Штамм гриба aspergillus fоетidus продуцент инулиназы

) С 12 И 1/14, 9/ ОМИТЕТ ОТНРЫТИ ГОСУДАРСТВЕННЫПО ИЗОБРЕТЕНИЯМПРИ ГКНТ СССР РЕТЕН е мсскросситочнее к ро тцосится зобретеци огической рег- ниди- иция б ности, кас мьшсл аммо- про мой в ется получени ищевойс пр оиз приме н тов инулиназы, промышленности рг см ед содуктов,получение шоес.Йця ВКПее высокой ки водстве диет м тения8111 цщего Цель изобре ма гриба Аярег Р, обладаю тивностью инулШтамм Аярег Г(НГУ) 111 ц К -пр ита ные с утем при ко ОПИСАНИЕ ИЗ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТ(71) Московский технологический ицститут пищевой промьпплецности(56) Выделение сс характеристика термофильных бактериалс,цых штаммов, обладающих ссссуссцсс а яссой активно стью.Микроб.произв-во за рубежом Г 11989, вып. 3.Авторское слиде ельство СССР1445180, кл . С 12 Н 1/14, 1987,(57) Изобретессие относится кологической промпппленцос ти,получению сптамма - продуцецта ицулиназы, который может нанти применецссе иназы.о 111 ця ГоеЫця ВКГссполучен селекционныминированной обработдня получения фруктозоглюкоэцых сиропов из ицулицсодержащего сссрья.Ц ль изобретения - по ссуч ецне штамлсагриба Аярег 8111 ця Гое с.с 1 сся ВКПМ Гобладающего более вьп;окой активностьюинулиназы, Штамм Лярег 8111 ця Гое 1 с 1 цяВК 111 Г в 4 (НГУ) получен путем направленной селекции исходного штаммаАярсг 8 с.11 ця Гоев дц 1-51 с применением мутагеносз. 1 ри глубинном культивцровациц сса сцстательной среде,содержащей гппеццчцыс отруби, свекловисссый жом, ин 1 слцц и соли, штамм синтезссрус т активссую систему ферментовицулцсса зу, кс плаца зу, целлобна з у .Р-глюкозссдазу. Лктивцость ицулиназы250 в 2 ед/г. Лвалогцчцьсе показателидостигаются црц ссоверхссостссом культивировании ца среде, содержащец солодовые ростки, пшеничные отруби, молочцую сыворотку, свекловцчцыц жоми соли. 1 табл,ке конидии исходцои культурыу.11 ця .с:оес 1 ссся Мнитрозогном (концецтрассия 0,57, экспо1 ч) и УФ-лучами (доза 2510экспозиция 8 мин) и последующскринингом мутантов, обладающсокой инулиназной активностьюОсобенностью штамма Аярег 8ХоеСЫця НГУявляется то, чглубинном культивировании нательной среде, содержащей пшеотруби, свекловичный жом, ицусоли, оц синтезирует активнуютему ферментов - инулиназу, ксиланазу, целлобиазу.Культурально-морФологические признаки, 5Иицелий разветвленный, извилистый,гифы утонченные, септированные. Ширина клеток мицелия 4 - 6,5 мк, Длина клеток 30-45 мк . Конидиеносцыизогнуты, без перегородок, ширина . 103,0-6,0 мк, Головка конидиеносцабулавовидной Формы, диаметр 1520 мк. Конидии округлые, шиповидные,диаметр 2,5-4,5 мк,Морковный агар (30 С, 6 сут,), 15Образует гигантскую колонию округлойформы с ровными краями и с небольшойрадиальной складчатостью. Нижняя поверхность колонии белая, отмечаютсяконцентрические зоны в центре жел-. 20того цвета с конидиями на приподнятом над субстратом мицелии и зонабелая с хорошо развитым воздушным мицелием. Диаметр колоний 8-9 см.Сусло-агар (30 С, 6 сут), Колоъии круглые, белые, с ровными краями, с воздушным мицелием белого цвета, 1 ентр колонии окрашен в ярко.:;елтый цвет, Конидиеобразование отсутствует, диаметр гигантской колонии 5,5 см.Среда Чапека (30 С, 5 сут.), Колонии мелкие, гладкие, округлые, белого цвета, складчатость отсутствует,Диаметр колонии 2,5-3,0 см. 35Мясо-пептонный агар (30 С, б сут,),Форма колонии округлая, края ровные, радиальная складчатость, воздушный мицелий и подложка белогоцвета, Колонии мелкие, диаметр колонии 3,3-3,5 см.Ломтики картофеля (30 С, 4 сут,),Рост очень интенсивньп, мозговиднаяскладчатость, хорошее конидиеобразование, цвет белый. 45Молоко (30 ОС, 5 сут.). Рост в виде плотной белой пленки. Молоко несвертывает и не пептонизирует. Краяколоний окрашены в желтый цвет, конидиеобразования нет, 50Желатина (30 С, 5 сут,). Рост в .виде тонкой пленки со слабым конидиеобразованием, конидии темно-коричневого цвета,Физиолого-биохимические признаки.Гидролизует инулин, пектин, раствор желатины разжижает., В качествеисточника углерода использует глюкозу, ксилозу, пектиновую кислоту крахмал, ксилан, Наиболее интенсивный рост наблюдается на глюкозе, сахарове, фруктозе, мальтозе, крахмале.В процессе роста среды подкисляютсяс рН 6,8 до рН 3,0. ГазообразованиянетНа средах, где в качестве источника азотного питания используютсясоли аммония, рост хороший.Культура НГУможет использоватьв процессе культивирования разнообразные фосфорные соединения, хорошийрост отмечен на среде с однозамещенным фосфатом калия, Желатину разжижает, Штамм не ассимилирует нитраты.Штамм Аярегр 111 ця Гоегйця НГУ хорошо растет при температуре 22 о,23 С, но при этом конидии на морковном агаре не образуется. При 37 Срост очень хороыий, отмечается интенсивность конидиеобразования. Прио,50 С роста нет. Культура хорошо растет в интервале рН 2,8-8,0. Оптимальная температура роста и биосинтезинулиназы 32 С и рН среды 4,6,Штамм хранится на морковном агаре.Температура хранения 5 С. Пробиркиос культурой закрывают колпачками изполиэтиленовой пленки . Пересеваетсякультура 2-3 раза в год. Для длительного хранения используется лиофильновысушенная культура,П р и м е р 1. Получение инулиназы П 10 х при поверхностном культивировании штамма Аврегрг 11 ыя ГоегЫивНГУ.Штамм Аярег 8 г 11 цв гоегдйцв НГУиспользуют для получения ферментного препарата инулиназы П 10 х. Посевную культуру готовят в конических колбах вместимостью 0,7 л на среде,: отруби 68,0, жом свекловичный 30,0; сульфат аммония 1,0, двухзамещенный фосфат калия 1,0, Культивируют в термостате,опри 32 С в течение 5 сут,. Посевной материал в количестве 15 колб используют для засева 300 кг питательной среды. Ферментацию проводят в растительных установках на среде, содержащей следующие компоненты, 1: отруби пшеничные 58,0; солодовые ростки 10,0; жом свекловичный 30,0; сульфат аммония 1,0; фосфат калия 1,0. Культивирование проводят при 32 С в течение 56 ч, Выращенную культуру дробят в течение 40 мин при 32 С (гидромо-дуль 1:7), Затем экстракт выпаривают для удаления взвешенных частиц, Осаж-глюка- инули-глюкозицазцая цязная дазная 240,0 300,0 ИцулицазаЦеллопектофо 260,0 60,0 38,0 40,0 етидиц дение препарата проводят спиртом на установке непрерывного действия при концентрации его в смеси 757 Ферментный сок отделяют от смеси в.кла" рификаторе, Сушку препарата проводят в вакуум-сублимационной сушилке в течение 12 ч. Стандартный препарат представляет собой порошок светло-коричневого цвета, имеет специфический грибной залах и .следующие активности: Р-глюканаза 240 ед/г инулиназная. 260 ед/г и -глюкозидязцая 60 ед/г.П р и м е р 2. Получение инулиназы ГЗх при глубинном. культивировании штамма Аярегр 111 ця ХоееЫпя НГУ.Для приготовления посевной культуры конидиальную суспецзию вносят в колбу вместимостью 1 л с питательной средой следующего состава, 7,; жом топинямбуровый 29,0, отруби пшеничные 70,0; аммоний серцокислыи 1,0, увлажненную до 607., Выращивают посевной материал при 32 С в термостате до обильного спороцошения. Зя 1 ч до вцесеция в ферментатор в колбу с посевной культурой приливают 300 мл стерильной водопроводной воды, Культинировацие проводят в фермецтаторе вместимостью 1 мэ (коэффициент заполнения - 0,4) П р и м е р 3, Получение инулицазы ГЗх при глубинном культивировании штамма Аярег 8111 ця Гоехйця НГУ.Посевную культуру готовят на пита.тельной среде следующего состава, 7; отруби пшеничные 62,0, жом свекловичный 28,0; лактоза 3,0, инулин 5,0; аммоний сернокислый 1,0; калий фосфорнокислый 1,0. Температура выращивания 32 С, время 68 ч. Зя один час до внесения в йермецтятор в колбу с посевной культурой приливают 300 мл стерильной водопроводной воды, Фер - ментацию осуществляют на среде, состоящей из следующих компонентов, Е: экстракт хлебопекарных дрожжей 20,0,1070с выполнением следующих условий;аэрацию осуществляют в течение всего,цикла культивирования, расход воздуха 1 м /м среды в час; перемешивание - непрерывное при работе мешалки 200 об/мин; температуру поддерживают на уровне 32 ф 0,5 оС. Ферментациюосуществляют на среде, состоящей из,1 О 7.: жом топинамбуровый 3,0; ростки солодовые 1,0; аммоний сернокислый0,7; калий фосфорнокислый 0,1; магний сернокислый 0,05, рН естественный,5 По окончании ферментации культуральцую жидкость отделяют на сепараторе, проводят жидкостную стандартизацию культуральной жидкости сернокислым аммонием и сушат на вакуум 20 сублимационцой сушилке и на распылительцой сушилке с параметрами сушильного агента; на входе 160 С наовыходе 55 С,Полученный препарат инулиназы5 ГЗх - порошок светло-коричневого цвета, по сравнению с препаратом, полученным при использовании известногоштамма, имеет активность (таблица),30 Характеристика ферментного комплекса Лярег 8111 ця гоег 1 йця НГУпредставлена в таблице. фосфат натрия 0,5; сульфат аммониярН 6 5 7Культивирование, отделение и сушку проводят, кяк указанов примере 2.Полученный препарат инулиназа ГЗх - порошок коричневого цвета, обладает специфическим грибным запахом, имеет следующие активности, ед/г; инулиназную 250,0; целлобиогидролаэную 60,0;-глюкозидазную 44,0,П р и м е р 4. Получение инулиназы. Г 10 х при поверхностном культивировании штамма Аярег 8111 ия ГоегЫпя НГУ.Посевной материал готовят в колбах вместимостью 0,7 л на питатель1631070 Формула изобретения Штамм гриба Азрегд 111 цз йоесЫцзВК 1 П 1 Р- продуцент инулиназы. Составитель Е.ВоробьеваТехред Л,Сердюкова Корректор М Лемчик Редактор Н.Горват Заказ 523 Тираж 374 Подписное ВНИПИ Государственного комитета ло изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарина,101:;ой среде, Х: отруби пшеничные 60,0, : плодовые ростки 8,0; молочная сыворотка 100; жом свекловичный 28,0; сульфат аммония 1,0; 4 осйат калия 1,0. Культивирование, осаждение, сушку проводят как указано в примере 1.Препарат стандартизируют и выпускают в виде порошка светло-коричневого цвета с активностями, ед/г;-глюканаза 230,0, целлобиогидролаза 60,0, инулиназа 250,0;-глюкозидаза 42,0.Преимущества штамма Азрегя 111 цз ГоегЫцз ВКПМ Рпо сравнению со штаммом Аврегр 111 цз ГоесЫцз И: более высокий уровень активости инулиназы (в 5 раз в среднем, более короткий срок йерментации, более высокий выход целевого продукта, болеевысокая устойчивость к Ьагам. Крометого, штамм Аврегя 111 цз ГоегЫцвВКПМ У.-406 характеризуется низкойвязкостью культуральной жидкости,что позволяет использова-ь данныйштамм для получения очищенных препаратов.