Стабилизатор эритроцитов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ едицинеовериагносх инфекиз объекеских вляется расшиов для стабии постановкеглютинации ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМПРИ ГНИТ СССР(71) Институт микробиологии и вирусологии АН КазССР и Институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Министерства здравоохранения КазССР(56) Гайдамович.С.Я. и др, Реакцияагглютинации сенсибилизированныхантителами эритроцитов вирусом колорадской клещевой лихорадки, - Вопросы вирусологии, 1974, В 2,.с168-.12,Саятов.М.Х. и др. Эффективный стабилизатор для приготовления антительных эритроцитарных диагностикумов к вирусам гриппа А и.В, - Вопросы вирусологии, 1986, М 6, .с. 674679,Изобретение относится к ми биологии, в частности к усшенствованию реагентов для дтики вирусных и бактериальньций, индикации возбудителейтов внешней среды и биологичматериалов.Целью изобретения ярение арсенала реагентлизации эритроцитов прреакции непрямой гемаг(54) СТАБИЛИЗАТОР ЭРИТРОЦИТОВ (57) Изобретение относится к медици не и биологии, в частности к усовершенствованию реагентов для диагностики вирусных и бактериальных инфекций, индикации возбудителей из объектов внешней среды и биологических материалов. Целью изобретения является расширение арсенала реагентов для стабилизации эритроцитов при постановке реакции непрямой гемагглютинации (РНТА). Поставленная цель достигается использованием желчи. При этом оптимальной является ее 1% ная концентрация на физиологическом растворе, 3 табл. П р и м е р 1, К трем порциям по 100 мл физиологического раствора до бавляют 0,5, 1,0 и 2,0 мл желчи соответственно из аптечной упаковки,Стабилизирующий раствор готовят перед употреблением. Затем по общепринятой методике ставят РНГА, используя Ц-образные панели микротитратора "Такачи", Панели оставляют при комо натной температуре (18-22 С) до оседания эритроцитов в контролях. Максимальное количество выявляемого1611342 П р и м е р 2. К 100 мл физиологического раствора добавляютмлжелчи из аптечной упаковки, По общепринятой методике ставят РНГА, используя Б-образные панели микротитратора "Такачи", Результаты реакции 20нучитывают поспе инкубации панелеи вусловиях разных температур: 18 22,3-5 и 35-37 С.Результаты, представленные втабл, 2, показывают, что наибольшая 25чувствительность РНГА проявляетсяпри инкубации панелей при комнатноитемпературе (18 22 С) и температуре3 50 С. Однако при 3-5 оС время учетареакции удлиняется по сравнению синкубацией при 18-22 С на 30-40 мин,что существенно важно при выполнениизадач по индикации вирусов,. При 3537 С отмечалось снижение чувствительности РНГА на 1-2 порядка,П р и м е р 3, Проверка специфичности индикации вирусов по предлагаемому способу. РНГЛ ставят, используя в качестве стабилизатора физиологический раствор .желчи в концентрации 1,07. при 18" 22 С,.В табл,3 показана специфичностьпредлагаемого способа индикации вирусов гриппа и арбовирусов в биологических материалах. Лнтительныеэритроцитарные диагностикумы взаимодействуют только с гомологичными вирусными антигенами и совершенно нереагируют с гетеролотичными,50Применение желчи в качестве стабилизатора эритроцитов при постановке реакции непрямой гемагглютинации антигена вирусов гриппа и арбовируСов в исследуемом материале достигается при 17.-ной концентрации желчи. При 0,5/ ной концентрации желчи наблюдается спонтанная агглютинация эритроцитарных диагностикумов, а использование 2,0 ь-ной концентрации приводит к снижению титра выявляемог нтигена.Влияние концентрации желчи на чувствительность РНГА показано в табл. 1,П р и м е р 4, Проверка эффективности и преимущества предлааемого способа модийикацин РНГА. Гтаби лизирующие растворы готовят известным и предлагаемым способами.Приготовление стабилизирующего раствора по обычному методу. Готовят 0,15 М одно и двухзамещенные фосфатные буферные растворы. Затем готовят из них фосфатный буферный раствор рИ 7,2 под контролем рН-метра. После этого к 90 мл физиологического раствора добавляют 10 мл фосфатного буферного раствора (рН 7,2) и 100 мг сухого бычьего сывороточного альбу- мина. Приготовление стабилизирующего раствора по предлагаемому способу К 100 мл физиологического растворан добавляют 1 мл желчи их аптечнои упаковки.Результаты подготовки ингредиентов реакции показывают значительное преимущество во времени, используемых средствах и простоте подготовки ингредиентов реакции по предлагаемому способу, Эффективность индикации вирусного антигена предлагаемым способом не уступает известному.П р и м е р 5, Предлагаемый спо соб индикации используют с целью индикации вирусов в имитированных пробах. Для исследования поступило 20 проб. С помощью предлагаемого спо" соба вирусные антигены обнаруживают в 1 ООХ случаях, Предлагаемый метод удобен в применении, экономичен и не требует дефицитных и дорогостоящих препаратов. дополнительного оборудования (рН-метра), а также про ведения дополнительных операций по приготовлению забуференного раствора и его подтитровки до рН 7,2, Кроме того, предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях быстрого раз вертывания лабораторий в полевых условиях, Способ эффективен и рентабелен Формула изобретения1611842 Вируссод материал жащи 1,0 10240 560 А 1280 1024 560 52 12 12 12 Здесь и в пв обратных СА - спонта Вируссодержащийматериал 351024 12 2560 024 102 52 1024 512 блиц Титр РНГА с эри тикумами к виру Вируссодержащи материал агно оцитарйым Д гриппа Н 101:А/НЗН 2:В Клещевой алит (КЭ рымской оррогиче 1024 0 0 Клещевои энцефалит (КЭ)Крымской геморрогическойлихорадки (КГЛЛихорадка долины Сыр-Дарьи/222/79 Таблица 1 ГИГА при концентраци /о следующих таблицах титры даныеличинах.ная агглютинация.Т аб лица оусловиях температур, С 10240 51201811342 Продолжение табл. 3 лихорадки (КГЛ) 0Лихорадка долины Сыр Дарьи/222/79 0 5120 0 10240 0 0 1024 0 512 00 512 Составитель С.СветлышевТехред 11,Олийнык Корректор М,Максимишинец Редактор.И,Горная Заказ 3783 Тираж 552 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5