Способ определения шигелл zonne в молоке

ОП ИСАНИВ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(51)М. КЛ. С 12 9 1/04 с присоединением заявки М Гееумввтюаввй ешвтвт ИЮ ю юшш 1364 фвиюй в еткуитнйОпубликовано 30 01.83, Бюллетень,ят 4 Дата опубликования описания 30.01,83 72) Автори изобретения А.М, Минеев и Н.Н. Расстегаева 1) Заявнтел Горьковский медицинский институт им. С ова СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ШИГЕЛЛ ЕОМНЕ 8 МОЛОКЕ Цель изобретения - повышениечувствительности способа,Указанная цель достигается тем,что согласно способу определения шигелп 2 оппе в молоке путем посева исследуемого материала в среду обогащения, инкубирования посевов с последующим пересевом на дифференциально.диагностические среди и идентификации выделенных микроорганизмов, моло.ко предварительНо сбраживают с помощью сичужного фермента, отделяютсыворотку, разводят ее в 5- 10 разфизиологическим раствором, разведенную сыворотку вводят в количествеО, 1-0,2 мл в аллантоисную полостькуриного эмбриона, используемого вкачестве среди обогащения, и инкуби"рование осуществляют при 40-42 С вотечение 12-13 ч.: Изобретение относится к микробиологии и .может бить использовано для . определения дизентерийного возбудителя " шигелл Еоппе .в молоке.Известен способ определения шигелл лойпе в молоке путем посева исследуемого материала в. среду Кесслера с последующими пересевом на плотние диф" ференциальние среды Зндо или. Левина и исследованием вирасших колонийЕ 1 3.Одйако известный способ обладает низкой чувствительностью.Известен также способ определения шигелл 2 оппе в молоке путем посева .исследуемого материала в среду обо" гащения инкубированияпосевов с по,следующим пересевом на дифференциально-диагностические среды и иденти. фикации выделенных микроорганиз" мов С 23гоОднако известный способ обладаетнизкой чувствительностью и позволяет обнаружить шигелли 2 оппе в пробах молока лишь при наличии более 1000 2икробних клеток в 1 мл молока, прием процент висеваемости возбудителяевелик и составляет всего 28.2571 13 гидкость засевают на дифференциальнодиагностическую среду. Далее проводятидентификацию подозрительных колонийпо биохимическим и серологическимпризнакам. Результаты идентификации:ЛактозаГлюкоза +МочевинаСахароза10 ПодвижностьаеИндолЛивис бактериофагом +Реакция агглюти 1 нации +ККП +С помощью предлагаемого способав молоке обнаружены возбудители дизентерии-шигеллы 2 оппе. Известными 20 же способами выявить возбудителя неудается.Предлагаемый способ является высоко чувствительным: минимально определяемая доза заражения молока 10 микробных клеток в 1 мл, т.е. в100 раз меньше, чем в известном способе (1000 микробных клеток в мф).Кроме того, процент высева шигелл измолока при применении предлагаемого зо способа на 65-954 выше (в зависимостиот дозы заражения) (см. таблицу).Результаты определения шигелл Еоп" н пе в пробах искусственно зараженногомолока с помощью предлагаемого и из вестного способов, приведены в таблице.Количество положительных результатов, Ф, в способеПредлагаемый Доза заражениямолока, микробныхклеток в 1 мл Известный 95.58 28 100 100 00010 000 100 100 1 000 0 95,95 б 0 100 50 10 3 99Предлагаемый способ осуществляет-,ся следующим образом,Молоко, в,котором определяют шигеллы Еоппе, сбраживают. Затем отделяют сыворотку и разводят ее в5" 1 О раз физиологическим раствором.Подготовленную таким образом сыворотку вводят в аллонтоисную полость9-10 дневного куриного эмбриона припомощи шприца. Эмбрион инкубируютпри ЬОфС в течение 12-13 ч. 3".тем отсасывают аллантоисную жидкостьпастеровской пипеткой и засевают надифференциально-диагностические среды, Далее шигеллы идентифицируютпутем постановки реакции агглютинации с адсорбированной агглютинирующей сывороткой к шигеллам Еоппе, атакже по биохимическим признакам.П р и м е р. Исследуют молоко насодержание возбудителя дизентерии.С помощью известного способа показано, что шигелл Еоппе в молоке нет.Для уточнения проведено дополнительное исследование молока предлагаемымспособом, Для этого к 5 мл молокадобавляют 0,1 мл 1-ного сычужногофермента и термостатируют при 37 Св течение 20 мин. Затем отделяют сы"воротку, разводят ее стерильным физиологическим раствором в 10 раз ивводят шприцем в аллонтоисную полость9 дневного куриного эмбриона. Эмбриоинкубируют 12 ч при 1 42 С, после чеого вскрывают и отсасывают аллонтоисную жидкость пастеровской пипеткой. При использовании предлагаемого способа значительно облегчается иден-тификация атиПичных штаммов шигелл 2 оппе при постановке реакций агглютинации. Предлагаемый способ может широко использоваться в практических лабораториях санэпидемстанций для обнаружения зараженного молока дизентерийным возбудителем при малых егоТираж 521 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Иосква, И, Раушская наб д. 4/5 Заказ 371/31 юФилиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,5 992571.концентрациях. Это поможет своевре- ротку, разводят ее в 5-10 раз физиоменно выявить очаг заражения и пред- логическим раствором, разведенную . отвратить дальнейшее распростране- сыворотку вводят в количестве 0,1" ние инфекции.0,2 мл в аллантоисную полость курино-в го эмбриона, используемого в качествесреды обогащения, и инкубированиеформула изобретения осуществляют при 40-422 С в течение12-13 ч.Способ определения шигелл 1 оппевмолоке путем посева исследуемого 11 Источники информации, материала в среду обогащения, инку". принятые во внимание при экспертизе бирования посевов с йоследующими пе. Справочник по.микробиологичес" ресевом на дифференциально-диагности- ким и вирусологическим методам иссле" ческие среды и идентификации выделен- дования. Под ред. И.Б. Биргера. И., ных микроорганизмов, о т л и ч а ю - 4 "Иедицина", 1973, с. 416-418. щ и й с я тем, что, с целью повыше- . 2. Сидоренко Г.И, Иетоды санитарнония чувствительности способа,молоко микробиологического исследования предварительно сбраживают с помощью . объектов окружающей среды. И., "Иесычужного фермента, отделяют сыво- дицина", 1978, с, 179-180,