Способ получения антигена для диагностики вирусного гастроэнтерита

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических Республик(22) Заявлено 12. 06, 78 (21) 2628370/28-13с присоединением заявки Мо(51)М. Кл.з А 61 К 39/22 Ю/А 61 В 10/00 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытийДата опубликования описания 23.12.80(72) Авторы изобретения Л.А.Иекоян и С.Г.Дроздов Институт полиомиелита и вирусных энцефали овАМН СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОГО ГАСТРОЭНТЕРИТАИзобретение относится к медицин-, ской вирусологии и может найти применение для диагностики вирусного гастроэнтерита. 5Известен способ получения антигена для диагностики вирусного гастроэнтерита путем выращивания обеэьяннего вируса 5 Ав культуре клеток с последующим выделением вируса из 10 инцифированной культуры клеток 1).Однако известный способ не обеспечивает высокой гемагглютинирующей активности антигена.Целью изобретения является повышение гемагглютинирующей активности агнтигена.Эта цель достигается тем, что после выращивания инфицированную культуру клеток отделяют от питательной 20 среды центрифугированием и выделяют вирус путем добавления к полученному осадку воды в количестве 1/20-1/25 к объему осадка и отделения жидкой фракции. 25Способ осуществляют следующим образом.Культуру клеток почек зеленой мартышки, или клеток перевиваемой линии Чего заражают вирусом обезьян 30 5 А. На третий день после заражения, т.е. до наступления полного цитопатического эффекта, клеточный слой механически (пастеровской пипеткой сзагнутым концом) отделяют от стекла, и вместе с культуральной жидкостью центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость сливают, а к осадку для разрушения оболочки клеток и концентрации вируса добавляют двадцати-двадцатипятикратно уменьшенный объем дистиллированной воды (по сравнению с объемом надосадочной жидкости). Затем центрифугируют при 1500 об/мин в течение 20 мин для осаждения разрушеннык клеток и насадочную жидкость используют как антиген в реакции торможения гемагглютинации.Приготовленный препарат можно хранить при температуре-15 Со несколько месяцев или при +4 С в течение одного месяца и испольэовать по мере надобности как гемагглютинирующий антиген в реакции торможения гемагглютинации,Способ позволяет повысить гемагглютинирующую активность антигена вируса 5 Адо такой степени, чтоЗаказ 8920/3 Тираж 673 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва,Ж,Раушская наб.,д.4/5 ефилиал ППП "Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4 он может быть использован в реакциигемагглютинации с целью серологической диагностики вирусного гастроэнтерита.Способ не требует специального.лабораторного оборудования и доступендля широкой сети вирусологическихлабораторий.Кроме того,он йозволяет проводитьбыструю диагностику вирусного гастроэнтерита, в течение одного рабочего дня. Это имеет большое значениедля своевременной диагностики илечения острых вирусных ,гастроэнтеритов, особенно у детей грудноговозраста,Сыворотка больного ребенка испытывается в минимальном количестве,поэтому кровь берутиз пальца, нетравмируя ребенка манипуляциямивеноэного забора крови. Основнойкомпонент диагностики вирусногогастроэнтерита - антиген-прост визготовлении, достаточно стабилен,его длительно сохраняют при -10-15 С,в повседневной работе размороженныйантиген можно хранить при +4 ОС в течение одного месяца. Гемагглютинирующая активность антигена довольно высокая, титр его достигается1:160 - 1:320. Поэтому расход анти гена в рабочем разведении минимальный. При хранении в замороженном сОС- тоянии длительное время гемагглютинирующая способность его сохраняется беэ снижения титра, чем и обеспечивается надежность способа. Способ получения антигена для диагностики вирусного гастроэнтерита путем выращивания обезьяннего вируса 5 Ав культуре клеток с последующим выделением вируса из инфицированной культуры клеток, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения гемагглютинирующей активности антигена, после выращивания инфицированную культуру клеток отделяют от питательной среды центрифугированием и выделяют вирус путем добавления к полученному осадку воды в количестве 1/20-1/25 к объему осадка и отделения жидкой фракции. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе 1. Агсйч СезатЬе Ч 1 гпзйогсЬипд,1967) 22 у 235-245,