220170

220170 ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Советских Социалистических РеспубликЗави ый 1 л. 12 т 1, 6(0 Заявлено 06 Ч 11,1966 ( 1096290/23с присоединением заявкиПт;С 0 ет 24 Л 111.1965,11898(65,царияовано 14.Ч 1.1968. Бюллетень1 Комитет по аелам изобретений и открытию ори Совета Министров СССРриори Швей публи УД К 547,964.4.07 (088.8 бликования описания 30.1 Х.196 Дата Авторы изобретения Иностр з подданства), Стетош Плесс Заявитель я фирма Г, Базельрия СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 0-СЕРИЛ-Ь-ТИР-1.-АРГИ Н ИЛ.-ТРИ ПТОФАН ИЛ ГЛ И ЦИЛ.-Л-АРГИ НИ ОЗИЛ 2 Предлагается способ получения нового пентаикосапептида - Р-серил-Ь-тирозил-Ь-серил- -норлейцил.-глутамил.-гистидил - 1. - фенилаланил-Ь-аргинил-Ь - триптофанилглицил- -1.-лизил-.-пропил-.-валилглицил-лизил - 1.- -лизил.-аргинил.-аргинил.-пролил - 1. - валил-.-лизил.-валил.-тирозил.-пролил - 1.- -валинамида, характеризующегося высокой адрснокортикотропной активностью.Способ заключается в том, что Ь-валил-е-К -К.-лизил.-валил.-тирозил.-пролил- валинамид, где К - карботретбутокси-, карботретамилокси-, толуолсульфонил-, фталил-, формил- или трифторацетилгруппа, конденсируют известным способом, например методом 15 смешанных ангидридов, с Х-карбобензокси-Ь - -валилглицил-еч-К-Ь-лизил-е-К-К - 1. - лизилнитро.-аргинилпитро.-аргинил. - пролином, где К имеет вышеприведенное значение, полученный К-карбобензокси-Ь-валилглицил-еч-К -Ь-лизил-е-о 1-К-Ь-лизилнитро-Ь-аргинилнитро- -Ь-аргинил-Ь-пролил-Ь-валил-е-М-К-Ь - лизил-.-валил.-тирозил.-пролил.-валинамид после отщепления нитро- и К-групп известным методом, например гидрированием в кислой 25 нцыфан Гуттманн и Роже Буассонна рия) среде над палладием, конденсируют с а-.ч-трифенилметил-у-О-третбутил-Ь-глутамил - Им -трифенилметил-Ь-гистидил. - фенилаланил- -Ь-аргинил-Ь-триптофанилглицил-еч-К-Ь - лизил-пролином известным методом, например карбодиимидным, и полученный аЛ-трифенилметил-у-О-третбутил-.-глутамил- И,и - трифенилметил.-гистидил.-фенилаланнл. - аргинил-Ь-триптофанилглицил-еч-К-Ь - лизил - 1.- -пролил-валплглицил-е-Х-К-Ь-лизил-е-К - К- -.-лизил.-аргинил.-аргинил.-пролил. - валил-еч-К-Ь-лизил-Ь-валил-Ь-тирозил-Ь - пролил.-валинамид после отщепления а-Ж-трифенилметилгруппы известным способом, например гидролизом 80% -ной уксусной кислотой, конденсируют с М-К-Р-серил-Ь-тирозил-Ь-серил.-норлейцилазидом, где К - трифенилме тил- или карботретбутокси-, карботретамилокси-, карбобензокси-, трифторацетил-, ацетил-, хлорацетил- или формилгруппа, с последую:цим отщсплением К-, К- и Илт-трифенилметилгрупп известными способами, например гидрированием или ацидолизом.Указанный пентаикосапептид синтезируется общеизвестными методами (метод смешанных3ангидридов, азидный и карбодиамидный методы), причем аминокислоты скрепляются между собой согласно формуле после предыдущего образования меньших пептидных единиц. Синтезированный пентаикосапептид по сравнению с адренокортикотропными препаратами не обладает антигенныги свойствами и имеет пролонгированное действие.В примерах употребляются следующие сокращения: кбз - карбобензокси; трит в тритилтрифенилметил; КТБ - карботретбутилокси; ТХФ - 2,4,5-трихлорфенокси; ТБО - третбутилокси; ОМе - метокси; ОЕт - этокси; арг - аргинил; глу - глутамил; гли - глицил; гис - гистидил; лиз - лизил; нлсй - норлейцил; фал - фенилаланил; про в прол; сер в сер; Д-сср - Д-серил; три - триптофанил; тир - тирозил; вал - валил; Им - имидазолил. П р и м е р. 88 г кбз-иТро-арг-нитро-арг-про-ОМе растворяют в 900/О-ной смеси диоксан - вода и прибавляют к ним 220 мл 2 н. раствора едкого патра. Через 2 час получешую массу разбавляют 1 л Воды и несоо раз про:51 Ы- вают эфиром уксусной кислогы, Затем под- КИСЛ 51 ГОТ ПОЛГсГНЬГ 1 ВОДЫЙ 1)ЯСТВОР РЯСТВО- р 031 4 н. соляноЙ кислоьГ, раствОГря;От ВыпавшиЙ п 1 тодукт В смеси метанол: ацетон=: 1 и осаждают эфиром. Полуцают 70 г кбз-нитро-арг-итро-арг-пролипа с т. пл, 108 С (сразл.), /Гх/р - 19 В диметилфОрмамиде. Получен.ный пептид растворяют в 400 г,г 33 м-ного раствора бромводорода в ледяной уксусной кислоте, оставляют эту массу стоять па 1 час при 20 С, после чего ее (Окце 11 триругот до 200 мл, осаждают эфиром, (оильтруют, промываот этилацстатом и сушат. ПолучаГот 72 г броьгкГдрята питро-арг-нитро-арг-пролипа с т. пл. 84 С (с Разл.), /сс/р - 19" в 95(о-пой уксусной кислоте.К раствору 72 г бромгидрата пптро-арг нитро-арг-пролина в 600 гл диметилформамида и 56 мл триэтиламина добавляют при 0 С 84 г кбз-вал-гли-КТБ-лиз-КТБ-лизиназида, полученного из 85 г соответствующсго гидразида.Раствор оставляют стоять па 16 час и затем упаривают. Остаток растворяют в смеси бутанол; эфир уксусной ГИГслоты = 2: 3 и промываГот несколько Раз Разоавлеппым РЯСТВОРоцг серной кислоты. Раствор концентрируют в вакууме и осаждаГот эфиро:,1, Полуцают 90 г кбз-вял-глу-КТБ-лиз-КТБ-лиз-нитро-арг - нитро-арг-пролина с т. пл. 151 С (с разл.), /сг/р - 38 в метаноле.56 г полученного продукта растворяют в 900 мл димстилформамида и 900 мл тстрагидрофурана. К раствору прибавляют 6,2 м,г триэтиламина, охлаждают до - 10 С и добавляют к ним при этой температуре 4,2 мг этилового эфира хлормуравьиной кислоты. Через 10 мин туда же вводят 36 г вал-КТБ-лиз-вал-тир-про-валинамида в 160 мл диметилформамида и размешивают эту массу при 20 С более 16 час, Затем растворитель испаряют в вакууме и остаток промывают водой. Пептид растворяют в 5 10 15 20 25 Зо 35 40 45 50 55 60 65 горячем этаноле и осаждают эфиром уксусной кислоты. Осадок отфильтровывают, высушигаГот и получаот 72 г кбз-вал-глу-КТБ-лиз- -КТБ-лиз-нитро-арг-нитро-арг-про-вал - КТБ- -лиз-вал-тир-про-валинамида с т. пл. 190 С (с разл.), /сг/р - 36" в диметилформамиде.72 г полученного амида растворяют в 1,5 л 800/О-ной уксусной кислоты, добавляют палладий - катализатор, гидрируют до прекращения поглощения водорода и отфильтровывают катализатор. После концентрации остаток растворяют в 500 м,г метанола, охлаждают до - 5 С, прибавляют 4,1 г и-толуолсульфокислоты и осаждают эфиром. Получают бб г три-толуолсульфонат-вал - гли - КТБ - лиз - КТБ- -лиз-арг-арг-про - вал - КТБ - лиз - вал - тир-про-вялинамид с т. гл, 185" С (с рязл.), /сг/ р - 42 в диметилформ амиде.62 г полученного продукта растворпот в 300 л пиридина и 300 мл ацетонитрила и добавлгпот 57 г трит-ТБО-глу-грит-гис-фал-арг- - Г 1 и-гли-КТБ-,из-пролипа. Когда все растВО- рГГтс 51, массу Охлаждают до 0 С и пГрибявляОт к псЙ 28,6 я;1 ГГиклогеГ(сиГИ(ярбогиГида. После 24 час ВзбялтывяГГия пр;1 20 С ОтфильтровыГяОГ лСчсГу и Осяждяот эфиро(1. Продукт повторно рясгвор 5 Гот в метаноле и о.ажда от зфироз 1 уксусной кислоты, Полуцаот 90 г триго;Г, Олсльфонята трит-ТБО-глу-трит-гис-фал-арг-тр 1-гли-КТБ-лиз-про-вял-гли - КТБ - лиз- -КТБ-лиз-Грг-я 1) г-прО-вял-КТБ-лиз - вал - тир-про-валинамида с т, пл. 184 С (с рязл.), /с/р - 51 в метаноле,45 г полученного продукта растворяГот в 500 м,г 800 гоГГ-ной уксусной кислоты и оставляют на 2 час при 30 С. Затем добавляют 50 мл амберлита 11(лв форме ацетата, фильтруот, испаряют в вакууме и растворпот осадок в метаноле. После осаждения эфиром получают 40 г ТБО-глу-трит-гис-фал-арг-три-гли-КТБ- -лиз-про-вал-гли-КТБ-лиз-КТБ-лиз-арг - арг-про-Вал-КТБ-лиз-вал-тир-про-валинамида с т. раза. 170 С, /с(/р - 49 в метаноле,54 г хлоргГГТГрата сер-нлсй-ОМе и 63 г кбз-тирозГгпя раствор 51;от в 860,г,г ацетонитрила, охлаждают до 0 С, прибавляют 27 мл триэтилами;я, охлаждают до - 10 С и затем вводят 41 Я дициклогскс лкарбодиимида. Смесь разГсшивягот 1 О час гр 11 0 С и пото:ГГ фльтруют. Оса;Гок поомьГвяГот с 1400 мл пнридина. Соедипс 11 ныс фильтратьГ испаряют и кристаллизуГОт Оста:Ок из эфира уксусноЙ кислоты. ПО- лгчяГОт 101 г кбз-ир-сер-плей-ОМС (т, пл.140- - 142 С, /сг/р - 15 в йиметилформами)Ге)51 г получснного таким образом продукта расгворяют в 2 .г 1 н. раствора соляной кислоты в метаноле и гидрируют вместе с 10 г палладия-угля, Приблизительно через 2 час прекращается поглощение водорода, Раствор фильтруют, испаряют и кристаллизуют остаток из смеси метанол: эфир=3: 1. Получают 42 г тнр-сер-нлей-ОМе с т. пл, 22 С, /а/р -в димстилформамиде.60 г ."(лоргидрата метилового эфира Д-серипа5 10 15 го 50 55 бо б 5 растворяют в 200 м,г диметилформамида и 54 мл трнэтцламина, охлаждают до 0".С и отфильтровывают триэтиламингидрохлорид. Диметилформамид испаряют в высоком вакууме и раствоэяют остаток в 150 мл пиридина. Затем прибавляют по каплям 100 г третбутилоксикарбоцилазида ц оставля 1 от на 2 дня прц 20"С, Далее растзоритель испаряют и растворяют продукт в эфире уксусной кислоты. После промывания водой, разбавленной соляной кислотой, и раствором двууглекислого калия продукт высушивают над сульфатом натрия. После испарения эфира уксусной кислоты остается КТБ-Р-сер-ОМе в виде масла, которое растворяют в 400 мл метанола и оставляют с 50 мл гидразишидрата на 2 дня при 20 С. Гидразид кристаллизуется после испарения метанола. После перекристаллизации цз горячего эфира уксусной кислоты получают 53 г КТБ-Р-серингидразида с т. пл, 114 С, /с;1" - 3 в диметилформамиде. 1 О г КТБ-Р-серицгидразида растворяют при - 10"С в 136 мл растворан. соляной кислоты, содержащей 15 г хлорида натрия. При этой температуре к ним прибавля 1 от 160 мл эфира уксусной кислоты, а затем в три порции - 38 г нитрита натрия. При постоянном размешивании при 20 С массу оставляют реагировать еще 5 мик. Далее отделяют фазу эфира уксусной кислоты, промывают холодным 0,о-ным раствором двууглекислого калия и просушивают над сульфатом натрия, К просушенному раствору прибавляют раствор, состоящий из Зг хлоргидрата тир-сер-нлей-ОМе в 60 л.г диметилформамида и 6 л,г триэтиламина. Концентрируют раствор в вакууме и оставляют на 6 час при 20 С. Оставшийся растворитель отгоняют в вакууме, растворяют остаток в эфире уксуснои кислоты, промывают разбавленной фосфорной кислотой и раствором двууглекислого калия и просушивают над сульфатом натрия. После концентрирования растворителя и осаждения эфиром получают 15 г КТБ-Р-сертир-сер-нлей-ОМе (т. пл. 135 С, /с/ро - б в метаноле) . 11 г КТБ-Р-сер-тир-сер-плей-ОМе растворяют в 100 мл метанола, прибавляют 45 мл гцдразцнгидрата и оставляют на ночь при 20 С. Продукт кристаллизуется, Затем его фильтру 1 от и промыва 1 от еаоом и петролейцыз 1 эфиром. Получают 7,7 г КТБ-Р-сер-тцр-сер-цлсй-гидразида с т. пл. 210 С, /с:,/ +о,4 в диметилформамиде. 2 г полученного гидразида растворяют в 12 мл диметилформамида, добавляют 4 м,г воды, охлаждают до - 10 С, прибавляют еще 2 мл раствора б н. соляной кислоты и 280 лг нитрита натрия, перемешивают все это 5 мин при - 5"С, а затем вводят 300 мл 0,2 н. раствора бикарбоната калия и центрифугируют, Растворяют полученный КТБ-сер-тцр-сер-нлей-азцд в 50 м г диметилформамида, добавляют 25 зо 35 40 45 к пим 10,5 г ацетата ТБО-глу-трцт-гис-фал-арг-трц-гли-КТБ-лиз-про-вал-гли - КТБ - лиз-вал-гли-КТБ-лцз-КТБ-лцз-арг-арг- про - вал- -КТБ-лиз-вал-тир-про-валцнамцда ц оставляют ня 12 час при 0 С. После этого добавляют еще тетрапептидазид, приготовленный цз 2 г КТБ-Р-сер-тир-сер-нлсй-п 1 дразида, полученную массу оставляют ца 6 час при 0 С, упаривают, обрабатывают эфиром уксусной кислоты, промывают горячим ацетоном и эфиром уксусной кислоты и сушат в вакууме. Полученный продукт растворяют в 100 лл 90%-ной трифторуксусной кислоты, оставляют начас при 20 С под азотом, упарцвают, обрабатывают эфиром уксусной кислоты, фильтруют и сушат. Полученный продукт растворяют в 500 л 1 л 0,2 ц. раствора уксусной кислоты, обрабатывают амберлцтом 1 РЛв виде ацетата, фильтруют ц лцофилцзцру 1 от. После сушки над ед;11 м натром получают 7,5 г Р-сер-тцр-сер-нлей-глу-гис-фал-арг-трц-глц-лцз-про-вал-глц - лиз-лиз-арг-арг-про-вал-лцз-вал-тцр-про - валцнамцдя гсптяяцетятдекягцдрятя, который является гомогенным прц хроматографии ц элсктрофорезс . Полньш п 1 дролцз даст следующее соотношение аминокислот: сер 1,о, тир 1,о, 1 лсй 1 л, глу 1,о, гцс 1,о, фал 1,1 аргз,1, гл 11 з.о, лцз 41 прозо, валз,о .Вычислено, з,;,: С 51,9; Н 7,5; Х 16,2; О 24,4, Найдено, 7: С 52,1: Н 7,5; Х 15,6; О 24,8.Т. п. продукта 209 С (с разл.), /сс/о - 80 гн, уксусной кислоте. Предмет изобретения Способ получения Р-серил.-тцрозцл.-серил.-норлейцил.-глутамцл.- гистидил - 1.- -фенцлаланил.-аргцнил - 1. - трцптофаццлглццил.-лцзил.-пролил. - валцлглццил. - лизцл-лизил.-аргшзцл.-арп 1 нцл. - пролил- -1.-валил-лизцл.-валил. - тцрозил. - прол цл.-валин амида, от.1 ича 1 оиийся тем, что-валил-е-Х 1 -К.-лцзцл.-валил-тцрозцл - 1.- -пролил.-валицамид, где К - карботретбутоксц-, карботретамцлоксц-, толуолсульфоццл-, фталил-, формцл- цлц трцфторацетцлгруппа, конденсцру 1 от известным спосоооз 1, например мстодоз 1 смешанных ангидридов, с М-ка)збобсцзокси.-валилглцццл-е-М-К-е -лцзцл-е-Х-К - 1.- лизцлнитро-арпшцлццтро.-аргц 1 шл- пролцном, где К имеет вышепрцв,дсццос значение, полученный 1-1:.Ярбобецзоксц.-валцлглицил-е-Х 4-1.-лизил-е-Х-Й.-лцзцлццтро. - аргцццлнитро-арппшл.-пролил.-валил-е - Х- -К.-лизцл.-валил.-тцрозил.-пролил - 1.-валцнамид после отщепленця ццтро- ц К-групп известным методом, например гидрироваццсм в кислой среде няд пяллядцем, коцдснсцруют с с-Х-трифенцлмстцл-у-О-третбутцл. - глута 11 ил-Им-трифенцлметил.-гцстцдцл- феццлаланцл.-аргиццл.-триптофяццлглцццл-е - Х- -К- -,дизцл.-прол 1 п 1 ом известным методом,например карбодццмидцым, и полученный а-Х- -трифенцлметцл-у-О-трстоутцл - 1. - глутаз 1 цлРедактор Л. А. Ильина Корректор Н, Босняцкая Заказ 282 ИО Тираж 530 ПодписноеЦПИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРМосква, Центр, пр. Серова, д. 4 т погоайия, пр. Сапунова, 2