Способ получения 4-дезацетоксивинбластина или его солей

Союз Советских Сещиалнстических Республик5 19/0 401/45 осуаарствеввцй комвтет: СССР по делам взобретеввй и открцтвй .7 8 Иностранцович, ЛайЯнош Щугарф Тамаш и. (ВНР) 2) Авторы йзобретени ош Данч Жуж рон СВова еринц Йож и, Шандор Экардт,а Релле, Кальман С ар Чаб елешииятиесети Дьяр РТ И редпр Ведье Заявит 1 1 р(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯИЛИ ЕГО СИВИНБЛАСТИ 4-ДЕЗАЦЕСОЛЕВ р, 2изобретение о носится к способу ем маточного раствора, с последующейполучения 4-дезацетоксивинбластина экстракцией раствора водным фосфатили его солей, обладающих цеинйми ным буфером с рН 3,7-4,3,экстрацией лечебными свойствами. . отделенной кислой водной фазы дихлор 4-Дезацетоксивкнбластин является 5 метаном н отделением органическойсопутствующим алкалоидом, содержащим-Фазы, содержав(ей основное количество ся в растении Ч 1 пса гозеа Ь. : .-винбластина, от водной фазы, содерИзвестен способ получения 4-деэ- жащей остальные дииндоалкалоиды, пос. ацетоксивинбластина хроматографиро-ле чего рН водной кйслой фазы довованием бенэольного раствора винблас.- 10 дят до 7,5-10 и полученяый водный тина, выделенного из растительного -.щелочной раствор экстрагируют" дихло сырья и содержащего 4-дезацетоксивин- метаном, упаривают органическую фабластин, на окиси алюминия И степе" . зу, содержащую наряду с 0-дезметил:ни активности, с последующей перек-. винбластином, эиикристином и винбласристаллиэацией из метанола и хрома-.)5 тином целевой продукт, остаток пос- тографией на силикагеле 111 ..ле .Упаривания формилируют .с помощьюНедостатком способа является до-муравьйной кислоты в присутствиивольно невысокая чистота целевого; уксусого.ангидрида, после чего рН продукта. формилированйой смеси доводят доЦель изобретения - повышение чис- Ю 7,-10 с помощью щелочи,.водный ще-тоты целевого продукта - достигается , дочкой раствор ЭкСтрагируют бензолом.способом, заключающимся в том, что.йли дихлорметаном, экстракт упариваиз смесей солей сопутствующих дииндо-ют н остаток лбслЕ упаРиваяия Раздеалкалоидов, содержащихся в растении ляют с номощьв хроматографии на часЧ 1 пса гоэеа Ь, выделяют основания 25 тично дезактивврованной окиси алюмидииндоалкалоидов, отделяют от раст="- ния, госле чего целевой продукт вы- вора смеси оснований дииндоалкалоидовделявт в свободном виде или .в виде выпадающий в осадок винлейрозин,соли известными методами.растворяют в органическом раствори- , Целесообразно проводить растворе- теле остаток, полученный упаривани-3) иие исходной смеси солей, предпочти3 66 714 тельно сульфатов дииндоалкалоидов, в органическом растворителе, желатель но в ацетоне илие С -Сэ-алифатическом спирте, лучше в метаноле.Растворение проводят при 0-50 С, предпочтительно при комнатной температуре. 5Для получения оснований дииндоалкалоидов к раствору дрбавляют основание, например моноэтиламин диэтиламин или пиридин; Образующееся основание лейрозина при 0-25 С выпадает 0 в осадок. Для более полного отделения лейрозиьа смесь можно охладить до 0 С. лейрозин отфильтровывают, проМывают тем же растворителем, который был использован для растворения солей алкалоидов, и высушивают. Сырой Аейроэин может быть очищен известным сцособом, например перекристаллиэацией, и/йли переведен в соль, предпочтительно в сульфат.Полученнйй после отделения основания лейроэина маточный раствор упаривают при пониженном давлении, остаток растворяют в органическом растворителе, желательно в углеводороде бензольного ряда, например в бенз.ле, толуоле или ксилоле, но лучше всего в бенэоле, причем сульфат применяемого для получения оснований дииндоалкалоидов основания (моноэтил- . амина, диэтиламина или пиридина) ЗО выпадает в осадок. Сульфат отфильтовывают,фильрат экстрагируют водным фосфатным буфером с рй 3,7-4,3. Объедийенные кислые водные фазы подкисяяют кислотой, желательно фосфорной, 35 до рН 3,5-4,1, экстрагируют дихлорметаном, объединенные органвческие фазы высушивают над безводным сульфатом натрия. Остаток оосле упарйвания содержит винбластин, который може быть переведен в соль, желательно в сульфат.К водной фазе добавляют основание, преимущественно.хлорид аммония, до рН 7,5-10, полученный водный щелоч иой раствор экстрагируют несмешивающимся с водой органическим растворителем, желательно дихлорметаном или хлороформом, и объединенные органи- ческие фазы упаривают. Остаток после упаривания, содержащий винкристин, Я-деэметилвинбластин, небольшое количество винбластина и 4 дезацетоксивинбластина формилируют смесью муравьиной кислоты и уксусного ан-. гидрида; При этом содержащийся в сме- М си алкалоидов О дезметилвинбластин количественно переходит в винкристин. Затем реакционную смесь разбавляют 5-15-кратным, лучше. 10-кратным, коли чеством воды и доводят рН до 7,5-10 60 с помощью щелочи.,Щвлочной раствор экстрагирувт не-. смешивающимся с водой растворителем, предпочтительно углеводородом бенэольного ряда илихлорированным уг 0 4леводородом, например .ензолом,толуолом, ксилолом, дихлорметаномилн хлороформом, желательно бензолом.Объединенные экстракты упаривают при пониженном давлении, остаток, содержащий зинкристин, винбластин и 4-дезацетоксивинбластин, растворяют в органическом растворителе, например в смеси углеводорода бензольного ряда и хлорированного углеводорода, желательно в смеси бекзола и хлороформа, и дииндоалкалоиды разделяют с помощью хроматографии на частично дезактивированной окиси алюминия, В качестве элемента обычно используют смесь бензола и хлороформа в ступенчато изменяемых количествах. Полученные фракции могут быть.идентифицированы с помощью тонкослойной хроматографии. Фракции, содержащие одинаковые алкалоиды, объединяют, Переработку фракций, содержащих вннкристин и винбластин, осуществляют иэвестнйм способом. Фракции, содержащие 4-дезацетоксивинбластин, объединяют и упаривают при пониженномдавлении, остающийся сырой 4-дезацетоксивинбластин очищают перекристаллизацией или переводят в соль.П р и м е р 1. Получение сырого 4-дезацетоксивинбластина.50 г неочищенцой смеси сульфатов дииндоалкалоидов растворяют при комнатной температуре в 300 мл метанолаи при перемешивании добавляют 13 млдиэтиламина, охлаждают до 0 С и выдерживают 1 ч при этой температуре.Кристаллы отфильтровывает, промывают небольшим количеством метанолаи высушивают в вакууме. Получают6,4 г сырого основания лейрозина,что составляет около 90-95% от общего содержания лейрозина в исходнойсмеси сульфатов дииндоалкалоидов.Сырой лейрозин может быть очищенйерекристаллизацией или переведенИзвестнЫм способом в сульфат,Фильтрат упаривают при пониженномдавлении досуха и остаток растворяютв 2500 мл бензола, наблюдая выпадение в осадок сульфата диэтиламина,который отфильтровывают, промываютнебольшим количеством бензола и используют для регенерации диэтиламина.Бензольный фильтрат экстрагируютЭл 2500 мл водного фосфатного буфера с рН 4,0 1 0,1 (10-ный водный раствор первичного кислого фосфорнокислого наТрия, к которому добавляют1 н,фосфорную кислоту до рН 4,00,1).Полученные при экстракции водные фазы объединяют, подкисляют 1 н.фосфорной кислотой до рН 4,00,1 и экстрагируют 4 х 2500 мл дихлорметана. Органические фазы объединяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают досуха при пониженном давлении. Получают 25 г винбластина, который может быть беэ дальнейшейочистки использован для получениявинкристина полусинтетическим способом.25 г винбластина растворяют в80 мл метанола и прибавляют 0,3 об,ный раствор серной кислоты в гтаноледо рН. 5,0. При стоянии иэ раствора 5выпадает кристаллический осадок сульфата винбластина.К водной фазе после экстракциидихлорметаном добавляют концентриро-.ванный раствор аммиака до рН 8,5-9,0 10и экстрагируют 4 х 800 мл хлороформа.Экстракты объединяют, высушиваютнад безводным сульфатом натрия ифильтруют.фильтрат упаривают при пониженномдавлении и аморфный остаток смесиалкалоидов (8 г) растворяют в смеси45 мл муравьиной кислоты и 11 мл уксусного ангидрида, выдерживают 515 мин при комнатной температуре,разбавляют 10-кратным количествомохлажденной до 5 С дистиллированнойоводы, добавляют концентрированныйраствор аммиака до рН 8,5-9,0 и экстрагируют 4 х 800 мл бенэола,Бензо)ьные фазы объединяют, упаривают, аморфный остаток смеси алкалоидов (6,9 г) растворяют в 42 мп смесибензола и хлороФорма (1:1) и пропус-кают через колонку (диаметр 4 см)с суспензией окиси алюминия (актив-30ность 1 Я -ч, 345 г) в смеси бенэолаи хлороформа (9:1),Вначале через колонку пропускаютсмесь бенэола и хлороформа (9:1) иотбирают фракции по 100 ып. 35Отдельные Фракции исследуют методом тонкослойной хроматографии (окисьалюминияна алюминиевой фольге,элюент - смесь 100 мл бензола, 50 мпхлороформа и 7,5 мл диэтиламина), 4,фракции 3-10, содержащие 4-дезацетоксиейнбластин, объединяют иупаривают при пониженном давлении,получая 1,7 г неочищенного 4-деэацетоксивинбластина.фракции 11-36 элюируют смесью бензола и хлороформа (4:1) и идентифи- .цируют компоненты Фракций методомтонкослойной хроматографии (см.выше),фракции 11"19 объединяют и упаривают при пониженном давлении, получая 0,6 г смеси винбластина и 4-дез"ацетоксивинбластина (1:1), которуюможно разделить на отдельные компонентй.для этого растворяют остаток пос- .55ле упаривания в смеси бенэола и хлороформа (91) и пропускают через колонку,заполненную суспенэией окиси алюмйния (активностью- ч) в смеси бенэола и хлороформа (9:1). Получают600,18 г винбластина и 0,20 г 4-дезацет- .оксивинбластина.фракции 20-24 объединяют и упаривают при пониженном давлении. Остатоксодержит 0,9 г винбластина.11В фракциях 25-36 содержится небольшое количество (0,3 г) 4-дезацетоксивинбластина,Остальные фракции (25-36) элюируют смесью бенэола и хлороформа (11Упариванием объединенного элюата припониженном давлении получают 1,7 гвинкристина.П р и м е р 2, Очистка 4-дезацетоксивинбластина.1,7 г неочищенного 4-дезацетоксивинбластина растворяют в 25 мл смесиметанола и воды (32), охлаждают до5 С и выдерживают при этой температуре в течение 16 ч. Кристаллы отфильтровывают, промывают 3-4 мл вышеуказанной смеси метанола и воды, охлажденной до 5 С,и высушивают. Получают 1,3:г 4-дезацетокувинбластина,т.пл. 90"193"Су (а ). = 107 С (с1 хлороформ).Вычислено,% С 70,19 у Н 7,50)Б 7,44; О 14,97.Сйзь В О.Найдено,%: С 69,85 а 7,52В 7,23; О 14,97.Массовое число 4-деэацетоксивинбластина (в/е=752) измеренное повеличине пика иониэированйых молекул,на 58 массовых единиц меньше,чеммассовое число винбластина (щ/е == 810)Разница .соответствует массеацетоксигруппы,Оба дииидоалкалоида состоят.иэвелбаминовой и индолиновой частей.так как массовые числа, характерныедля велбаминовой части и для пика основания Велбаминовой части, имеютсяи в масс-спектре деэацетоксивинблас"тина (М/е=355, соответственно й/е=154), то отсюда следует, что в индолиновой части упомянутая ацетоксигруппа отсутствует, На основаниихарактера расщепления линий массспектра (в/ев 122,135,224) можно предположить, что эта ацетоксигруппа приобразовании 4-дезацетоксивинбластинаотщепляется от четвертого атома углерода винбластина.В ЯИР-спектре. 4-деэацетоксивинбластина отсутствует пик 8 2,09 м.д.,характерный для 4-ацетоксигруппы,который присутствует в ЯМР-спектревинбластина,ЯМР.-спектр 4-дезацетоксивинбластина (д), м,д. 2,73 (И-метил),3,60 (;сарббметокси), 3,81 (ОСН , связанная с ароматической группой,3,85 (карбометокси).П р и м е р 3. Получение сульфа"та 4-деэацетоксивинбластина.1,1 г неочищениОго 4-дезацетоксивинбластина разбавляют 1,25%-нымспиртовым раствором серной кислотыда рй ",5 и выдерживают 2 ч при 54 с.КристаЛлы отфильтровывают и промывают 2-3 мл охлажденного до 5 С этанола. Получают 0,95 г сырого сульфата4-дезацетоксивйнбластина, который667140 формула из обретени я 7растворяют в 25 мп метанола, разбавляют 25 мл ацевтойа, йромывают" 2:3 мл охлажденного до 5 С ацетона и высушйвают, получая 0,83 г очищенного сульфата 4 юдеэацетоксивинбластина, (ф ) =29,0 (с = 1, метанол),Ю Способ получения 4-деэацетоксивинбластина или его солей из растения Ч 1 пса ковеа Ь, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повышения "качества целевого продукта иэ смесейсолей дииндоалкалоидов, содержащихсяв вышеуказанном растении, выделяютоснования дииндоалкалоидов, отделяютот раствора смеси оснований дииндоаалкалоидов выпадающий в осадок вин 1лейрозин, растворяют ворганическомрастворителе остаток, полученйыайупариванием маточного раствора, с последующей экстракцией полученногоорганического раствора воднымфосфаттным буфером с рН 3,7 т 4,3 и зкстракцией отделенной кислой водной фаэзйдихлорметаном и отделением органическй фазы, содержащей основное колйчество винбластина, от водной фазы,содержащей остальные дииндоалкалоиды,после чего рН водной кислой фазы доводят до 7,5 т 10 и полученный водныйщелочной раствор экстрагируют дихлорметаном, упаривают органическую фазу,5 содержащую наряду с И-дезметилвинбластином, винкристином и винбластином целевой продукт, остаток послеупаривания подвергают формилированиюс помощью муравьиной кислоты в при 10 сутствий уксусного ангидрида, послечего рН формилированной смеси доводят до 7,5-10 с помощью щелочи, водный щелочной раствор экстрагируютбензолом или дихлорметаном, экстрактупаривают и остаток послеупаривания разделяют с помощью хроматографии на частично дезактивироваинай окиси алюминия, после чего целевой продукт выделяют в .свободном- вид или в виде соли.Источиики информации, принятые вовйимание при экспертизе1. Часа айЕа 1 оЫз ХХХУ Оевасе 1 о,хуч 1 пЬВавЫпе - а печ МЫог ЩЕайоЫйгоощ Ч 1 пса гозеа. Ь, Н. Яецзз, А,д.28 Вагпевв; ЯцЖзсер, ехрег 1 епс 1 а31/1, 18-19 (1975), Составитель И.федосееваРедактор Т", Шарганова Техрвд О; Андрейко. Корректор С, Шекмарэююеииа ввтете еэ ите еюею иаеиюют еююваюеиееаавюе эе тиета иа а т т ваэЗаказ 3244/48 . Тираж 512 . ПодписноеЦНИИПИ ГбсударсЖениоГокб 14 итетаэ СССРпо делам изобретений и:открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб.,д. 4/5;,етт ееавйюю т-е ют тютю ютююююююттюют тютевиююютиэ тютю юю тютю тюта иэфилиал ППП фПатентф, г.ужгород, ул.Проектная,4