Способ стабилизации глюкоамилазы, продуцируемой в процессе хранения

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 09) 01) 361) С 12 й 9/34 ЪОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЙ;.,Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Всесоюзный научно-исследователь- .ский институт продуктов брожения(56) 1. Авторское свидетельство СССРКд 658169; кл. С 12 М 1/00, 19792, Бланков Б,И., Клебанов Д,Л.Применение лиофилиэации в микробиологии, М Медгиз, 1961,3. Татаренко Е.С., Манько В.Г.Изучение условий хранения плесневыхгрибов коллекции, УкрНИИПП, В кн."Краткие тезисы докладов 1 конференции о задачах и методах работы микробных коллекций СССР". И., АН СССР,1972, с. 45-46,(54)(57) 1. СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИГЛИ)КОАМИЛАЗЫ, ПРОДУЦИРУЕМОЙ АБРЕКС 1 ЫЛЯ АИАМОК 1 В ПРОЦЕССЕ ХРАНЕНИЯ, предусматривающий выращивание культуры на агариэованной питательной среде, содержащей крахмал и необхо" димые минеральные соли с последующим пересевом конидий на хранение в пробирки на питательную среду аналогичного состава, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения глюкоамилазной активности и стабильности ее в процессе хранения, перед посевом конидий на хранение осуществляют активацию культуры путем по" вторного выращивания ее на концент" рированной агаризованной питательной среде, содержащей водные вытяжки из солодовых ростков и отрубей в соотношении 1:1.2. Способ по п. 1, о т л и ч а - ю щ и й с я тем, что используют 57.-ную водяную вытяжку из солодовых ростков и 107-ную водную вытяжку из пшеничных отрубей.11156 П р и м е р 1. Выращивают в пробирках штамм Абрег 11 цааавог( 466 на агаризованнои питательной среде, содержащей следующие компоненты, вес . 7: Крахмал 2КС 1 0,05мяо 0,05КН 2 Р 04, О, 1г(а Ю 0,91Ре 504, 0,001Агар 2Изобретение относится к микробиологической промышленности и может использоваться для хранения микроорганизмов в музеях коллекционных культур и лабораториях.5В настоящее время для хранения микроорганизмов - продуцентов используется целый ряд приемов, например периодические пересевы микробных культур на свежие питательные среды, О хранение микроорганизмов в сухих стерильных почвах, песке, каолине и солевых растворах 11 . Однако при этих методах хране 15 ния падает ферментативная активность микроорганизмов и необходимо проведение множества пассажей для получения первоначальной активности.Известны также способы стабилизации активности микроорганизмов в процессе хранения, предусматривающие выращивание их, высушивание путем модификации и расфасовку 2 .Однако моддификация имеет ряд не-достатков, связанных прежде всего с трудоемкостью процесса и использованием дорогостоящего вакуумного оборудования и приемника для хранения больших коллекций микробных культур30 в крупных лабораториях, располагающих специальным оборудованием.Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ стабилизации Ферментативной 35 активности Аярегц 111 ця аашог 1 в процессе их хранения, предусматривающий выращивание культуры на агаризованной питательной среде, содержащей крахмал и необходимые минеральные соли с последующим пересевом конидий на хранение в пробирки на питательную среду аналогичного состава 3.Однако при этом способе наблюдается потеря активности ферментов в процессе хранения культуры.Цель изобретения - повышение глюкоамилазной активности и стабильности ее в процессе хранения.Цель достигается тем, что согласно способу стабилизации глюкоамилазы, продуцируемой Лярегя 111 ця люашог 1, в процессе хранения, предусматривающему выращивание культу ры на агаризованной питательной среде," содержащей крахмал и необходимые минеряльнь(е соли с последующим 74пересевом конидий в пробирки на питательную среду аналогичного состава, перед пересевом конидий на .хранение осуществляют активацию культуры путем повторного выращиванияее наконцентрированной агаризованной питательной среде, содержащейводные вытяжки иэ солодовых росткови отрубей в соотношении 1:1. Используют 57-ную водную вытяжку изсолодовых ростков и 107.-ную вытяжкуиз пшеничных отрубей,Сущность способа заключаетсяв следующем.Микроорганизмы вида Аярегя 111 цяачап(ого выращивают вначале на питательной среде, содержащей агар-агар,крахмал, хлористый калий (КС 1), сернокислый магний( МрЯ 04), однозамещенный фосфорнокислый калий (КН 2 Р 04),азотнокислый натрий (ЫаНО), сер-,нокислое железо (ГеЯ 04) при 22-24 Св течение 12-14 сут.Затем осуществляют активациюпутем переноса конидий в чашкиПетри на концентрированную питательную среду, содержащую водную вытяжку иэ солодовых ростков и отрубейв соотношении 1;1 в присутствии 2 Еагара в течение 12-14 сут до достижения зрелости конидий с периодическим отбором колоний по активности.Для проверки активности культуруАяретр 111 ця ачашог 1 выращивают глубинным методом на питательной средеследующего состава: солодовые ростки,крахмал, аЮ 4, КС 1, МдБ 04, КНРО,ГеБО в течение 2-3 сут при 30-35 С.4,После выращивания глубинным методом наиболее активный вариант пересевался для хранения на питательнуюсреду: агар-агар, крахмал, ИаМО,МдБ 04, КС 1, КНР 04, Ре 504,Выращивание осуществляют в течение 1 сут при 24 ОС и рН 4,7, Получают культуру с активностью Я( г;(.мл.1 1186 20 25 Таблица,.1 Способ Активностьферментовв культуре без активации (контроль)Ф с активацией АльФаамилаза 5,1 5,1 Глюкоамилаза, ед/мл 80 Для активации штамма готовят среду .следующего состава: водная вытяжка из солодовых ростков с массовой концентрацией 57. - 50 мл; водная вытяжка из пшеничных отрубей с массовой концентрацией 107. - 50 мл; 2 Е агар-агара.107.-ная водная вытяжка из пшеничных отрубей готовится следующим образом. Навеска отрубей заливается 10 определенным количеством воды (10 г отрубей на 100 мл воды), помещается на кипящую водную баню и выдерживается в течение 1 ч, после чего фильтруется, 15 Таким же путем готовится водная 5 Ж-ная вытяжка из солодовых ростков (5 г солодовых ростков на 100 мл дистиллированной воды). Экстракции 1 проводят при 30 в течение 1 ч. ПоОлученные вытяжки смешиваются 1:. Затем к смеси добавляют агар-агар и стерилизуют 30 мин при 0,5 %а, -рН 4,7. Приготовленную среду разливают по 15-20 мл в стерильные чашки Петри и на поверхность застывшей агаризованной среды пипеткой наносят 1 мл конидиальной взвеси.Приготовление суспензии конидий проводится следующим способом, Пробирки с 12-суточной культурой, выращенной на агаризованной среде с крахмалом, заливают 10 мл стерильной З 5 дистиллированной воды, при помощи петли снимают конидии с поверхности, затем готовят разведение 10 - 10.Приготовленную суспензию культурыЪч 40 наносят на поверхность застывшеи агаризованной концентрированной среды таким обоазом чтобы после вы 1О ращивания в термостате при 22 С в течение 12 сут на поверхности выросло не более 3-7 колоний. После 12 ч роста проверяют активность активированной культуры. Для этого 1/2 часть колонии пересевают на питательную среду следующего сос тава, вес.7:Солодовые росткиКрахмалМаЮКС 1 5511,80КН 04Ре%4 74 4и выращивают в течение 3 сут при35 С. Получают культуру с активностьо 117 ед/мл,Затем активные колонии пересева.ли в пробирки на агаризованную питательную среду того же состава, чтои для выращивания, вес,Х;Крахмал 2КС 1 0,05МАЗО 0,054Иапо 0,91Ре 804 0,001Агар 2и хранили в течение 3 мес, при этомактивность сохранялась на уровне117 ед/мл, В контрольной неактивированной культуре активность глюкоамилазы через 3 мес была 80 ед/мл.П р и м е р 2. Хранят штаммАзр. ачашог Т. Выращивание, активацию и последующий пересев осуществляют на среды, аналогичные в примере 1,Перед активацией после 12-сутоточного роста культура имела активность 25 ед/мл, после активации -30 ед/мл и сохраняет свою активностьв течение 3 мес, В контрольнойкультуре активность глюкоамилазыв процессе хранения снизилась до20 ед/мл.Результаты свидетельствуют, чтопри активации культуры на концентрированной агаризованной питательнойсреде активность увеличивается исохраняется в течение 3 мес при еехранении,В табл. 1 приведена активностьферментов при хранении различнымиспособами. Продуцент Азр. аюашог 4661118674 Таблица 2,олжение табл. 1 Соотношение компонентов концентрированной средывес.й Активность ГлАв процессе хрнения, ед/мп Продуце ачашотд Альфаамилаза 5 Глюкоамилаза,2.3 2 0 ак- . р 3. Выращивание,сев проводят анало1, но для активациы используют водйьодовых ростков ибей различных кон ивность глю-в процессе Во вс коамилаз хранения Таким тения по глюкаамил активносизцентбл,2. едставлены в Составитель Е.ВоробьевРедактор Т.Веселова Техред Л.Микеш Коррект 4/19 НИИПИ Госу по делам 13035, Мосаказ Подписноеета СССРрытийя наб., д, 4/5 илиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проек 4 ивацию и пере ично примерусоставе сред ытяжки из сол шеничныхотру аций, Результаты Тираж 521рственного комзобретений и оа, Ж, Раушс х .случаях ак сохранялась в течение 3 образом, реал воляет повыс азы и стабил ь в процессе изация изобреть активностьзировать этухранения.