Способ получения среды для выделения и видовой идентификации стафилококков

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК й 1/02 льск унифииол,огивания, ических ических ние рост офилиза хранени ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ. (56) Приказ МЗ СССР от 22.04.85 "Об кации микробиологических (бактер ческих) методов. исследо применяемых в клинико-диагност лабораториях лечебно-профилакт учреждений".(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ВИДОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ СТАФИЛОКОККОВ(57) Изобретение относится к области медицины, а именно медицинской микробиолоИзобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии и может быть использовано для выделения стафилококков и видовой идентификации их по лецитинаэной активности и пигментообраэованию.Известен способ приготовления желточно-молочно-солевого агара для выделения и идентификации стафилококков, включающий смешивание питательного агара, содержащего ферментативный гидролизат кормовых дрожжей и хлорид натрия с молочно-желточной смесью по прописи.Целью изобретения является улучшеовых свойств среды и процесса лиции, а также увеличение срокая целевого продукта,Ы 1791448 А 1 2гии, и может быть использовано для выделения стафилококков и видовой идентификации их по лецитиназной активности и пигментообразованию. Целью изобретения является улучшение ростовых свойств среды и процесса лиофилизации, а также увеличение срока хранения целевого продукта, Она достигается тем, что порошковый агар- агар смешивают с хлоридом натрия, желтком и молоком, а затем добавляют мясо-пептонный бульон, смесь гомогенизируют при комнатной температуре, замораживают до температуры от 40 - 50 С в охлажденном спирте и лиофилиэируют в течение 16-18 ч при температуре продукта не выше 35 С, причем в начале сушки создают давление 0,026 - 0,013 кПа, а в конце сушки - 0,003 к Па, 1 табл. Указанная цель достигается тем, что порошковый агар-агар смешивают с хлоридом о натрия, желтком и молоком, а затем добавляют мясо-пептонный бульон, смесь гомогенизируют при комнатной температуре, эамораживают до температуры - 40, -50 С в (ф охлажденном спирте и лиофилизируют в течение 16 - 18 ч при температуре продукта не выше 35 С, причем в начале сушки поддерживают давление 0,026 - 0,013 кПа, а в конце сушки - 0,003 кПа.П р и м е р. Для получения среды используют следующие компоненты (в вес,): порошковый агар-агар - 1,8-2,0; натрия хлорид - 7,5-10; желток яичный - 1,2-1,5; молоко коровье стерильное - 18,0-20,0, мясо-пептонный бульон - остальное.20 герметически укупоривают.Для использования среды в бутылкидобавляют небольшое количество кипящей стерильной дистиллированной воды, встряхивают, чтобы смыть сухую массу со стенок,доводят ее уровень до 100 мл, Восстановленную среду разливают в стерильные чашки Петри и после застывания используют для посевов по общепринятой методике.Исследования охватывают изучение 90 30 35 культур стафилококков, выделенных от больных туберкулезом,Для оценки биологической активности восстановленной сухой и нативной сред, изготовленных, соответственно по заявленному способу и по прототипу, учитывали процентное количество культур, которые проявляли лецитиназную активность и обнаружили пигмент спустя 24 и 48 ч после посева. 40 Показатели интенсивности лецитинаэной активности и пигментообраэования при проверке через 24 и 48 ч после посева патологического материала на нативную и сухую восстановленную питательную среды, изготовленные сравниваемыми способами, представлены в,таблице,Результаты сравнительного изучения лецитиназной активности и пигментообразования стафилококков на нативной и сухой 50 восстановленной питательных средах, изготовлейных, соответственно, по прототипу изаявленному способу,Результаты проверки лецитиназной активности через 24 ч после посева показывают преимущества сухой восстановленной среды по заявленному способу.Полученные через 24 ч различия по нигментообразованию статически также выяв- ляют преимущество сухой питательной Все компоненты в указанной последовательности помещают в стерильную емкость, тщательно растирают до получения однородной массы, после чего при постоянном перемешивании добавляют мясо-пеп тонный бульон, Смесь разливают по 100 мл в стерильные бутылки емкостью 250 мл, закрывают резиновыми пробками и погружают в ванну с охлаждением до -40, -50 С на 30-40 мин. При вращении бутылок смесь 10 замораживают на их стенках. Затем бутыл-, ки открывают, помещают в сублимационный аппарат и замороженную смесь сушат в течение 16 - 18 ч, при температуре продукта не выше 35 С/ до 3 ч. или при -35-17 С; 15 4-11 ч. при -15 - 0 С; 12 - 18 ч, при 30 - 35 С/, причем. в начале сушки поддерживают давление 0,026-0,013 кПа, в конце сушки - 0,003 кПа. Бутылки с высушенной средой среды, изготовленной по заявляемому способу. Эта особенность более ярко выражена у культур, образующих золотисто-желтый пигмент,Высокая биологическая активность сред по заявленному способу подтверждается и при сопоставлении результатов испытания обеих сред после 48 ч после посева патологического материала,Через 24 ч и 48 ч после посева среда по заявленному способу обладала более высокими биологическими качествами выделения и идентификации стафилококков по лецитиназной активности и пигментообраэованию.Весьма существенно, что на сухой восстановленной среде 73,3 оь культур стафилококков по пигменту и лецитинаэной активности уже через 24 ч могли быть отнесены к патогенным штаммам, Причем патогенность их подтверждена в реакции плазмокоагуляции, На нативной среде таких штаммов было 50 по истечении 24 ч после посева. Различие статистически достоверно. Этот факт подтверждает более высокие биологические качества сухой среды по предлагаемому способу, позволяющие за короткий период получить более высокий диагностический результат.Анализ скорости прироста количества патогенных культур в последующие 24 ч на нативной среде показывает, что их максимальное число 70,0. достигается только к 48 ч, в то время, как на сухой, восстановленной среде максимум (73,306) патогенных культур обнаруживается уже к 24 ч после посева и лишь незначительно (4 О) возрастает к 48 ч. Фактически полноценная диагностика патогенности стафилококков обеспечивается на сухой восстановленной среде в 24 ч инкубации в термостате, т.е. в срок в 2 раза меньше, нежели на нативной среде.Вторично биологическая активность среды по заявленному способу была проконтролирована после 12 месяцев хранения, которые показали, что питательная среда, изготовленная по заявленному способу и восстановленная после 12 месяцев хранения, при видимой идентификации стафилококков по показателям лицетиназной активности и пигментобразованию превосходит нативную среду по прототипу. Способ приготовления среды позволяет получить сухую питательную среду, стандартизировать ее и обеспечить выделение и видовую идентификацию стафилококков по лецитиназной активности и пигментообразованию,1791448 Сост Техр ель Ю. КононенкоМ,Моргентал Корректор С Патруше еда. Кулако аказ 134 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 венно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина Произв Формула изобретения Способ получения среды для выделения и видовой идентификации стафилококков, включающий приготовление желточно-молочно-солевой питательной смеси на уплотняющей агаровой основе, о т л и ч а ю. щ и й с я тем, что, с целью улучшения ростовых свойств среды и процесса лиофилизации, а также увеличения срока хранения целевого продукта, в качестве уплотняющей основы используют порошковый агар-агар, смешивают его с хлоридом натрия, желтком и молоком, смесь гомогенизируют при комнатной температуре с мясо-пептонным бульоном, замораживают до 5 температуры -40-50 С в охлажденномспирте и лиофилизируют в течение 16 - 18 ч, при температуре продукта на выше 35 С, причем в начале сушки поддерживают давление 0,026 - 0,013 кПа, а в конце сушки - 10 0003 кПа.