Способ дифференциации sтарнylососсus aureus от других видов стафилококков

САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ мед дарс Деря 1 оп от а апб юо 9 у Огео Изоб микробио при диаг ции и изу мов.Цель сти и упрПри пептидогликанаВ фИЗИОЛОГИЧР ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) Оренбургский государственныцинский институт и Горьковский говенный медицинский институтим, С.М. Кирова(56) ЯСЫеИег К.НКосиг М,СаззбсЯтарЬуососс Ьазес оп СЬещЬосЬегпса ргорепез, - Агсй, Мсго1973, ч. 93, р. 65-85.(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИ ЯТАРНУ ОСОССОЯ АОЯЕОЯ ОТ ДРУГИ ВИДОВ СТАФИЛОКОККОВ ретение относится к медицинской логии и может быть использовано ностике стафилококковой инфекчении таксономии микроорганизизобретения - повышение точноощение способа.м е р . Для изучения лизоцимсвяй способности (ЛСС) используюточной агаровой культуры стафиотмытого центрифугированием в ическом растворе 2-3 раза в 0 мин при 3000 об/мин и суспеного в физиологическим растроре еской плотности 0,1 ед на ФЭК-М ном светофильтре в кювете шири, что соответствует концентрации кр, кл./мл.определения ЛССльзуют взвесь ПГ зывающевзвесь сутлококка,физиолотечениедированндо оптичпри зеленой 5 мм4 10 миДля(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике стафилококковой инфекции и изучении таксономии микроорганизмов. Цель изобртения - повышение точности и упрощение способа. Исследуемую культуру стафилококка выращиваютна питательной среде, Из части полученной биомассы выделяют пептидогликан в количестве 10 мкг/мл и определяют его лизоцим. связывающую способность (ЛСС), Другую часть биомассы отмывают, готовят суспензию с концентрацией 2 10 микр.кл,/мл и опре 8деляют ЛСС. Затем определяют соотношение ЛСС пептидогликана к ЛСС клеток и при его значении от 4,61 до 5,5 культуру дифференцируют как ЯтарЬуососсцз ском растворе, выделенного из изучаемого микроорганизма, ПГ используют в концентрации 20 мкг/мл. Указанная концентрация ПГ примерно соответствует его содержанию в 4 10 кл. стафилококка. Исследуемые взвеси смешиваются в равных обьемах (1 мл + 1 мл).с раствором яичного лизоцима: в случае целых клеток концентрация лизоцима 20 мкг/мл, в случае ПГ - 4 мкг/мл, так что конечные концентрации ингредиентов составляют 2 10 кл./мл и 10 мкг лизоцима/мл, 10 мкг ПГ/мл и 2 мкг лизоцима/мл. После инкубации в течение 10 мин при соответствующем температурном режиме (в случае изучения ЛСС целых клеток при 37 С, в случае изучения ЛСС ПГ при 4 С) проводят разделение свободного и связанного лизоцима (клетками, ПГ) центрифугированием. Далее определяют остаточную концентрацию несвязанного лизоцима в супернатан1611933 Составитель Г.СмирноваТехред М.Моргентал Корректор А.Обручар Редактор Н,Бобкова Заказ 3813 Тираж 487 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж,.Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 т: в случае изучения ЛСС ПГ исследуемый объем супернатанта 0,5 мл; в случае изучеия ЛСС клеток 0,1 мл супернатанта смеивают с 0,4 мл физиологического аствора, последнюю операцию проводят 5я относительного уравнивания концентаций лизоцима в пробах, В дальнейшем пределяют концентрации лиэоцима в проах по степени изменения оптической плот- ости индикаторной культуры Мсгососсцз 10 т сецз на ФЭК-М. Величину лизоцимсвязыающей способности определяют по формуе: ЛСС = 10 мкг - (концентрация лизоцима 15 пробе, мкг), после этого определяют энаение показателя ЛСС ПГ к ЛСС целых клеок.Микроорганизмы вида Я. ацгецз харакеризуются показателем ЛСС ПГ к ЛСС кле ок в пределах 4,61-5,50, что существенно тличает их от стафилококков других видов.Из полученных данных следует, что редлагаемый способ позволяет точно диференцировать 3. ацгецз, характеризую ийся показателем ЛСС ПГ к ЛСС клеток от ,61 до 5,5 от, всех других видов стафилококов, в том числе имеющих со 5. ацгецз сходый аминокислотный состав пептидных остиков (которые определяют в известном 30 пособе). При этом показатели соотношеия ЛСС ПГк ЛСС клеток стафилококков других видов колеблются в пределах 0,36- 1,93, и даже у наиболее близких к Я, ацгецз видов Я. Ьу 1 сцз и Я, Ьу 1 сцз зцЬзр. сЬгощоцепез достигает лишь величины 1,50-1,93.Использование способа обеспечивает высокую точность дифференциации, которая достигается методически просто, не требует дорогостоящего оборудования, и проведения сложных исследований, связан-. ных с определением аминокислотного состава ПГ,. Формула изобретенияСпособ дифференциации ЯтарЬу 1 ососсцз ацгецз от других видов стафилококков путем выращивания исследуемой культуры стафилококка на питательной среде с последующим выделением из полученной биомассы пептидогликона и определением его свойств, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и упрощения способа, у выделенного пептидогли кона определяют лизоцимсвязывающую способность, дополнительно готовят суспензию культуры с концентрацией 2 10 микробных клеток/мл и определяют ее лизоцимсвязывающую способность и при значении отношения лизоцимсвяэывающей способности 10 мкг/мл пептидогликана к лизоцимсвязывающей способности клеток 4,61-5,5 культуру дифференцируат как Варйуососсцз ацгецз.