Способ получения ферментного препарата нигедазы

1 111867Изобретение относится,к фермент" ной промышпенности, технологии получения растительных ферментных препаратов, в частности к получению из семян чернушки дамасской Ба 8 еИа Йа 5 шавсепа Ь.) растительного ферментного препарата липолитического действия (нигедаза), .и может найти применение как в медицине, так и в других отраслях (пищевая, фармацевтическая промышленность, сельское хозяйство, научно-исследовательские работы по биохимии) .Известны способы получения фермен" тов липолитического действия из сырья 15 животного происхождения 1.Наиболее близким к предлагаемому . является способ получения ферментов препарата нигедазы из семян чернушки дамасской (Ядейа йашавсепа Ь), согласно которому сухие семена измельчают, обрабатывают ацетоном, экстрагируют водным раствором аммиака (с рН 9-10), изменяют рН от щелочного до кислого значения и наоборот, удаляют баластные белки центрифугированием, осаждают липазу сульфатом аммония, растворяют осадок, диализируют и лиофилизируют. Выход препара- . та липолитического действия, полученЗО ного этим методом, составляет 7%, липолитическая активность " 55 000 ед/г (по оливковому маслу) Г 2 3.Однако укаэанный способ характеризуется недостаточно высокой активностью препарата.35Целью изобретения является увеличение активности препарата.Укаэанная цель достигается тем, что согласно способу получения ферментного препарата нигедазы из семян чернушки дамасской (И 1 кеИа Йашавсепа Ь) путем измельчения сырья, обработки его ацетоном и экстракции фермента из полученного ацетонового порошка водным раствором аммиака с последующей лиофилизацией целевого продукта, семена предварительно выдерживают при 35-39 С в воде при соотношении 1:(2-3) в течение суток.При экстракции используют водный раствор аммиака с рН 9,5-11,5.На фиг.1 приведена зависимость липолитической активности .от температуры активации и влажности; на фиг,2- то же, от величины рН экстрагента.Липолитическая активность конечного продукта значительно возрастает при введении в технологическую 3 3схему стадии активации, заключающейся в создании оптимальных условий температуры и влажности. Результаты исследований показали, что таковыми являются температура 35-39 С и влажность 200-3003 (фиг.1). Применение экстрагирующего агента с рН 9,5-11,5, дистиллированной воды, подщелоченной аммиаком, способствует повышению липолитической активности (фиг.2),Предложенный способ позволяет увеличить липолитическую активность препарата в 2-3 раза.Нигедаза представляет .собой порошок темно-бурого цвета растворимый в воде, обладает выраженным липолитическим действием, которое характеризуется способностью расщеплять природные жиры и масла (кукурузное, подсолнечное, хлопковое, абрикосовое, льняное, оливковое масло и свиной жир).При 2003 влажности липолитическая активность составляет (фиг.1) 110 тыс.ед./г, что соответствует требованиям нормативно-технической документации. Повышение влажности свыше 300 нецелесообразно, так как далее липолитическая активность находится на одном уровне с липолитической активностью при влажности 300 .Экстракцию ферментного препарата можно проводить экстрагентом с рН 9,5- 11,5,так как в интервале этих величин липолитическая активность нигедазы составляет 115-110 тыс.ед/г, с оптимумом при рН 10-11 (140-150 тыс.ед/г).П р и м е р 1, 100 г воздушно-сухих семян чернушки дамасской заливают водой 35 С в соотношении 1:2,0 (200 . влаги) и оставляют на сутки в термостате при той же температуре для активизации. По истечении суток избыточную влагу удаляют, а активированные семена измельчают на вальцах. Измельченные семена обрабатывают охлажденным ацетоном в соотношении 1:3 (по объему) в течение 30 мин. Ацетон удаляют.Из измельченных семян экстрагиру" ют нигедазу дистиллированной водой, подщелоченной аммиаком до рН 9,5 (по весу). Продолжительность активации 30 мин.Полученное извлечение, содержащее нигедазу, отделяют от шрота центрифугированием, стабилизируют сахарозой (О, 1 г сахарозы на 1,л воды) и высушивают лиофильно.Липолитическая активность нигедазы 110 000 ед/г.Выход препарата нагедазы 8,2 г.П р и м е р 2. 100 г воздушно"сухих семян чернушки дамасской заливают водой 37 С в соотношении 1:2,5 (2503 влаги) и оставляют на сутки в термостате при той же температуре 10 для активации. По истечении суток избыточную влагу удаляют, а активизированные семена измельчают на вальцах.Измельченные семена обрабатывают 15 . охлажденным ацетоном в соотношении 1;3 по объему в течение ЗО.мин. Ацетон удаляют. Из измельченных семян экстрагируют нигедазу дистиллирован, ной водой, подщелоченной аммиаком до 20 рН 10,5 (по весу). Продолжительность экстракции 30 мин Полученное извлечение, содержащее нигедаэу, отделяют от шрота центрифу гированием, стабилизируют сахарозой (О, 1 г сахарозы на 1 л воды) и высушивают лиофильно. 1118673 4Липолитическая активность нигедазы 150 000 ед/г.Выход препарата нигедазы 8,7 г.П р и м е р 3. 100 г воздушно-сухих семян чернушки дамасской заливают водой 39 С в соотношении 1:3(ЗООХ влаги) и оставляют на сутки в.термостате при той же температуредля активизации. По истечении сутокизбыточную влагу удаляют, а активированные семена измельчают на вальцах.Измельченные семена обрабатываютохлажденным ацетоном в соотношении1 фЗ (по объему) в течение 30 мин.Ацетон удаляютИз измельченных семян экстрагиру- .ют нигедазу дистиллированной водойподщелоченной до рН 11,5 (по весу).Продолжительность экстракции 30 мин.Полученное извлечение, содержащеенигедазу, отделяют от шрота центрифугированием, стабилизируют сахарозойЮлююуАМРсюи 7имия рМ 8 У Ю Зобцсимосмь лсо отди 8 ностц от ЬауястФ Фю