Способ размножения и сохранения клубеньковых бактерий, используемых при производстве нитрагина

(51)4 С 12 И 1/04//(С 12 4,С 12 К 1; ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ БССР логии АНСРКарбановичмицкий ие в биотехномьппленность) тякович А.В но-исследов льскохоэяйс Минск) 1974 венной микробиологии,т. 48, 172,ипч ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ(4 б) 15,03.88, Бюл, И (71) Институт микроби и Институт торфа АН Б (72) Н.И.Мильто, А.И М.З.Лопотко и П,Л.Куэ (53) 577,15 (088,8) (56) Бекер М,Е, Введе логию, М.: Пищевая пр 1978, с. 83Позднякова А.И., Х Труды Всесоюзного нау тельского института с(54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ И СОХРАНЕНИЯКЛУБЕНЬКОВМХ БАКТЕРИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ НИТРАГИНА(57) Изобретение относится к способам размножения и сохранения клубеньковых бактерий при производстве бактериального препарата нитрагина, Сцелью повьппения численности и выжива"емости бактерий и упрощения способав качестве природного субстрата-носителя и источника питания используюторганический сапропель с содержаниемсухих веществ 15-257. Производятподготовку сапропеля, нейтрализуя егоуглекислым кальцием до рН 6,8-7,2,расфасовку, холодную стерилизациюпоследующей инокуляцией его исходньинокулюмом клубеньковых бактерий,упаковку и хранение, 2 табл.Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается размножения и сохранения клубеньковых бактерий при производстве нитрагина. Бактериальный препарат - нитрагин применяют в сельском хозяйстве для инокуляции клубеньковыми бактериями бобовых культур с целью повышения их аэотнакопительной способ ности, урожайности и качества продукции.Цель изобретения - повышение численности и выживаемости клубеньковых бактерий и упрощение способа. 15Способ заключается в том, что использование в качестве субстрата-носителя клубеньковых бактерий органических сапропелей с содержанием сухих веществ 15-257 обеспечивает за 20 счет органического материала, содержащего питательные вещества, активное размножение и сохранение в течение года в 3-5 раз большего количества жизнеспособных клеток быстро и мед.ленно растущих клубеньковых бактерий при незначительном загрязнении посторонней микрофлоры.Сапропели по свойствам подразделяются на органические, кремнеземистые иЗ 0 и карбонатные. Органические сапропели характеризуются повышенным содержанием органического компонента (59,6-95,77 в расчете на сухое вещество), невысокой эольностью (6,3- 40,27), значительной амплитудой рНс 4,6-7,4.Элементарный состав органической массы сапропелей сравнительно постоянен, Содержание углерода колеблется 40 от 48 до 657 азота - от 1,3 до 6,07, на абсолютно сухую органическую массу. Сапропели содержат все биогенные 45макро- и микроэлементы, Доступностьпитательных веществ сапропелей длямикроорганизмов сравнительно невелика, Нейтрализация сапропелей, имеющихкислую реакцию, внесением СаСО,50обезвоживание их до определенныхпределов, а также стерилизация повышают доступность питательных веществ и полноценность сапропелей вкачестве субстрата для размножения55и сохранения клубеньковых бактерий.Влияние обработки сапропеля на егохимические свойства представлены втабл.1,П р и м е р, В качестве субстрата для размножения и сохранения различных видов клубеньковых бактерий ис-, пользуют органический сапропель озера Судобль Минской области или озера Лочинское с содержанием сухого вещества 207, Нейтрализованный СаСО до рН 7,0 сапропель расфасовывают в полиэтиленовые пакеты иэ расчета 50 г сухого вещества, Пакеты запаивают, упаковывают в кортонные коробки и стерилиэуют гамма-излучением в дозе 4,0-5,0 Мрад. Простерилизованный сапропель проверяют на стерильность путем высева его водной суспенэии 1:10 на мясопептонный агар с 0,57 глюкозы и 0,57. сахарозы. Стерильный сапропель инокулируют инъекцией жидкой культуры инокулянта непосредственно в пакет. Инокулянт вносят иэ расчета 1,0 млрд, жизнеспособных клеток на 1 г сухого сапропеля. Прокол заклеивают липкой лентой и содержимое пакетов тщательно перемешивают. Пакеты с инокулированными клубеньковыми бактериями сапропелем хранятопри температуре 16 С.Результаты использования органического сапропеля при содержании 15-257 абсолютно сухого вещества приведены в табл.2.Таким образом, в сравнении с прототипом при использовании в качестве субстрата-носителя торфа наблюдались низкие титры размножения - 12,6 мпрд. клеток и сохранение в течение года всего 6,5 млрд. клеток ,в 1 г сухого препарата, а по предложенному способу в течение года сохранность бактерий в 3-5 раз выше.Формула изобретенияСпособ размножения и сохранения клубеньковых бактерий, используемых при производстве нитрагина, предусматривающий подготовку природного субстрата-носителя и источник питания, путем нейтрализации его углекислым кальцием до величины рН 6,8-7,2, расфасовки, холодной стерилизации с последующими инокуляцией его исходным инокулюмом клубеньковых бактерий, упаковкой и хранением, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что, с целью повышения численности и выживаемости бактерий и упрощения способа, в качест1314661 ческий сапропель с содержанием сухих веществ 15-257 ве природного субстрата-носителя иисточника питания используют органиТаблица Влияние отдельных приемов предварительной обработки сапропеля на его химические свойства Аналнэируемые формы сапропеля Химические пока 152 сухого вещества 252 сухого вещества 203 сухого вещества эа тели 1 2 5 е 15 5 э 50 7 е 05 7 э 25 520 5 э 45 7 в 10 7 э 20 5 е 25 5 в 45 710 720 рН 1350 3200 1800 3600 2600 4800 3400 5800 3500 5750 4520 6750 Содерзание аммиачного азота 304 Н,об. 360 Н.об, 446 Сл. 500 Сл, 528 Н,об, 280 Н,об,Содерщание ннтратного азота 1 11 8 20 6 17 11 1 8 5 2 Содернание подвинного фосфора 68 83 77 82 79 . 82 74 78 75 80 89 82 Содерхание подвнкного алюминия 63 131 131 87 42 135 132 85 49 145 140 99+ - сапропель беэ внесения СаСОэ, П - сапропель, нейтралиэованиый СаСОэ,фь - сапропель, не подвергнутый стерилизации, 2 - сапропель, подвергнутый стерилизации файф " Содерщание углерода н остальных элементов дано в мг на 1 кг субстрата. Таблица 2 Размножение и сохранение клубеньковых бактерий ворганическом сапропеле оз. Лочинское Минской обл.с содержанием сухого вещества 15-257 Количество клубеньковых бактерий,млрд/г сухого веществаКоли че с тво постоИнокулянт Срок хранения, месяцы 0 12 Сапропель, содержащий 57. сухого вещества Клубеньковые бактерии сои, шт,629 а 0,5 31,8 0,3 21,2 24,5 13,6 Клубеньковые бактерии люлина, шт.367 а 0,6 19,8 28,4 23,5 10,2 0,3 Содерванне водорастворимого углерода" " ронних микроорганизмов,З от коли-,честваклубенько"вых бактерийИиокулянт Срок хранения, месяцы 12 1 3 Клубеньковые бактерии гороха, шт,250 а 0,2 145 э 0 106 э 9 637 70,0 1,5 Клубеньковые бактерии сои, шт, 629 а 0,6 38,0 49,6 41,5 25,0 0,3 Клубеньковые бактерии люпина, шт. 367 а 0,8 31,5 37,4 29,8 14,8 0,4 Клубеньковые бактерии гороха, шт. 250 а 2,0 89,4 183,7 114,5 84,0 0,3 Сапропель, содержащий 257. сухого вещества Клубеньковые бактерии сои, шт, 629 а 0,5 29,6 20,5 21,7 12,5 0,5 Клубеньковые бактерии люлина, шт. 367 а 0,7 23,4 27,5 20,5 8,6 0,4 Клубеньковые бактерии гороха, шт. 250 а 1,8 110,0 103,6 59,7 58,7 0,3 Составитель И.Привалова Техред И,Попович Редактор Л.Павлова Корректор М,Демчик Заказ 1199 Производственно-полиграфическое предприятие, г,ужгород, ул.Проектная,4 Сапропель, содержащий 207 сухого вещества Тираж 520 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж"35, Раушская наб., д.4/5 Количествэо постоффронникмикрооргаиизмое,йот коли,честеаклубенъковых бактерий