Способ получения щелочной протеазы

/ РЕТЕНИ нтной аления щеГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ И ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71)институт технической теплофизикиАН УССР(56) Авторское свидетельство СССРИ. 899646, кл, С 12 й 9/50, 1982.Препарат ферментный щелочная протеаза ТУ 59.01,003.74-84.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЩЕЛОЧНОЙПРОТЕАЗЫ(57) Изобретение относится к фермеотрасли микробиологической промыности, а именно к способам получен вич, Б.Н.Процы шинВ.Андроников Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности, в частности к способу получения щелочной протеаэы,Известен способ получения щелочной протеаэы в котором конечный продукт получают в виде продукта ферментации, Указанный способ рассматривает только часть технологической цепочки получения готовой формы ферментного препарата.Известен способ получения щелочной протеазы, в котором с целью увеличения активности фермента в процессе культивирования проводят дополнительное регулирование в ферментере, Указанный способ позволяет оптимизировать условия массо- обмена и увеличить активность фермента при всех стадиях ферментации, Однако в известном способе конечный продукт поллочной протеазы. Цель изобретения - увеличение активности целевого продукта. Способ предусматривает выделение биомассы иэ исходной культуральной жидкости, Вас 11 оз заЬйз штамм 72, распылительную сушку, гранулирование высушенного продукта с использованием в качестве связующего жидкой фракции ферментной культуры с последующим досушиванием гранулированного продукта до требуемой конечной влажности, Причем гранулирование ведут методом окатки в грануляционной камере, рабочие органы которой покрыты антиадгеэионным материалом, В результате использования способа можно автоматизировать и герметизировать процесс, конечный продукт получить повышенной активности, улучшенного товарного вида. 3 табл. чают в виде жидкого продукта фермен Наиболее близким к предлагаемому яется способ получения ферментного и арата ТУ,59,01,003.74 - 84.Сущность известного способа заключается в том, что ферментный препарат щелочную протеазу, полученную при глубинном культивировании Вас,зцЬ 11 з шт,72 с последующей очисткой, сепарируют, стандартизируют солью иаг 304 для увеличения содержания сухого остатка и сушат в распылительной сушилке типа СРЦ до остаточной влажности 10 ,Введение Иа 2804 после ферментации перед сушкой осуществляется с целью увеличения сухого остатка с 4 - 60 до 8,5 - 11 для стабилизации процесса сушки.Дополнительное введение иа 2304 в Сухой концентрат осуществляется с целью стандартизации.Введение в сухой концентрат двуокиси титана перед гранулированием осуществляется для цветности - придания белого цвета. Цветность водного раствора щелочной протеазы не более 3,0 - 6,0 ед. иодной шкалы.Введение в сухой концентрат перед гранулированием расплавов полиэтчленгликоля (плавов) осуществляется с целью получения из смеси гранул методом экструзии.Адгезионные свойства феоментного препарата таковы, что процесс гранулирования может осуществляться только при введении в состав смеси жидких плавов,Сухой порошок в составе ферментного препарата с активностью 90000 ед/г не менее 61,7 о по весу, полиэтиленгликолй не более 27,8; по весу, двуокиси титана 10,5 , по весу, после расплавления в реакторе при 60 - 70 С подвергают экструзии, затем полученные гранулы охлаждают на охлаждающемся транспорте и после подготовки стандартизируют,Гранулированный препарат с размером гранул 0,2 - 2,0 мм и влажностью не более 10имеет протеолитическую активность (п.е.) 50000 - 2500 едй.Для производства синтетических моющих средств должна применяться только гранулированная форма щелочной прот;:.азы.Недостатком данного способа является использование плавов при экструзии, Необходимость непрерывного поддержаний плавильных реакторов, несущих материалоприводов, корпусов грануляторов-экструэоров в нагретом состоянии (до 50 - 600) вызывает значительную потерю активности и выхода целевого продукта на этой стадии производства, неудобство в работе,Цель изобретений - увеличение активности целевого продукта..Согласно предлагаемому способу, включающему выделение биомассы из исходной культуральной жидкости Вас.вцЬОИВ шт, 72, распылитеФ.ную сушку, гранулирование ферментного препарата оедуг методом окатки в гранулящ анной каь "ре с добавлением жидого связующего, и .лечего ведутдосушку в кипящем слоедо требуемой остаточной влажности, при этом внутренняя. поверхность грануляционной камеры и 6 е рабочие органы покрыты антиадгезионным материалом. В качестве жид 5 10 15 20 25 30 35 40 45 кого связующего используют жидкую фракцию исходной ферментной культуры,Окатку гранул проводят в грануляционной камере, на стенки которой и ротор с рабочими органами нанесено антиадгезионное покрытие, что позволяет вести процесс гранулирования без применения плавов, а значит без воздействия температурных нагрузок и давления на ферментный продукт, что обуславливает повышенный выход активного препарата, удешевляет продукт и упрощает технологический цикл,Исследования показали, что нанесение специального антиадгезионного покрытия на рабочие органы и стенки грануляционной камеры снизили адгезионнь е свойства щелочной протеазы, позволили проводить гранулирование без изменения ее агрегатного состояния. Досушивание влажного гранулированного продукта с 12 - 10 до 8 - 10; в кипящем слое при низких температурах теплоносителя (35 - 50 С) длится 2 - 4 мин. При этом выход продукта повышается до 92 - 95 .П р и м е р 1, После глубинного культивирования Вас.зцЬ 01 з шт, 72, проводят очистку и сепарирование ферментного препарата. Очищенный продукт с сухим остатком 4 - 6 % доводят йагЯОа до 8,5 - 11 Оь и сушат в распылительной сушилке при температуре на входе 135 - 140 С, на выходе 70 - 75 С. Далее проводят стандартизацию ферментного препарата ЙагЯО 4 (до 35 ,) (крайние композиционные условия), Смесь ферментного препарата йа 2304 и жидкой фракции гранулируют методом окатки и сушат при 50 С в течение 5 мин. Полученный продукт с конечной влажностью 4,0 ф и средней активностью 78633 ед./г имеет выход 100; (после пересчета содержания основного продукта). В табл.1 приведены соотношения компонентов смеси и характеристики продукта получаемого на всех стадиях процесса по примеру 1.П р и м е р 2, Сухой продукт приготовили как в примере 1, При композиции(щелочная протеаза 100 Д) с добавлением жидкой фракции смесь гранулируют методом окатки и сушат при 50 С в течение 5 мин, Конечная влажность продукта составила 4,0 , средняя активность 95900 ед/г выход при этом составил 92,4 оь. В табл.2 приведены характеристики продукта, полученного на всех стадиях процесса по примеру 2,Проведенные исследования по выявлению времени сушки и влажности высушиваемого материала при разных температурах, разных композиционных составах показали, что температура сушки в пределах 40 - . 50 С (выше температуры ферментации) не оказывает существенного влияния на из1708841 Таблица 1 Выхо,Условия технол ческого цикл Композиция ность,1) Исходный прод2) Влажный грануванный продукт Щелочнаяпротеаза65 о+ Йаг 504 70 35 дн, знач,3) Сухой гра ный продукт Время сушк Тем перату 500 мн 7863 00.зн аблица овия технолог кого циклаВь Комп ози ция1) Исходный продукт2) Влажный гранулированый продукт 100 95,4 100 95,4 100 103700 99000 103700 99000 103700 Щелочнапротеаза100",4,0 12,0 1 1,9 0182 средн.з ач 3) Сухои ный про Время с Темпер 50 С гранулировандуктушки 5 минатура сушки 3,9 4,0 650 650 300 5900 2,4 едн менение активности за исследуемое время сушки.Из табл. 3 видно, что для каждой компо-, зиции время сушки, температуру сушки и влажность готового продукта можно корректировать согласно требованиям технологии. Формула изобретения Способ получения щелочной протеазы,предусматривающий выделение биомассыиз исходной культуральной жидкости Васоз зоЬтз шт. 72, распылительную сушку, гранулирование полученного сухого ферментного препарата в присутствии связующего и досушивание его до требуемой 5. конечной влажности, о т л и ч а ю щ и йс я тем, Мто, с целью увеличения активности целевого продукта, гранулирование ведут методом окатки в грануляционной камере, рабочие органы которой покрыты антиадге зионным материалом, при этом в качествесвязующего используют жидкую фракцию исходной фрементной культуры. 10090,8 90,8 85,7 96,0 10092,66