Штамм перевиваемых клеток -2, используемый для вирусологических исследований

.Я 0.1122693 А ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТ двтоескоММ СЕдтельтау(54) ЮГАМИ НЕр-КД, .И ГИЧЕСКИХ ИССЛЕД (57) Штамм НЕрКД В 5 культур Све довательско инФекций), и логических и клетокя клеточныхучно-исслевирусныхдля вирусодова- екций ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОЬРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ(71.) Свердловский научно-исслетельский институт вирусных инф(5 б) 1. Л. Саасег Кез., 1955, 15,р. 598. ПЕРЕВИВАЕИЫХ ИЕТОЕ ПОЛЬЗУЕИЫЙ ДЛЯ ВИРУСОЛООВАНИЙ.пере виваемас83 (коллекцидловского нао институтасиользуемыйсследований.,1 1Изобретение относится к медицинской вирусологии и представляет собой"клоновый вариант клеток эпидермоидной карциномы гортани человека.Известен штамм перевиваещах клеток Нер, происходящий от клетокэпидермоидной карциномы гортани человека 1Однако этот штамм в силу того,что его культивировали в различныхлабораториях при различных режимахи в различных по составу питательных средах, стал нестабильным покультуральной, морфологической ицитогенетической характеристикам ичувствительности к вирусам,Целью изобретения является штаммперевиваемых клеток Нер, обладающий стабильностью своих культуральных, морфологических и цитогенетических характеристик и определенньмспектром чувствительности к вирусам.Эта цель достигается с использованием штамма НЕр-КД, представляющего собой клоновый вариант клеток эпидермоидной карциномы гортани человека.Штамм НЕр-КД получен путеммногократйого клонирования линииклеток эпидермоидной карциномы гортани человека о Паку и последующего двукратного клонирования поУ Киню в модификации Угрюмова, хранится в коллекции клеточных культурСвердловского НИИВИ под У 5983.Иорфологические признаки. Культура клеток НЕр-КД представленакрупными полигональными клеткамис округлым ядром, содержащим 2-4ядрышка. Популяция характеризуетсяоднородностью своих составляющих:число клеток с ядрами неправильнойформы не превышает 8-1 ОХ и не более 107. клеток имеют аномальные формы митотического аппарата. Кариотипическая характеристика клетокНЕр-КД выражается в вариациях числа хромосом в клетках в пределах54-68, при этом более 453 клетоксоставляют моцальный класс с 61-65хромосомами.Физиологические признаки. Клетки НЕр-КД снимают со стекла0,023-ным раствором Версена щадящимспособом, без центрифугирования, ресуспензируют и рассеивают в матрасыв лозе 30-50 тыс./мп нли в пробирки в дозе 100-120 тыс./мл. Пересевы122693 2 55 5 О 5 20 25 30 35 40 45 50 осуществляют через 6-7 сут роста.Среда роста состоит из смеси равныхобъемов среды 199 и среды Игла с добавлением 107 нативиой, отконтролированной в отношении микоплазм сыворотки крупного рогатого скота, В средуроста добавдяют антибиотики: пенициллин ЮО ед/мл, стрептомицин50 ед/мл, рН среды роста в пределах .7,2-7,4.Клоновая линия НЕр-КД характеризуется выраженной стабильной чувствительностью к вирусам: аденовирусыдо 6,5 ед ТЦД 50 , респираторно-синцитиальный (штамм тощ) до 6,0 Ер,ТЦД 5 Ом, ЕСНО до 5,0 ЕВ ТИЛфЗомюьполновирусы (1, 2, 3 типы) до 75 ЕяТЦД 50 ЕЦП р н м .е р 1. Использованиеклоновой линии перевиваемых клетокНЕр-КД как производственной культуры в работе с энтеровирусами.В процессе разработки эритроцитарного группоспецифического диагностикума Коксаки В был испытан ряд различных клеточных культур, в частности НЕр-КД, КН, Чего, ПЗИ иИК, с целью выбора оптимальнойдля дальнейшего ее использованияв качестве производственной культуры,Опыты показали, что в отличие. откультур ПЗИ, ИКи Чего (почкиобезьян) клеточные культуры НЕр-КДи КН позволяют получать вирусныеантнгены с высокой не только инфек-ционной, но и сенсибилизирующей активностью. Однако в отличие от куль-туры КН клоновая линия НЕр-КДимеет преимущества: стабильностькультуральных и морфологических признаков в течение длительного времени, неприхотливость к используемымпитательным средам и вследствие этого большую доступность для использования, а также более выраженнуючувствительность к вирусам Коксаки В,В табл. 1 дана характеристикаинфекционной и сенсибилизирующей активности антигенов вирусов Коксаки В,полученных в культуре НЕр-КД по данным многократных (до 14 повторностей) опытов,В настоящее время клоновая линияперевиваемых клеток НЕр-ХД исполь" зуется для получения экспериментально-производственных серий эритроцитарного группоспецифического диагностикума Коксаки ВПоказатели активиосги Серотипы вирусов Коксакн В В 1 В 2, ВЗ В 4 В 5 В 6Инфекционная активность ТЦЛрор 8, 6,0 8,1 5,5 7,0 8,0 Сенсибилизируащая актив-,ность, ед титра сывороткив РНГА 85 97 111 101 110 75 Таблица 2 удельный вес выделенных втаммов, Х Вирусы НЕр-КД фЭЧПолиовирусы 8,0 Коксаки 53,0 8,0 34 ОТа бли ца 3 ЕСНО Наличие цитопатического эффектаСроки появления цито- Накоплениепатнческого эффекта вируса, еддн ТПД Клеточные культуры 4-6 3-4 ПМСОПЭВ 1-1,51-2 О КВ ПЭБ ПЭЧ 0 0 О 0 5 0 3-4П р и м е ч а н и е 3 Ф - наличие цитопатического эфФекта, 0 - отсутст- вие цитопатического эффекта,ВНОВЕ Зевав 8100/23 Тмраа 521 Подписноеалкай 3 ВП нВве 3 в г.Уагород ул.Проектная, 4 3 1.1.22693В табл.З.дана чувствительность кле- Использование культуры НЕр-КД точных культкр к РС-вирусу затаим 61, позволяет отработать условия полуСпецифические .изменения на пере- чения стабильных серий эритроцитарвиваеиых клетках обычно. появляемся ного диагностикума респираторнона один-два дня раныпе по сравнению Б синтициального вируса. в условиях с первичными культурами. производства,Таблица 1