13):(0,161- 0,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 7-28 суток.2. Способ по 1;.1, о т л и ч а ю -и й с я тем, что облучение проводят на Ро-Ве-источнике быстрых нейтронов интенсивностью 4,0 10 нейтр/с,671277 Изобретение относится к области химии фосфорорганических соединений, а именно к способу получения о-глицерофосфата, меченого Аосфором, являющегося биологически активным 5 веществом, играющим центральную роль в биосинтезе соединений, ведущих к образованию глицерофосфатидов в клетках эу-и прокариотов.Известен способ получения о-глицерофосфата, меченого Аосфоромфосфорилированием д,1-изопропилиденглицерина, меченой хлорокисью фосфбра в присутствии тщательно измельченной гидроокиси бария и сухого 15 хинолина с последующим нагреванием бариевой соли 2,2-диметил,3-диоксолан-метнлфосАорной 2 Р кислоты с разбавленной серной кислотой 1Недостатками известного способа 20 получения Ы-глицерофосфата, меченого фосфором, являются: многостадийность синтеза промежуточных меченых продуктов, необходимость использования специальной аппаратуры, позволяю.25 щей проводить все операции процесса беэ.,нарушения герметичности системы, необходимость очистки промежуточных продуктов.Известный способ не позволяет 30 получать целевой продукт с высокой удельной активностью, так как она не может быть вьппе удельной активности меченой НЗ РО кислоты, из которой получен исходныи реагент -хлорокись АосАора, меченая Аосфором2.Целью изобретения является упрощение процесса и повьппение удельной активности целевого продукта. Поставленная цель достигается описываемым способом получения ь-глицероАосйата, меченого фосфором, заключающимся в том, что смесь четыреххлористого углерода, 3,1-йзопропилиденглицерина и пиридина, взятых в мольном соотношении (100- 100, 13):(О, 161-0,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 7- 5028 суток.Отличительным признаком способа является то, что смесь четыреххлорио- того фосАорад, 1-изопропилиденглицерина и пиридина, взятых в мольном 55 соотношении (100-100, 13):(О, 161" -0,03):0,02, облучают быстрыми нейтронами в течение 7-28 суток. гаОблучение проводят на Ро-Ве-источнике быстрых нейтронов интенсивностью 4,0 10 " нейтр./с в стеклянныхколбах или ампулах при температуре20+5 С.Идентификацию, выделение и очистку целевого продукта осуществляют спомощью метода бумажной хроматографииСредняя энергия быстрых нейтроновна применяемом Ро-Ве-источнике составляет 4 Мэв.Предлагаемый способ основан насовмещении реакцииполучения атомовотдачи АосАорапо ядерному процессу С 1(п,й)з Р и химических реакций атомов отдачи Р с молекуламисистемы СС 1 -СН-СН-СНОН с образова 1 .0 0/3)фнием целевого продукта, Посколькууказанная ядерная реакция протекает сизменением порядкового номера элемента, радиоактивный Аосфор получаетсяв состоянии без носителя. Это даетвозможность получать конечные препараты Аосфорас удельной активностью, близкой к предельно возможной.Общая активность целевого продукта, выделенная посредством тонкослойной хроматограАии из смеси полученныхпри облучении мишени меченых фосАоромсоединений, составляет5 10 ф - 2,5 105 расп./мин или 105 10 г по весу,Выход целевого меченого продуктав абсолютном .измерении в данном случае определяется только его радиоактивностью, т.е. количеством распада,в единицу времени.Чистота и индивидуальность меченого фосАороме(-глицероАосфатаподтверждена данными тщательногохроматографического анализа набумаге.П р и м е р 1. Смесь 400 г(0,0025 г моль) Д,й-иеопропилидеиглицерина и 0,05 г (0,0006 г моль)пиридина в стеклянной колбе облучают на. Ро-Ве-источнике нейтронов;интенсивностью 4 10 нейтронов/св течение 7 суток, После облученияосновную массу мишени отгоняют подслоем воды досуха при температуре100-110 С в вакууме 2 мм рт.ст.,затем в колбу добавляют каплю сол 55 ной кислоты (1: 1) и нагревают с671277 обратным холодильником в течение15 мин при температуре 100 С. Послегидролиза эфира с 1,1-изопропилиденглицерина в о-глицерофосфат активность вносят на хроматограмму из 5бумаги РИразмером 20 350 ммо(-глицерофосфат, меченый фосфором выделяют из остатка путем хроматографирования либо в системе растворителей: 1-пропанол-аммиак-вода(7:1:2), либо в системе 1-пропанол-трихлоруксусная кислота-вода-ам.чмиак (240 мл : 15 г 60 мл : 1 мл).Затем хроматограмму протягивают наустановке непрерывного радиометрирования хроматограмм и после проявления путем сравнения хроматограммыс записью потенциометра выявляютместо расположения активного о-глицерофосфата, который затем элюируют 20с соответствующего участка хроматограммы дистиллированной водой.Получают меченый фосфоромо-глицерофосфат в состоянии без носителя. с общей активностью около 255 ф 10 имп/мин. 1 О Радиохимический выход, 7 о(-глицеро- НР 20 Т НЗРО Н 5 Р 02фосфат 4,5 9,9 11,4 36,0 12,6 (99,95) 0,0006 (0,02) 0,0008 (0,03) 22,9 3,4 4,2 0,0042 (0,16) 0,0006(0,02) 56,5 2. 2,6 (99,82) Для проверки надежности идентификации в колбу добавляют каплю Н 10 и нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч. о-глицерофосфат окисляется иодной кислотой, После окисления о-глицерофосфата активность наносят на хроматограмму и хроматографируют в растворителе -СНОН-ИНОН-Н 0 (7: 1:2). При по- . следующем радиометрировании хроматограммы исчезает пик активности с величиной К = 0,55, тем самым подтверждается чистота и индивидуальность полученного о-глицерофосфата, меченого фосфором. УУ Состав мишени г-моль, мол .Х СС 1 с 1,-изопропи- пиридин лиденглицерин П р и м е р 2. Для идентификации строения целевого продукта биологическими методами осуществляют препаративное получение о-глицерофосфата, меченого фосдюром, Для этого смесь 3260 г (21. г моль) СС 1 , 0,85 г (0,0065 г моль) о,Е- . пропилиденглицерина и 0,4 г (0,005 г моль) пиридина облучают Ро-Ве источником нейтронов интенсивностью 410 нейтронов/с в течение 28 сут. После отгонки основной массы мишени остаток количественно переносят в микроколбу и отгоняют содержимое при температуре 100-110 С в вакууме досуха. Затем добавляют в колбу 1 мл разбавленной соляной кислоты (1:1) и нагревают в течение 15 мин с обратным холодильником приотемпературе 100 С, после чего содержимое колбы выпаривают досуха. Активность смывают со стенок колбы водноацетоновой смесью и наносят на хроматограмму. Хроматографирование производят в растворителе д-С Н ОН 3 -МН ОН-Н 0 (7:1:2) и после высушивания хроматограммы снимают радио- автограф. С хроматограммы вырезают участок, соответствующий местонахождению о-глнцерофосфата и элюируют Ы-глицерофосфат дистиллированной водой. Получают водный раствор а-гли церофосфата, меченого фосфором, в состоянии без носителя с общей активностью 3 мккюри.Аналогично проводят получение Ы-глицерофосфата, меченого фосфором, при различных соотношениях исходных реагентов. В таблице приведены соотношения реагентов и радио- метрический выход меченых фосфо- ромсоединений.671277 Корректор В. Гирняк Редактор П.Горькова Техред ц.неце Заказ 6644/4 Тираж 353 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб , д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Оптимальным соотношением реагентов для получения меченого фосфором-глицерофосфата является след "ющее (в г моль): четыреххлористый углерод 2,6, 3, 1-изопропилиденглицерин;0,0025, пиридин - 0,0006. При этомсоотношении выход с(гглнцерофосфатамеченого фосфором, составляет 59,57.,