Способ отбора мутантов микроорганизмов с повышенной продуцирующей способностью глюкоамилазы

(22) Заявлено 2 ч с присоединение Государственный комитетСовета Министров СССРпо делам изобретенийи открытий 23) Приоритет43) Опубликованооо 78, Бюллетень37 3) УДК 66318 (088.8),Бурд, В.Н,Гершанович, В.П.Афанасьев и И,М.Грачева Ордена Трудового Крач микробиологии имТрудового Красного 3пишевой пр ного Зна .Ф.Гамал амени те ог ьгшленг ни институ эпидемиологии орден а нститут и и Московскийнологический иси 54) СПОСОБ ОТБОРА МУТАНТОВ МИКРООРГАНИЗМОВ С ПОВЬЮ)БННОЙ ПРОДУЦИРУКЛЯЕЙ СПОСОБНОСТЬЮ ГЛЮКОАМИЛАЗЬь ого с ведет штамм яние ается тем, водят вента 2-деции;пол- одной одавляет нтов, Это нием казой.мьпшленности, кт,содержат ЗО рост и не ремени, Принаключается в нтов с паИзобретение относится к микробиоло.гической промышленности, а именно к Ферментному производству.Наиболее близким к изобретению яв" ляется способ отбора мутантов с повышенной продуцируюшей способностью глюиоамилазы предусматривающий обработку микроорганизмов глутагеном с последуюшим вырашиванием культур и отбором колоний с целевыми свойствами 1) .Недостатком эт пособа является то, что отбор ся вслепую и процесс селекции ов становится трудоемким.15Цель изобретени повышение эффективности и сокраше времени отбора Поставленная цель дости что вырашивание культур пр присутствии селективного а збкси-Д-глюкозы в концентр ностью подавлякшей рост ис культурыИзвестно, что глюкоза и синтез индуцибельных Ферме явление известно под назва таболитная репрессия глюко Среды, используемые в про .например кукурузный экстра большое количество глюкозы. Кроме топо, глюкоза являясь конечным продуктом гидролиза крахмала глюкоамилазой, накапливается в Ферментационной среде. Поэтому получение и использование мутантов, нечувствительных к репрессируюшему дейстьию глюкозы, позволило бы значительно увеличить эффективность производства глюкоамилазы.Предлагаемый способ. дает возможность .быстрого и эффективного отбора мутантов микроорганизмов - продуцентов глюкоамилазы, резистентных к катаболитной.репрессии глюкозой.Для этого суспензию клеток исходного штамма обрабатывают мутагеном и высеивают на чашки Петри с синтетической средой, содержашей аналог глюкозы-дезокси-Д-глюкозу в концентрации, полностью подавляюшей рост исходной культуры, Выжившие в.этих условиях единичные колонии после субклонирования на среде с ингибитором проверяют на способность синтезировать глюкоамилазу в присутствии глюкозы.Предлагаемый спосотребует бОльших затра) гципиальное отличие егнаправленном отборе муТ а б л и ц а Активность глюкоамилаэы (ед./мл ) у исходного штамма Гпдоп 1 сорз(з зр 20-9 и полученных из него мутантон серии АБ (лабораторные испытания) Названиештамма Синтетическая среда с крахмалом Регламентнасреда козой (5% без глюкозь 1. 20-9 г 5 + 1 5 14,0 + АЕ 54 0 + 1,0,5 + 1,5 Б 34 19 фО + 24,5 + 2,7,5 + Формула изобретения Спосо ннэмов, с собность ель ИПривалова ,Андрейко К остан ет ред Редактор,Ж.РожковаЗаказ 5574/30ЦНИИПИ Госуд лина Тираж 568 арственного ко )о делам изобрМосква ЖЗэ 11303 х, .РПП Патент, г, У;кгор Фили вишенной продукцией глюкоамилазы путем применения селективной среды со" держащей токсический аналог глюкозы, на которой выжинают. преимущественна колонии мутантов, нечувствительных к репрессирующему действию глюкозы.П р и м е р. Для получения мутантов дрожжей, устойчивых к катаболитной репрессии глюкозой, из известного производственного штамма - продуцента глюкоамилазы Бпс)отпсор 5(з зр 20-9 суспенэию отмытой дистиллированной во- )О дой днухсуточной культуры обрабатывают нитроэогуанидином (500 мкг/мл) и высевают (1 - 10 кл/мл) на чашки с минеральной соленой средой, содержа "18 Применение предлагаемого способаГ .3 позволяет весьма существенно сократить время, затрачиваемое селекционерами на отбор микроорганизмов с гипер- продукцией глюкоамилазы, использование которых н произнодстне резко повысит произнодительяость на предприятиях 45 микробиологической промышленности,отбора мутантон микрооргавышенной продуцирующей сполюкоамилазы, включающий общей крахмал (0,003%) и 2-дезокси-Д" глюкозу в концентрации (5,10 М), полностью подавляющей рост исходной культуры.Колонии, появившиеся на 3-4 сутки инкубации при 30 , субклонируют несколько раз на чашках, содержащих ингибитОр в концентрации 8.1 К М и проверяют на способность синтезировать глюкоа аллану в присутствии глюкозыКак видно из таблицы, путем применения предложенного способа отобраны мутанты, рез)лстентные к катаболитной репрессии глюкозой,обладающие повышенной продукцией глюкоамилазы на регламентной среде. 1 р 8 + 0,7 3,7 + 1,2 55 + 1,5 8,4 + 1,5 9,2 + 1,5 работку микроорганизмов мутагеном споследующим выращиванием культур иотбором колоний с целевыми снойствами о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения эффективностии сокрашения времени отбора, ныращивание культур проводят в присутствииселектинного агента 2-дезокси-Д-глюкозы н концентрации, полностью подавляющей рост исходной культуры.Источник информации, принятый вовнимание при экспертизе заявки:1, Патент ФРР Р 1186015,кл. ба 22/04, 1970,орректор Л.ВасиПодписноемитета Совета Министров СССРчтений и открытийРа аская наб. д. 45од ул. Проектная. 4