Способ определения органоспецифических аутоиммунных процессов

союз советских.социАлистиче нихРЕСПУБЛИК 191 1 О И 33 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН органоспеобретения ба. Исследуслаивают на я к медициие в терапии ке хроничес- ждающихся н иение точ- утоиммуноораз м,тап, Наа латек текса 1 О в разме соотн ОсудАРстВенный Комитето изоБ етениям и отнРытиРи гкнт сссР Д,1) 4294597/28-14(56) Злотницкая Р,П. и Фрадкин В.А,Реакция нейтрофилов периферическойкрови на печеночный антиген у больных с хроническими заболеваниями печени.Советская медицина, 1982, Р 3, с.3437,( 54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОР ГАНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АУТОИКНН 1 Х ПРОЦЕССОВ(57) Изобретение относитсе и может найти применени педиатрии при диагностикил заболеваний, сопрово Изобретение относится к медицинеможет найти применение в терапии едиатрии при диагностике хроничих заболеваний, сопровождающихсутоимунными процессами органоспфического типа,Цель изобретения - повышости способа определения аых процессов.Способ осуществляется следующ слоение тканевого антис, Инертные частицы лам 1,2 мк в концентрацииении 1:1 смешивают с аутоиммунными процессацифического типа, Цель иповышение точности споемый тканевой антиген частицы латекса и производят постановку реакции фагоцитоэа и НСТ-теста счастицами латекса без антигена и слатексом, нагруженным определенныморганоспецифическим антигеном, определяют прсцент фагоцитоза, фагоцитарное число и НСТ-тест в опытной и контрольной проблемах и результаты сопоставляют, При снижении показателейпоглощения в опытной пробе в 2 и более раэ по сравнению с контрольнойнаряду с повышением НСТ-теста в опытной пробе в 1,5 раза по сравнению сконтрольной диагностируют наличиеаутоимунного прсцесса к данному органоспецифическому антигену, Точностьспособа возрастает с 62 до 963. тканевым антигеном, приготовленным по обычной методике. Полученную смесь помещают в испарительное отделение холодильника на 18 ч, после чего центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость снимают. К осадку, содержащему латекс, нагруженный тканевым антигеном, добавляют физиологический раствор в количестве, равном первоначальному количеству антигена (концентрация латекса с анти- геном сохраняется в пределах 10 ),911 этап, Постановка реакции поглощения и НСТ-теста с латексом, нагруженным тканевым антигеном (опытная про3 1508162беэ антигена ,конба) и с латексамтральная проба),Кровь иэ пальца больного в количестве 0,4 мп собирают в пробирку,содержащую 1 каплю гепарина, центрифугируют при 1500 аб/мин в течение1 О мин снимают лейкавэвесь и растворяют ее в 0,2 мл среды Игла. Получен"ную взвесь по 0,1 мл наносятна пакровные стекла, помещенные в маленькие пластмассовые чашки, добавляют0,1 мп 17,-ного раствора нитросине го .тетриэалия, после чего в контрольнуюпробу вносят 0,05 мп латекса беэ антигена, а в опытную пробу - 0,05 мллатекса, вагруженчага тканевым акти .геном, Пробы в закрытых чашечках инкубируют в термостате 30 мив, послечего нацосадочную жидкость на покровных стеклах сливают, стекла высушивают и фиксируют в парах формалина втечение 15 мин, Докрашивают препараты ядерным красителем (например,17-ным раствором метилового зеленого в 25течение 7 мин), Пробы оценивают под им-.мерссионным микроскопом, определяя процент нейтрофилов, поглотивших частицы латекса (процент Фагацитоза), и .працен."нейтрофилов,. восстановивших нитраси- ЗОний тгтраэалий в нераствориьый Формаэан (НСТ-тест), Оба показателя определяются на одном и там же препаратекак в контрольной так и в опытнойгробе. Латекс при этом служит какФагацитируемым объектом .в реакциипоглощения нейтрофялов, так и стимулятором НСТ-теста,Сопоставляют результаты полученныхисследований процент Фагоцитаза и 40НСТ-тест) в контрсльной я огитнайпробах, достоверным диагностическимкритерием считая снижение Фагоцитозав 2 и более раз ниже па сравнению сконтрольной наряпу с павьпдением НСТ)теста в опытной пробе в 1,5 раза выше по сравнению с контролем диагностируют наличие аутоиммунвога процессак данному органоспецифяческому антигену,50Пример 1, Больной К., 12 лет,Впервые заболел вирусным гепатитом ввозрасте О лет, Поступил в стационарна 7-ой день болезни в состоянии средней тяжести с умеренно выраженной иктеричностью склер, болями в животе,печень выступала из-под ребернай дуги йа 3,5 см, Билирубин крови 28,5мг/о, АЛТед, АСТед, Протромбин снижен да 637, астатачньш азот0,27 г/л, общий белок 71 г/л альбуьины 33 г/л, глабулины а,-3 г/л; К г/л, 3 -9 г/л, у -18 г/л, Общий анапизкрови: эрятр, 47 к 10 /1 мкл; гемоглобинФ132,5 г/л; лейкоциты 52 10э,п, с%нимф 87 м, СОЭ8 мм/ч. Пря многократном исследованииНБ - антяген обнаружен не был,Зхаграмма, сигналы от границ печени хорошо выражены, на имеют измененную Форму, Дапалнител ьные импульсысредней амплитуды правильной формырегистрируются в области ворот печениПри обследовании по известному спо собу ППН беэ печеночнаго антигена0,05; ППН с печеначным автигеном 0,14.Обследование па предлагаемому спа=сабу В контрольной пробе (при фагацитоэе латекса беэ антягена) процентФагоцитоэа 47%, НСТ-тест 287, а вопытной пробе при фагоцитазе латекса, нагруженного печеначным антигеном) процент фагоцитаэа 23%, НСТ-тест421. Следовательно, Фагацитарная активность нейтрафилов при применениилатексанагруженного печеначным антигенам снижапась в 2 раза, тогда какНСТ-тест стимулированный лате ксам,нагруженным печеночным антигеном, павьпдался в 1,5 раза, Следовательно,полученные даннье входят в диагностические критерии формулы изобретенияи свидетельствуют о наличии аутоимунного процесса в отношении печеначнагаантигева, Поставлен диагноз; хронический гепатит,Дальнейшее течение заболевания позволило подтвердить установленный диагноз, Лод давлением проведенного лечения, включающего деэинтоксикацианную терапию предниэалон, витаминныепрепараты, стимуляторы иммунитета идр на 1-й день болезни состояниебального нормализовалась, однако полная нормализации лабораторных показателей наступила только на 68-й день.С диагностической целью при удовлетворительном самочувствии и удовлетворительных биох.,чаче ских показателяхпроизведена пункциональная биопсия,в заключение которой выставлен окончательный диагноз хронический гепатит умеренно выраженной активностибез признаков цирротических изменений. В данном примере диагноз под=тверждается совокупностью клинических5 1508162 б и лабораторных данных, показано также ем, наличия аутоиммуногс процесса и совпадение исследования, проведенного позволяет поставить диагноз неспеципо предлагаемому способу с наиболее Фическсгс язвен 11 ОГО колит а достоверным методом исследования - гис-.5После стиханий острых проявлений тологическим, тогда как при сбследсва- язвенного колита с диагностической нии по известному способу положитель- целью ребенку проведено ректоромано 1 ий результат не пслуч-н, Это подтвер- скопию, при которой выявлено отсек и ждает большую точность заявляемого ме- гипере 1 июслизистой Оболочки толтода по сравнению с прототипом, стой кишки, утолщение ее складок, наП р и м е р 2, Больной Д 8 лет., пичие геморрагий, отдельных эрозий, поступил в стационар с жалоба 1 ли наболи в нижних отделах 1 элвста, преимущественно,. после еды и перед актомдефекации, Периодически Отмечаетсяне 1;стой-ллвость стула, примесь слизии крови, При объективном 1 лсследсваТаким образом, в данном примерепоказаны клинико-лабораторные данные и данные диагностики по предлагаемому способу, Объективносгь диагнозаподтверждена методом ректороманоскопии, тогда как при обследовании поизвестному способу положительного диагностического результата не получено,что подтверждает большую точностьпредлагаемого способа,25 Для проверки диагностической ценности способа проведено исследованиеу 20 здоровых лиц и 68 больных различными хроническими э аболеваниями,с с пр о е Оч(даэщими ся ау тон мму иными проЦЕССЯМИ 1,нии - выражены симптомы интоксикации,значительна болезненно ть при пальпации в левой подвоздошнсй области,сигмонидная кишка спастически уплотнена, болезненна при пальпации, Вобщем анализе крови гемсглс 5 ин 80 г/л,лейкоцитов 8,9 10, Э, п, с - 62,6м, СОЭ 25, Белковые фракции: общийбелок 61 г/л, альбумины 28 г/л, глобулиновые Фракции:сс, - 2 ь,", 1 -6; Ь - 11,- 14, При кспрсскопии кала - слизьи крсвь в умеренном количестве, бактериологическое исследсванле - диссбактериоэ за усиленного роста патогенных шт яммсв кише ч 11 ОЙ палочки,При сбследсван 1 ли пс 11 звестнсм, спс;.Обу ППН без антигеня 0 08-, ППН с анти гено м кнше чник а О,. 1 8,35Обследование по изобретению провеДЕНО Н ЦВЯ ЭтапеЙ " НЯСЛОЕНИЕ Яптигена кишечника на лятекс; 11-Йпостановка Фагсцитарных реакций с латекссм без антиггна и с латексом, нагруженным антигенсм кишечника.Полученъ 1 следую 1 шле результаты: псглотительная способность нейтрофилсвпри неспециФическсм (без антигенякишечника) Фагсцитсзе 523, НСТ-тест,стимулированный латекссм, не нагруженным антигенсм ки 11 ечника, 32/, Приспецифическом латексфагсците (с использованием латекса, нагруженногокишеч 1 щ 14 апти геном) прсце 1 лт фагсци 5 ртсз а 263 НСТ-тес 1 157, Следовательно, псглотигельная способность припсстановке реакции специфического латексфагсцитоэа уменьшилясь в 2 раза,н то время как НОТ-тест, стимулированьь 1 й латексом, нагруженным кишечнымантигеном, повэ 1 сился в 1,5 раза, чтоявляется ссглас 1.с Форму.г 1 е изобретениядостоверным ди:. гностиче схим критериДля повышения точности способа в Фср 1 лулу изобретения включены пограничные значения велич 1 лн, характеризудцих снижен 11 е псглотительной и повышение НСТ-восстанавливающей способности при специфическом фагоцитозе частиц латекс, нагруженных соответствующим тканевым антигеном по сравнению с неспецифическим фагоцитозом (при применении и в качестве фагоцитируемого объекта частиц латекса беэ антигена), На высокую достоверность дан 1 ых указывает отсутствие разницы показателей поглотительной и НСТ-восстанавливающей спссо 5 ности при постановке неспецифического и специфического ( с различными тканевыми антигенами) фагоцитоза у здоровых лиц (р (0,05), В то же время высокая достоверность различия результатов (р ( :0,001) при постановке неспецифического и специфического (с латексом, нагруженным соответствующим тканевым антигеном) фагоцитоза у больных хроническими заболеваниями, сопровождающимися аутоиммунными процессами, под- тверждает высокую диагностическую ценность предлагаемого способа.1508162 Високая специфичность и связанная с ней большая точность диагностики заявляемого способа по сравнению с прототипом обусловлена тем, что регистрацию специфических аутоиммунных процессов проводят не на морфологическом, а на функциональном уровне,Составитель И,БашкаевТехред И Лоргентал Корректор Т, Малец Редактор И, Келемеш Заказ 5536/48 Тираж 789 ПодписхоеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Н, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 Точность диагностики у обследуемахбольных по изобретению составила 96%,тогда как положительные результатыпри использовании известного способа;получены только у 62% случаев, Обладал широкой информативностью,высокой специфичностью и точностьюдиагностики при технической доступности, быстроте выполнения и незначительном объеме крови, требуемой для исследования, способ может найти широкое применение в приктическом здравоохранении,Формула и з о б р е т е н и мСпособ определения органоспецифических аутоиммунных процессов путем выявления сенсибилизации нейтрофильных гранулоцитов к тканевым антигенам п чего, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа выявление сенсибилиэации нейтрофильных гранулоцитов осуществляют с помощью НСТ-теста и реакции фагоци" тоза, при этом тканевый антиген адсор-" бируют на частицах латекса, далее вычисляют фагоцитарное число, процент фагоцитирирующих клеток, процент нейтрафилов, содержащих формазан, и при снижении показателей процента фагитирующих клеток и фагоцитарного числа в два и более раэ и повышении формазан - содержащих нейтрофилов в 1,1 раза по сравнению с контрольной пробой, не содержащей антигена, опреде" ляют наличие аутоиммунного процесса,