Способ фракционирования антибиотика спирамицина на его составляющие.

118401 Класс ЗОЬ, 6 ПАТЕНТ явите водов Рона К) во химических за ц рное обществоДей странец Сергей Челич ОСОБ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ А СПИРАМИЦИНА НА ЕГО СОСТАВ ИБИОТИ ЯЮЩИЕ 28 марта 1956 г. за576580/31 в Министерство здравоохранения Опубликовано в ;1 эюллетенс изобрстеиип:5 за 1960 г. Заявле) Предлагается несколько способа тибиотиков. Первый способ заключается в ис противотоком, например, в аппарате Второй способ заключается в и тографии на окиси алюминия, Для о мицинов 11 и 111 целесообразно при рамицина, например бензол или эфи Для отделения спирамицина 11 о бый растворитель спирамицинов, на зола или циклогексана и эфира. Третий способ (дающий наилуч проведении грубого разделения осн противоточной экстракцией или хро. миния. П р и м е р 1, 20 г спирамицина ерракционируют в аппарате Крейга,200 сма каждая. В качестве раствори ные фазы следующей смеси: бензол оуферный ра 6,47 К -кристаллических анв в лен пользовании метода распределенКрейга. оведении сепарации путем хрома- деления спирамицина 1 от спираменять хороший растворитель спишие р ований матогр ультаты) заключается с последующей очистко ированием на окиси а)п в виде необработанного основания остоящем из 60 камер, емкостью теля применяют обе сепарирован 1 объем 5 г, РО;НУа:.(РО)Нг1 л)рата Кружаютла. Зат ставор; рНводы ою камеру атурой 24,в 200 сма б Н.О- - 7, 14 г; 6,В кажд юй темпер спирамицин пп заг енз ига, помещенного в ср00 см водной фазым производят фрак у с постоянрастворяютяирова шюс ностранная фирма Общест ак ионеспирамицина П 1 используют слаимер смесь циклогексана и бенМ 118401 ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА СПИРАМИЦИНОВ 1, 1 иФиэпкс-химические Спирамицин 1 , Спирамицин 11 , Спирамипин 111 показатели Эмирическая формулаС . 46 - 48 79 - 83 15 - 6 46 - 48 79 - 83 15 - 16 46 - 48 79 - 83 16 - 17 О Молекулярный вес (найден эбуллиометрически) около 900 около 800 около 800 7,6 7,6 7,7 РКв,128 в 1 130 - 3 134 - 7 Т. пл. (блок Маккена) Максимум поглащенияв ультрафиолете (раствор в этиловом спирте),232 л 1 мк 232 п,пк 232 ч.ик М (хроматография на бумаге) 0,22 0,015 0,04 П р и мер 2, 100 г спирамицина в виде необработанного основа. ния растворяют при температуре кипения в 120 см бензола, раствор охлаждают до 10 и в течение 15 час. подвергают медленному встряхиванию; полученные кристаллы центрифугируют, промывают 30 см бензола и просушивают, в результате чего получают первую фракцию кристаллов. разделение по общепринятой технологии. В первую камеру вводят 100 сма раствора спирамицина в бензольной среде, встряхивают, осветляют и переводят бензольную фазу из второй камеры в третью, а из первой камеры во вторую, фракционирование продолжают, вводя после каждого осветления в первую камеру 100 сма бензольной фазы.После проведения 59 последовательных перемещений разделение можно считать законченным.Компоненты встречаются в чистом виде в растворах соответственно следующих камер:Спирамицин 1 - камеры 5 - 15Спирамицин 11 -21 - 28Спирамицин 111 -35 - 45Бензольные растворы, содержащие одинаковые компоненты в чистом виде, собирают, растворитель удаляют посредством дистилляции под пониженным давлением, а осадок после дистилляции высушивают в вакууме. В результате получают спирамицина 1 - 7,8 г, спирамицина 11 - 2,7 г, спирамицина 111 - 3,4 г с константами, приведенными в таблице.Маточники, к которым добавляют фильтрат после промывки, упаривают в вакууме до 60 см, и полученный раствор подвергают кристаллизации, как было указано, в результате чего получают вторую фракцию кристаллов,Третья фракция получает,"я путем выпаривания досуха маточныхвод. 50 г первой, фракции перекристаллизовывают из 100 см бензола,как было указано, полученные кристаллы промывают 20 см бензола ивысушивают. Получают 29 г кристаллического продукта,Третья перекристаллизация описанного продукта из 40 см бензолапозволяет получить 14 г кристаллов, содержащих только смесь спирамицинов 11 и 11, с содержанием спирамицина 11 56% (по весу).25 г основания, обогащенного спирамицином 1 и содержащегося вофракции 1, растворяют в 125 смз эфира и раствор хроматографируютна колонке с окисью алюминия (вес окиси алюминия 500 г, диаметр колонки 28 лы). После пропускания эфирного раствора хроматограммупроявляют в эфире с тем, чтобы удалить спирамицины 11 и 111, затемэлюируют спирамицин 1 пропусканием через колонку эфирноапетоновойсмеси (с объемным соотношением 1: 1).В результате получают спирамицин 1 с константами, приведеннымив таблице примера 1.20 г спирамицина 11 и 1 П, полученного тремя последовательнымикристаллизациями и имеющего следующий состав: 56% по весу спирамицина 11, 44% по весу спирамицина 111, фракционируют в аппаратеКрейга по методике, описанной в примере 1.Оба компонента содержатся в чистом виде в растворах, взятых изследующих камер;спирамицин 11 - из камер от 6 до 15спирамицин 1 Пот 21 до 31Бензольные растворы, соответствующие этим двум группам камер,высушивают и полученные основания кристаллизуют из бензола так же,как в примере 1.Получают 7,2 г спирамицина 11 и 5,1 г спирамицина П 1 в крпстал.лическом виде с константами, приведенными в таблице примера 1.П р и м е р 3. 50 г кристаллизованной смеси спирамицинов 11 и111, приготовленной как в примере 2, со следующим составом;56 вес. % спирамицина 11, 44 вес, % спирамицина 111 растворяют в450 с,яз смеси циклогексан-эфира (2: 1 по объему) и хроматографируют на колонке с окисью алюминия (вес окиси алюминия 600 г, диамезр колонки 35 ян). Хроматограмму проявляют сначала той же смесьюциклогексан-эфир, затем последовательно эфиром и смесью эфирацетон (1: 1 по объему).Фракцию, полученную при проявлении смесью циклогексан-эфир,упаривают под пониженным давлением и осадок высушивают, а затемкристаллизуют из 12 см бензола, как указано в примере 1. При этомполучают 4 г спирамицина 111 в виде кристаллического основания.Обработка таким же способом фракции, полученной при проявлении смесью эфир-ацетон, с последующей кристаллизацией по указанному в примере 1 способу дает 5,8 г спирамицина 11 в виде кристаллического основания,Константы обоих соединений соответствуют приведенным в таблице примера 1.П р и м е р 4, 50 г спирамицина в виде необработанного основаниярастворяют в 500 смз бензола и раствор хроматографируют на колонке,содержащей 750 г окиси алюминия (диаметр колонки 40 мл). ПослеЛо 118401 ле, в результате чего спирамицины 11 и Ш полностью элюируются. Затем для проявления используют смесь бензол-ацетон (1: 3 по обы,- щу), в результате чего элюируется спирамицин 1 Он имеет константы, приведенные в таблице примера 1.При последующей хроматографии смеси оснований фракций 1 и 2 по методу, приведенному в примере 3, можно получить основания спирамицинов 11 и 111 в кристаллическом виде. Предмет изобретения Комитет по делам изобретений и открытий при Совете министров СССРРедактор А. К. Лейкина Гр. 139 Информационно-издательский отдел.Объем 0,34 п, л. Зак. 2888 Поди. к печ. 31,П 1-60 г. Тираж 700 Цена 50 коп, Типография Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Петровка, 14.1. Способ фракционирования антибиотика спирамицина на его составляющие, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что раствор спирамицина обрабатывают в аппарате для противоточного распределения (например, аппарате Крейга) с использованием в качестве органической фазы растворителя - смеси ароматических углеводородов, а в качестве водной фазы - буферного раствора при рН между б и 7. причем обе фазы предварительно взаимно насыщают, а после фракционирования три различные компонента спирамицина изолируют по редством экстрагироыяния, подщюлячивания, испарения и кристаллизации В ароматических углеводородах.2, Видоизменение способа но и. 1, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, первую стадию фракционирования спирамицина проводят методом хроматографического разделения на гидроокиси алюминия, с последующим экстрагированием и другой обработкой по п. 1.3. Видоизменение способа по п. 1, отличающееся 1 ем, что фракционирование спирамицина проводят путем последовательных пере- кристаллизаций в органических растворителях.