Способ определения глюкозы в растворах

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик и 992570ав делам ктабраталий н открытийОпубликовано 30.01.83. Бюллетень М тт Дата опубликования описания 30,01.83 ВЯтр Й,4 т-;.;,ту "Хтот;1"(72) Авторы изобретения Н.С.Осин и В.Г.Петухов т,., гт д г,ЫЯ, "Государственный научно-исследовательский ийвттаац ."стандартизации и контроля медицинских биологическихпрепаратов им. Л.А.Тарасевича(5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫВ РАСТВОРАХ 1Изобретение относится к биохимии и микробиологии, в частности к способам определения глюкозы в ра. створах, биологических жидкостях и суспенэиях микроорганизмов,Известен способ определения глюкозы в растворах, включающий использование глюкооксидаэы. По концентра" ции кислорода косвенно судят о содержании глюкозы в исследуемой пробе, так как в ферментативном окисле" нии глюкозы с помощью глюкооксидазы участвует кислородК недостаткам способа относится использование дорогостоящих ферментов.Наиболее близким к предлагаемому по технической сущностии достигаемому эффекту является способ определения глюкозы в растворах путем вне-. уо сения в раствор индикаторных микроорганизмов и регистрации изменения физических свойств среды с последующим расчетом, Согласно известному 2способу клетки Рзецтопюпаз Г 1 оогезсепз иммобилизуют на коллагеновой мембране, мембрану помещают на платиновый электрод, а сам электрод вносят в исследуемый образец жидкости и по показанию тока в цепи попярографического датчика определяют уровень глюкозы в растворе Г 2 3.Недостатком известного способа является его сложность, Так, в каждом случае перед анализом необходимо осуществлять аэрацию анализируемой пробы и поддерживать концентрацию растворенного в среде кислорода на постоянном уровне. Кроме того, длительна и. сложна процедура изготовления коллагеновой пленки с иммобилизованными микроорганизмами.. Цель изобретения - упрощение способа.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения глюкозы в растворах путем внесения в раствор индикаторных микроорганизмов5 99257 колибактерин, который содержит около 30 млрд. кл, Е. со 1 М.После установления в суспензии анаэробных условий (приблизительно через 2-3 мин после растворения таблетки препарата) можно приступать к анализу глюкозы в пробах различных образцов, Для этого опускают электроды рН-метра в суспензию, измеряют уровень рН среды и автоматически О записывают сигнал рН среды на ленте самописца. Полная шкала самописца соответствует 0,1 единицы рН, Затем вносят с помощью микропипетки 0,1 мл водного раствора глюкозы с концентра з цией 10 Ъ и регистрируют изменение рН среды на эту добавку (Фиг, 2).На фиг, 2 представлены графические данные изменения рН при добавлении к бактериальной суспензии клеток Е. со 11 Мразличных по составу проб жидкости, содержащих стандартную концентрацию глюкозы 1 ГЪ, Эти данные в дальнейшем используют для расчета количества глюкозы в ис з следуемых образцах (стрелкой обозначено внесение 0,1 мл субстрата в бактериальную суспензию и начало рез-А.кого эакйсления среды ). Условия измерения: концентрация кле- Ю ток 30 млрд, кл,/мл; объем бактериальной суспензии 8 мл; состав среды 5 мМ раствор фосфатного буфера, температура 20 С ), В данном примере 0,1 мл раствора с 10 М глюкозы вызывает изменение в 0,03 единицы рН Количество глюкозы в пробе (оп" ределенное) по данному способу,м/л Время анализа, мин. Количество глюкозы в пробе(заданное), м/л 0)97.10-2 5,4.10 З0 96 10-3 5 10-310-3 6,2 1,3 5.10-4 0,7 1,310-4 глюкозу как в водном растворе бездругих сахаров, так и в их присутфф ствии.Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным является более простым, он обладает выКак видно из таблицы, предлагаемый способ позволяет анализировать до 1 К 4 М глюкозы в объеме проб порядка 0,1 мл, при .этом обеспечивается точность около 103 до концентраций 5 1 К 4 М. Способ позволяет определять 0 бне зависимо от субстрата. Затем вносят исследуемую пробу в объеме 0,1 мл, Ответ на добавку составляет 0,06 единицы рН, Следовательно, количество глюкозы в анализируемой пробе составит (0,06:0,03)10 ЗМ=2 10 ЗМ (в расчете на 0,1 мл пробы).П р и м е р 2. В ту же ячейку вносят 0,1 мл разбавленного в 10 раз молока с растворенной глюкозой. В этом случае на ленте регистрируют сильное закисление среды, которое затем сменяется более слабым, В этом случае количество глюкозы в пробе рассчитывается из количества выделившейся кислоты в быстрой стадии закисления за вычетом количества кислоты, приходящимся на непрерывно идущую медленную стадию закисления. Так, в быструю стадию эакисления выделяется 0,095 рН, причем вклад медленной стадии составляет 0,015 рН. Следовательно, количество глюкозы в пробе составит0,095-0 015)/0,03 1 О ЗМ=2,66- 1 ОЪ П р и м е р 3. В ту же ячейку вносят последовательно образцы проб объемом 0,1 мл, представляющие собой растворы глюкозы различной-концентрации, Каждая последующая проба вносится после окончания закисления на добавку предыдущей пробы.Точность определения глюкозы в растворах предлагаемым способом приведена в таблице.992570 004 Составитель С.КаспаровТехреду С. Мигунова Корректор М.Коста Редактор 10.КовВ Ю аз 371/3 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,1 ТиражВНИИПИ Госудпо делам 113035, Москва ственного зобретений Ж, Раув Подписноекомитета СССРи открытийкая наб., д. Ы 5