Способ отбора фагоустойчивых мутантов стафилококков

СОЮЗ СОВЕТСКИХсоцидлистичеснихРеспуБлик 9) (11) 12 Н 15 0 осудАРственн ДЕЛАМ ИЗОБ ИСАНИ РЕТЕНИ Серебряная дена Трудо- сударственлетия воссоеоов В.Г.при полу мм иология",е 1 сЬо 1 111 с р с 111 з.1966,асЫ"В 1 ой комитет сссрретений и открытий Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТ(46) 15.09.84. Бюл.34 (72) Ю,С. Бабенко и М.З. (71) Днепропетровский ор вого Красного Знамени го ный университет им, 300- динения Украины с Россие (53) 576.093.1(088.8) (56) 1, Ильина Т.С., Жда Использование актинофага чении фагоустойчивого шт та эритромицина.-"Микроб 1964, 33, с. 516.2. Навет 2. е 1 а 11. Т аэ а совропеп ой а зрес гесерог 1 п Вассд 1 оз зпЬ сЬ 1 щ, В 1 орЬув 1 са 1 Аса", р. 4 15-417 (прототип),54)(57) СПОСОБ ОТБОРА ФАГОУСТОЙЧИЫХ МУТАНТОВ СТАФИЛОКОККОВ путем бработки микробных клеток М -нитро К -нитроэогуанидином с последующим одращиванием культуры, пересевом а питательную среду и отбором фагстойчивых мутантов, о т л и ч а юи й с я тем, что, с целью упроще ия способа, культуру пересевают на реду, содержащую новобиоцин в конентрации 62,5-125 ед/мл среды.)( тецие пазб атаард мутантРНОй г)ДГ -ПРОСТИТЬ Г;ОГОООЛ сДс.(П.И:( Нез дтиг Изобретение относится к микробио-. логии, касается отбора фагоустойчиьтх м 1 т а ь та в с т дп)и 1 0 кОке О ь и м О же т сыть;1 спсльзсвдес в ваку умно сывс ротачнсм производстве,Известен способ отбора фагоустой-. чивых му:антов путем совместного культивирования актиномицета с умеренным фагом с последующим отбором устойчивых к фагу клонов птгпг 7маОдиаКО даННый СПССаб ПОЗВО(ВЕТ получить мутанты, устойчивые только к одному фагу.Известен также способ отбора Фа о УСТОЙЧИВЫХ МУТЯс 1 ТО 3 СтафИЛОКОККСВ путем Об)аастки микраацых клРОк " итра 3 итра заГуаниди(Оь с па( " ледующим падращиванием культуры. пересевом на питательную среду для инкубирования с фагом и отбором фагоустойчивых мутантов, при :том Дслн полУчениЯ мУтацтси с фагоУст 0 Й ч ив О с т ь ю к ц е с к О.1 е. к и)п ф д г д м 1 е обходимо ступенчато ;тотарять способ с различными фагдми ,.Однако известный способ слс)жен при отборе мутантов с множестеццай фдгаустойчивастью. Пель изобретения - пргпцс )ГНР спаГод Отбоад мутдто Г: и;0)ке( "л Ой фагоустойчивастып. Поставленная цепь дос -цт дется тем, что согласно способу отбора фагаустайчивых мутантов стс(Ьи;1(1- кокков путем обработки ми;рсб;цпх кле так М в итра в - цитрсзсгуацппицом с ПасЕтуОПИ О;рс 1 ЦИВЛ"(МуцТурз( р пересевом д Итчтте)Ьуп; Гр.;ту и отбором фдгаустойчивых мутдц.о;3,.культуру перес( Вдют цд среду, содержащую цавобиоциц В конце трдции 62,5-125 ед/мц среды.П р и м е р. Културу ссфт 5 Окрк -ка, вырдщецую нд мясо-ПРтсццом бульоне,центрифугцрукт, ат."п вдк)т 13 буферном рдстттс)т)Р и Обрабс 1 ты;тк 17- нит 1)0 в ( - цитразатуднидицсм В коццентрдции 10 ед/мл г, течеИР т 0 10 миц при 37 ;, 3 дтем Взнес:ь центрифугируют, отмывают буферым рдст -вором и падрсцпивают в мясо - пс;ттонамбульоне В те РИР (с ч цри 07 С. ПОЛУЧЕННУЮ КУЛЬТУРУ РДССРЗДЮт ПттДТЕСС М)та ГлстУк 1 тд . РСЬ пю ГОРД( мГГПЕПТСН Н 1011 ( 0.1 Г 1)СсскЪ Ю д 11 т Ибиотик цоц(1 биаи в коце;трдции 1,92; 3,847,68: 15,36, 31,72;625, 125; 250; 500.11 пассеве Оснаруживают кОлбниирдзыми уровнями устойчивости к нс)всбисситу Колонии, выросшие ца чапках, содержащих антибиотик в концентрации от 1,92 до 15,36 ед/мл, при испытании на лизируемость фагдми оказались фдгачувствительными ,табл. 1) Их кОличРствс ссставл 51- :та0д средах, содержащих ацтибиатцк в ко 5 центрг ации выше 31,72 ед/мл. выросло значительна меньшее ( 10 раз) количество колоний, чеп цд пазах от 192 да 1536 гд/мл. ОдднаВи ттс 3 д 5 иа ч.тзс Гвя-., ель : 0; ь к ндбару фдгсв Они не лизируВтся последими (табл. 2).Кдк Видно из 1 дбл, , мутаты Обл(тдс 1 юциР устОЙчивсстью к нова бисцицу Вышс 31,. 72 ед/мл, стаОВ 5 ТСЯ С. Ч 1" ВСТБ(Т(33 ЬНЫИ К фДГДМ:11- .(и ля -.ВГ)с штдммов зто :раве: ь(62 с ) (;(мл, а плЯ тРетьего - .125 с 5(мл.Спытс 5 е копоний стдфилакоккав, ыра(.пИ)( ца дозах авоцапина 250 и - СС.)Од ,/МЛ П(1)с) Зс)10, 1 ГО ОНИ ТДКже 00)1 тд.ОТ УСОйЧИВО СТЬЮ К фсягсМ с кдк и клаи, Выросшиеа дозах 62, -125 ец/;31, В связи с Рм ;Спал, озд 1 е более Высоких даздцтитб."Отика ецелесгобразнс, так (ак "Е ПРИЕС;1 ИТ К ИЗМС.НС 1(ИЮ 3 фа гг УСТОЙ."ИВОСТИ. Пауссцц 11 е фдГО 5 стсйч 1 Выс м 5 тсз ТЫ СОХ)с 15.ПТ (.130 Ю ДНТИГЕ 11 УК (ТР)1ТУРУ: 3 К.ЦЕОЧОИ ("1 ЕНХЕ ИскссЦНЫХ утдцтцых штдм.ОВ 1 рГутст 30 ва -и укае(Тид и тейхасвдя кислота Оса 3 ые дтигеннье компоненты кле"Очцсй стенки стафилскакка. Изучение сс)х)дцост ацтигеццай струкТУРМУОП ОПТ Сцс 1 В ПРРРКРЕСТНЫХ РР аК циях д Глю 1 ицдттит показало, что имму -01 РОГть и (3 г(юти.1 тсельнссть ис;(лдцых и;у: днтых штдммов Оливдкавд (тстб.т, 31. йутдтцьстд,1 стафилскаккав3 1113408что дает возможность использовать по" специфических сывороток, токсиновлученные по способу мутанты для и другчх продуктов микробного метаполучения поверхностных антигенов,болизма.Таблица Иутант Ф С какой дозыновобиоциня Какими фагами лизируютсяШтамм, из которогополучены мутанты отсеяны 53/75/47 7,68 6/47 15)36 Т я б л и - я 2) Какими фягя 1".и яМутант.о Штамм из которого получены С какой дозыновобиоципя лизируются мутанты отсеяны 31,72 62,5 Не лизируется 125,0 То же 31,72 6/75/83 А 62,5 75/83 А 125,0 Не лизируется 31,72 151 ЗС 62,5 Ле лизируется 125,0 То жс Лизируемость новобиоциноустойчивых мутЯнтов стафилококков фагами Лизируемость новобиоциноустойчивых мутантов стяфилококков фагами 6/53/75/476/53/471113408 Таблица 3 Титр агглютинации Вариант Сыворотка истощенная мукопептидомисходного штамма Исходный 1: 400 1: 400 1:400 Мутант 1. 400 Исходный 1:800 Мутант 1:800 Исходный 1:400 1,400 Мутант Таблица 4Продукция экзоферментов исходными и мутантнымиштаммами стафилококков Вариант Штамм Гемолизины ДИК-аза Лецитиназа Фибринолизин зона продукции, мм Исходный Мутант 2,0 Исходный Мутант 2,0 Исходный 3,5 13 2,5 Мутант 3,0 Составитель Г. СмирноваРедактор Л. Пчелинская Техред А,Бабинец Корректор А. Обручар Подписное Перекрестная агглютинабельность исходных и мутантных штаммов стафилококков 1.800 1;800 1:400 1:00 Заказ 6529/21 Тираж 521ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Сыворотка, истощенная мукопептидом мутантногоштамма