Способ прогнозирования течения офтальмогерпеса у мужчин

(505 6 01 К 33/74 ОБРЕТЕ ИСАНИ ИДЕТЕЛ Ь СТОУ АВ ОМ вательский ась, Г,Х,НасиШевчукСССР82,АНИЛ ТЕЧЕМУЖЧИНцина, а имена течения офзобретения ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(56) Авторское свь детельствоМ 1364338, кл, А 6". Р 9/00, 19(57) Область применения; медино офтальмология для прогнозтальмогерпеса. Сущность и Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии,Цель изобретения - увеличение числа одновременно проводимых прогнозов офтальмогерпеса у больных.Способ осуществляют следующим образом,Из вены больного (до 43 при наличии одного набора для радиоиммунологического определения) берется кровь в количестве 5-7 мл, после ретракции сгустка сыворотка отбирается в три пробирки: в две по 0,1 мл для определения тестостерона и о одну - 1 мл для выявления простогландина Е.При определении тестостерона с целью его экстракции в каждую из двух пробирок, содержащих по 0,1 мл, добавляют по 3 мл диэтилового эфира, и они перекрываются пробками, интенсивно встряхивают пробы на вихревом смесителе в течение 1 мин, центрифугируют пробы при ускорении 1500-2000 д в течение 2 мин, переносят 1 мл1 пн .Ыно 18 О 5403 А 1 определяют в сыворотке крови конц ции тестостерона и простогландина Е значениях тестостерона 2,4 нг/мг и б 1,1 нг/мг и менее прогнозируют соот оенно благоприятное и неблагоприят чение болезни, у больных с показат тестостерона в диапазоне 1,2-2,3 проводят определение простагланди при значениях которого 340 нг/мл и прогнозируют неблагоприятное теч 270 нг/мг и менее - благоприятное, П нение способа в медицинской практи зволит увеличить число одноврем проводимых прогнозов. ентраи при олее и ветст- оетоелял 1 и нг/мг на Е, более ение, римеке по- енно эфирного экстракта в пробирки для анализа, которые затем помещают в водяную баню и полностью выпаривают эфир при 37 С, Перед проведением экстракции определяют величину "фонового тестостерона" в анализе, которую дает используемый раствори- тель. Для этого определяют параметры связывания антисыворотки в калибровочной пробе без тестостерона в отсутствие (Во)в присутствии Вэф) сухого остатка после выпаривания 1 мл растворителя, Затем готовят 6 калибровочных проб тестостерона, используя соответствующий набор реактивов для радиоиммунологического определения тестостерона в сыворотке крови человека СТЕРОН-,).С этой целью содержимое флакона с концентрированным буферным раствором переливают в стакан и лобавляют 30 мл дистиллированной воды, перемешива 1 от. Затем во флакон с препаратом - ) тестостерона добавляют 11 мл буферногораствора, перемешивают до полного растворения, Для получения раствора антисыворотки во флакон с этим препаратомдабавляат 11 мл буферного раствора, перемешивают. Иэ флакона с раствором тестостерона в спирте (640 нг/мл) отбирают 0,1 мл и дабэвля ат к 9,9 мл буферного раствора. Полученный раствор тестостерона является калибровочной пробой тестостерона, содержащей 6,4 кг/мл, Все остальные растворы калибровочных проб тестостерона,садаржэщиа 3,2 кг/мл; 1,6 иг/мл; 0,8 нг/мл;0,4 нг/мл; 0,2 иг/мл готовят путем саответствуащаго разведения буферным растворам первой пробы с 6,4 иг/мл.Обозначают пробирки для общей активности (Т), факавага тестостерона" (1,2), калибровочной кривой (5 - 16) и для анализа (17 - 102), В пробирки по определению общей активности Щ, "фаиаваго тастастарана" (1-4), .садарлсащиа сухой остаток эфирного экстракта иэ анализируемой пробы (17 - 102), вносят па 0,1 мл буферного раствора,В пробирки 5-16 вносят па 0,1 мл раствора саатватствуащих калибровочных 5 10 проб тестостерона, Во все пробирки вносятпа 0,2 мл р-рэ"Л и па 0,2 мл раствораэитисынаратки, Тщательно перемешиваютсодержимое всех пробирок иа вихревомсмеси геле, 30Затем иикубируют все пробирки прикомнаткой температуре 18,25 С в течение 2 ч,Ва вса праблрки, корме Т, приливают по 1мл р-ра пализтилаигли,саля, тщательна перамашипэют на н 1 л: реном смесителе, вдалькайшам памащэ 1 ат пробирки в центрифугус горизонтальным ротором и центрифугируют все пробы при комнатной температуре втечение 15 мии при ускорении 1500-2000 9.Посла этого атсэсывэот иэдасэдачнуа жидкость и измеряется скорость счета осадкакаждой пробирки в течаииа 1 мин в гаммасчатчика типа "Гамма",Гамма", Находят срадкаа арифметическое значениескоростей счета"5,-тестостерона, для каждай иэ 43 пэр прабиаак, Затем проводятрасчеты и графическое построение согласнообщеизвестной инструкции па прлманениюнабора реактивов СТЕРОН-Т-",3 для радиаиммуиолагическаго определения тестосторона в сыворотке крови человека/л=-нг/мл тестостерона х 3,46,С целью определения прастаглэдина Ек 1 мл сыворотки бальных добавляют 3 валэфира, после удаления которого добавляют3 мл раствора, содержащего этилэцетат,изопропанол, 0,2 НС в соотношении 3.3,1, Перемешивают и добавляют 2 мл зтилацетата и 3 мл дистиллированной воды, Перемешивают, центрифугировэнием раствор разделяют на фазы. Органическая фаза, 3 мл, переносится в полипропиленовую пробирку и высушивается в потоке воздуха под колпаком. Для разделения фракций простагландинов используется селикагелевая колонка. Далее нумеруют парные пробирки следующим образом:Т 1, Т 2 - общие количества1, 2 - неспецифический связывающий комплемент (ЙЯВ)3,4 - содержащие стандарт РОВ 1, нг/мл (Во)5. 6 - 1/243 стандарта (8,2 нг/мл) 7, 8 - . 1/81 стандарта (25 нг/мл) 9; 10 - 1/27 стандарта (74 нг/мл) 11-12 - 1/9 стандарта (222 нг/мл) 13, 14 - 1/3 стандарта (667 нг/мл) 15-16 - 1/1 стандарта (2000 нг/мл) 17-18 - образцы проб больнь 1 х, Для приготовления проб стандарта РОВ 1(40 нг/мл) во флакон, его содержащий, добавить 1,0 мл дистиллированной воды, 15 мин отстаивают, перемешивают,В пробирки, пронумерованные 1/3, 1/9, 1/27, 1/81;1/243,добавляют по 0,6 мл геле ваго трис-буфера (к 100 мл трис-буфера добавляют 10 г желатины, нагревают, помешивая,"до растворения желатины, астужают до комнатной температуры и доводят рН до 7,4, добавлял 0,1 П МаОН или НС 1),Исходному стандарту РОВ 1 дают номер 1/1, переносят 0,3 мл этого стандарта в пробирки 1/3, перемешивают и 0,3 мл стандарта 1/3, переносят в пробирку 1/9, перемешивают, Продолжают зто раэведенле до последней пробирки 1/243.Затем в пробирки с КЯВ добавляют 1,1 мл гелевого трис-буфера, по 1 мл гелевого трис-буфера - в пробирки М 3-16 и по 0,6 мл его - в пробирки с пробами больных. В соответствующие парные пробирки добавляют по 50 мкл каждого стандарта РОВ 1 и по 0,4 МКЛ проб больных. Вовсе пробирки вносят по 50 МКЛ ( Н) РОВ 1, входящий в набор реактивов для радиоиммунологического определения простагландинов и растворенный в 10 мл гелевого трис-буфера. Во все пробирки добавляют по 50 МКЛ кроличьей анти-РОВ 1 сыворотки, также входящей в данный набор реактивов и растворенной в 10 мл гелевого трис-буфера комнатной температуры. Содержимое пробирокперемешивают на вихревой мешалке. Инкубируют в водяной бане при 37 С в течение 60 мин, Во все пробирки, кроме Т 1 и Т 2, добавляют по 100 МКЛ нормальнойкроличьей сыворотки и по 100 МКЛ козьей анти-кроличьей сыворотки, входящих в набор реактивов для радиоиммунологическаго определения простогландинов, Перемешивают на вихревой мешалке и инкубиру 1 от 5 18-20 ч при 2-8 С. Затем центрифугируют все пробирки, кроме Т 1 и Т 2,при 2 - Оо С в течение 30 мин при 1600 у. Изо всех пробирок, кроме Т 1 и Т 2, полностью удаляют надосадок. Высушивают пробирку снаружи и 1 . внутри, не задевая осадок, фильтровальной бумагой. Во все пробирки добавляют по 1,0 мл 0,1 П МаОН, перемешивают и растворяют осадок. Переливают растворы изо всех пробирок в соответствующие пронумерованные флаконы, туда затем добавляют по 11 мл сцинтилляционной жидкости, перемешивают. Считают общую активность про. стагландинов в каждой пробе. Затем во все флаконы, включая Т 1 и Т 2, добавляют по 20 0,01 мл радиоактивного простогландина зН) РОВ, все перемешива от и результаты подсчитывают еще раз, Нормализиоованные СРМ должны быть использованы во всех подсчетах по следующей формуле: нор мализованное количество простогландинов о стандарте или образце (СРМ) подсчитывается по формуле м.) " где Т- сри Т 2, т.е, количест ления Н 35 аждого стандарта итклонения (В) по считы рмуле вают=10 где МЗВ - среднее арифметическое в прорках 1 и 2, Вс=Во-ИБВ, где Во - средняя 4 г ифметическая в пробирках 3 и 4.дЗатем на полулогарифмической бумаге строят график, где по вертикальной оси откладывают фф отклонения РОВ 1, а по гори-. зонтальной оси - концентрацию РОВ 1, 50 строят кривую стандарта и, зная соответствующие отклонения каждого контроля и образца, находят значения концентрации РОВ 1 нг/мл).При значенияхтестостерона 2,4 нг/мл и 55 более и 1,1 нг/мл и менее прогнозируют соответственно благоприятное и неблагоприятное течение болезни: у больных с . показателями. тестостерона в диапазоне 1,2-2,3 нг/мл проводят определение би ар еднее отТ 1 иТ,Т -среун1 Т - после измерения сН о простагландинов после простогландина Е, при значениях которого240 нг/мл и более прогнозируют неблагоприятное течение, 270 нг/мл и менее благоприятное,П р и м е р 1, У больного М. с диагнозом"Древовидный герпетический кератит" ра. диоиммунологическим методом в сыворотке крови обнаружена концентрациятестостерона, равная 0,4 нг/мл. С этой0 целью использовали набор реактивов длярадиоиммунологического определения тестостерона "СТЕРОН- Л", Исследованиеуровня тестостерона осуществляли по описанной выше матодике. Согласно предлага 5 емого нами способа мы прогнозировализатяжное течение инфекции, Действительно, заболевание приняло затяжное течение,ие купировалось противовирусными средствами и продолжалось 45 дней,П р и м е р 2, У больного Г. наступилрецидив поверхностного герпетического кератита на трансплайтате роговицы. Измеренная концентрация тестостерона на 7день заболевания равнялась 3,7 нг/мл, Прогноз офтальмогерпеса - благоприятное течение, На 27 день заболевания наступиловыздоровление с благоприятным исходомбез снижения остроты зрения,П р и м е р 3, У больных Н., БС, с0 офтальмогерпесом показатели уровня тестостерона равнялись 1,2 нг/мл, 2,3 нг/мл и2,2 н г/мл, О пределе ние тестостерона проводили описанным выше радиоиммунологическим методом. Концентрация этогогормона лежала в диапазоне 1,2 - 2,3 нг/мл.В этой связи был проведен анализ концентрации простогландина Е, определяемого впараллельных исследованиях, с помощьюсоответствующего набора реактивов. Пока 0 затели его равнялись у вышеупомянутыхбольных соответственно 200 нг/мл, 350нг/мл и 470 нг/мг, На основе предлагаемогонами способа прогноза офтальмогерпеса впервом случае заболевание должно былоиметь благоприятное течение, а во 2 и 3 -неблагоприятное, затяжное, В соответствиис прогнозом у больного Н, герпетическийкератоувеит протекал благоприятно и через20 дней наступило выздоровление, у больных Б, и С, с древовидным герпетическимкератитом заболевание имело затяжное .течение, протекало с осложнениями в виденаслоения вторичной инфекции и длилосьсоответственно 87 и 42 дня, В группе обследованных больных предложенным намиспособом прогноз офтальмогерпеса былправилен е 94% ф 6 случаев. При этом прогноз офтальмогерпеса одновременно про-водили при изучении 43 образцовсывороток, взятых от 2 б больных, что значи1805403 тельно повысило производительность трудалабораторного рабвтника. Составитель Н. ВалееваТехред М,Моргентал Корректор .И. Шмакова Редактор Заказ 940 ТиражПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР, 113035, Москва, Ж, РаушСкая наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 формула изобретения Способ прогнозирования течения офтальмогерпеса у мужчин путем исследования крови больного, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения производительности за счет увеличения числа одновременно проводимых прогнозов, в пробе крови определяют концентрацию тестостерона и при значении этого показателя 2,4 кг/мл и более прогнозируют благоприятное течение заболевания, при значении 1,1 5 кг/мл и менее - неблагоприятное, а призначении 1,2-2,3 кг/мл дополнительно определяют содержание простогландина Е и при его значении 340 мг/мл и более и 270 нг/мл и менее прогнозируют неблагоприят ное течение заболевания,