Способ хранения ларвального альвеококка

ИЗОБРЕТЕН А,ВТОР У СВИДЕТЕЛЬСТВ 2 апьвеококка осущестго пассирования на лачего из ларвоцист зарют зародышевые элемепятикратно фильтруют21 ацефапоцисты ввоной оости животноги развившиеся в теченицисты используют затемнорского материала длния паразита 1 табл. 21) 4827949/1322) 25.04.9046) 30.12.93 Бюл. Йя 48-4771) Институт медицинской паразитологии и тропиеской медицины им.ЕИ.Марциновкого72) Коваленко Ф.ПДжабарова В.ИБаллад Н.Е;барский АИ Буланова Т.Е54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ЛАРВАЛЬНОГО АЛЬЕОКОККА57) Использование: медицинская ларазитология.ущность изобретения: сохранение ларвального ОЮ ЬЭ О СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК ОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ ЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ С ОПИСАНИ вляют путем внутрибрюшиннобораторных животнык дпя аженного животного выделянты, добавляют физраствор эту смесь, фильтрат в дозе дят в бедренную вену брюшо-реципента в объеме 0,3 мле 45 дней в легких парвов качестве исходного доя дальнейшего пассирова Изобретение относится к медицине, ано к едцнсой паразиоои, иможет быть использовано для определения дегенерации длительно пассируемогона лабораторных животных изолята ларвального альвеолярного эхинококка (альвеококка).Поддержание штамма ларвального альвеококка осуществляют путем внутрибрюшинного пассирования зародышевыхэлементов альвеококка протосколексов,мелких ацефалоцист) на лабораторных животных одного вида 1, 2). Для этой целиобычнО используют хлопковых крыс, реже -монгольских песчанок, От животных, на которых поддерживается штамм, ларвоцистыиспользуются для заражения животных друГих ВидОВ, на которых проводятся различ"ные экспериментальные исследования, Так-на мышах и золотистых хомяках проводятсяскрининг и изучение химиотерапевтическихпрепаратов, а белые крысы являются удобными продуцентами большой биомассы паразита, специфические антигены которогоиспользуются в промышленном производстве иммуноферментной тест-системы, применяемой для диагностики альвеококкоза учеловека.Однако при длительном пассированииличинки альвеококка на лабораторных животных (до 20 - 50 пассажей) появляются различные признаки дегенерации паразита.Дегенерация ларвального альвеококка приводит в конечном счете к утратс инвазионности его зародышевых элементов дляживотных, т, е. к потере лабораторногоштамма паразита, Дегенерация лабораторного штамма ларвального альвеококка сопровождается снижением антигеннойактивности и, следовательно, диагностической ценностл специфических паразитарных Внтигенов.Р качестве прототипа избрана работаЬ. П. Лукашенко 131, по данным которогопри внутрибрюшинном пассировании ларвального альвеококка на хлопковых крысахрегрессивные изменения в ларвоцистах паразита, сопровождавшиеся образованиемказеозного детрита и аномалиями развитияпротосколексов, отмечены после 17 пассажей на животных указанного вида,Целью изобретения является восстановление морфологических и антигенныхсВОЙств длительно пяссироВанных штаммОВларвального альвеококка.Это достигается тем, что из ларВоцистЯЛЬВЕОКОККа ДЛИТЕЛЬНО ПЗССИООВВННОГОштамма выделяют зародышевые элементыи вводят их в бедренную вену животнымРЕЧИПИгятафя ТОГО .ЖЕ ЯИДЛ. ЛЗВИРфЦИЕСЯ В легких реципиентов ларвоцисты альвеококка используют затем в качестве донорского материала для дальнейшего внутрибрюшлнного пассирования паразита на животных того же или других видов.С помощью предлагаемого способа удалось преодолеть дегенерацию лабораторно- ГО штамма ларвальноГО альвеокОкка, пассируемого на хлопковых крысах в течение 16 лет, что подтверждено результатами морфологических и иммунологических исследований ларвоцист восстановленного штамма ларвального альвеококка от 357 хлопковых крыс пяти последовательных внутрибрюшинных пассажей, а также от реципиентов других видов - 1438 мышей линии СВА, 296 нелинейных белых крыс и 64 золотистых хомяков, зараженных внутрибрюшинно зародышевыми элементами восстановленного штамма альвеококка от хлопковых крь 1 с-доноров.П р и м е р . Осуществляют сохранение дегенерирующего штамма ларвального альвеококка, пассируемого на хлопковых крысах внутрибрюшинно в течение 16 лет, От двух хлопковых крыс, зараженных внутрибрюшинно зародышевыми элементами протосколексами и ацефалоцистами) ларвального альвеококка и вскрытых через 2 месяца после заражения, выделяют из брюшной полости ларвоцисты альвеококка. Фрагменты конгломератов лзрвоцист, содержащие очаги казеозного детрита, удаляют ножницами, а из оставшихся конгломератов массой 96 г выделяют зародышевые элементы. Для этого ларвоцисты. измельчают ножницами, полученные фрагменты смешивают со стерильнь 1 М физиологическим расгвором хлорида натрия при. соотношении объемов фрагментов ларвоцист и физиологического раствора 1:10. Полученную смесь процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек 1,0 мм. Полученный фильтрат процеживаот через мельничный газ с диаметром ячеек 0,3 мм. Затем фильтрат взбалтывают и после 2 мин отстаивания удаляют всю надосадочную жидкость и заменяют ее свежим физиологическим раствором до конечного объема 50 мл. Эту операцию повторяют 5 раз до достижения полной прозрачности надосадочной жидкости. В приготовленном таким образом инокуляте ог;ределяют концентрацию жизнеспособных ацефалоцист альееококка,диаметр которых составляет 0,1 - 0,3 мм, В50 мл готового к употреблению инокулята концентрация ацефалоцист составила 72 экз,/мл. Заражение хлопковых крыс-реципиентов проводят Внутривенно следующимОбРЭЗОМ. У живОТНЫх П",д О.3 ПФ 4 ОбвэбОЛИ(56)1. Сапаб. А Еоо 1. 1960; ч, 38, р, 1117 -1125,2,Л. Ыес 1 О 1 з, 1954, ч, 94, р. 178 - 186,З.Лукашенко Н. П. Альвеако,коэ, Ь,Медицина, 1975, 328. Сравненйе поизнаков штамма ларвального альвеококка, пассируемого на хлопковых крысах способами по прототипу и заявляемымцз ч.Способы поддержания штамма Отличительные признаки штамма один внутреннийКазеоэное перерождение, средний 0 ь животных пяти последних внутрибрюшинных пассажей, содержавших ларвоцисты с казеозным детритом,.у хлопковых крыс-донорову мышей СВА-реципиентову нелинейных крыс-реципиентову золотистых хомяков-реципиентов 77,1+ 5,889,8 ф 5,192,1 ф 2,077.,3 " 4,2 О О 0 2,5 - З,О Сроки созревания у хлопковых крыс-доноров, месяцы Антигенная активность (числ иэ 39 исследованных, давших ции в РДДГ с антигеном пара ципиентиммунных сыв - 3 полосы пре оток питас-р зита от белых кров) ванием в асептических условиях рассекают кожу в паховой области вдоль пупартовой , связки на расстоянии 1,5 - 2,0 см, выделяют из фасций бедренную вену, в которую вво дят черенок инъекционной иглы диаметром 5 ; 0,3 мм, жестко соединенный с полиэтилено, ,вым капилляром длиной 9 см и внутренним диаметром 0,5 мм, на другом конце которого имеется расширение для соединения с канюлей шприца. Затем в бедренную вену 10 каждого животного в течение 1,5-2 мин вво, дят по 0,3 мл равномерно перемешанного предварительно инокулята. Доза инвазион, ного материала составила около 20 ацефалоцист на животное. После введения 15инокулята иглу извлекают из вены и к пунк, ционному отверстию прикладывают ватный , тампон на 1-3 мин, затем на кожу накладывают швы, У всех 50 зараженных таким об,разом хлопковых крыс, вскрытых через 45 20 дней после заражения, из легких выделяют ,ларвоцисты альвеококка массой от 0,47 до 3,80 г йа животное. Наиболее крупные кон ,гломераты ларвоцист от 10 хлопковых крыс общей массой 15,8 г используют затем в 25 , качестве донорского материла для внутрибрюшинного заражения выделенными из него зародышевыми элементами 50 хлопковых крыс, 200 нелинейных белых крыс, 300 мышей линии СВА и 30 золотистых хомяков 30 обоего пола в возрасте 1-1,5 месяца. У всех животных реципиентов, вскрытых через 2-3 месяца после заражения, в брюшной полости выявляются живые ларвоцисты альвеококка, содержащие множество юных и зрелых протосколексов альвеококка. В конгломератах ларвоцист очаги казеоэного детрита не выявляются, паразитарный материал обладает полноценными антигенными свойствами (таблица),Таким образом, дайное изобретение имеет следующие преимущества. Оно позволяет преодолеть дегенерацию длительно йассируемого на лабораторных животных. штамма ларвального альвеококка и обеспечивает воспроизведение полноценной по морфологическим и антигенным свойствам паразита модели инвазии, пригодной для различных экспериментальных исследований, а также для получения анти- генов высокой диагностической ценности в промышленном производстве диагностической тест-системы для нужд здравоохранеНия.1839182 Составитель Ф.КоваленкоТехред М.Моргентал Корректор П Гереаи Редактор Л,Павлова Заказ 3103 Тираж Подписное 1 ПО "Поиск" Роспатента113%5, Москва, Ж, Раущскэя нэб 45 Пл;я и:п 1 л; "к г, гч .эт "П, тгн"У Формула изобретенияСПОСОБ ХРАНЕНИЯ ЛАРВАЛЬНОГО АЛЬВЕОКОККА путем внутрибрющинного пассирования на лабораторных животных, отличающийся тем, что, с целью восстановления морфологических и антигенных свойств длительно пассированных штаммов, из ларвоцист длительно пассированного щтамма выделяют зароды щевые элементы и вводят их в бедренную вену животным-реципиентам того же вида, далее выделяют ларвоцисты из легких реципиентов и используют для внутрибрюшинного пассирования.