Способ получения 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфатов

(А) В (В) НЕ продуктаРеакции 35 65 где 6 - галоид, подвергаютвзаимодействию с аммиаком вспиртбвой среде с последующим выде.лением целевого продукта в виде кислоты или ее соли.5П р и м е р 1. Получение 9-(2"-оксиэтоксиметил) гуанинфосфата,0,03 мл хлорокиси фосфора добавля)0 т кперемешиваемой суспензии 20 мг 2-хлор(2-оксизтоксиметил)гипоксантина в 100,3 мл триэтилфосфата при -8 С. За"отем в течение 30 мии температуре даютподняться до 0 С. Далев уеакционную 1осмесь перемешивают при 0 С в течение40 мин и при 5 фС в течение 50 мин,Реакционную смесь выливают. иа лед иРН смеси доводят до 7 с помощью 2 н.раствора гидроокиси калия, Полученныйраствор дважды экстрагируют хлороформом (2 х 2 мл). рН водной Фазы доводятдо 8-8,5 с помощью 2 н. раствора гидроокиси и добавляют 105 мг ацетатабария. Образовавшийся осадок фосфатабария отфильтровывают. Фильтр обраба- .тывают большим избытком этанола, при 25этом выпадает сырой 2-хлор(2-оксиэтоксиметил)-гипоксантинбарийфосфат,Твердое вещество отфильтровывают иеуспендируют в этаноле, Этанольнуюсуспензию нагревают на паровой банев течение нескольких минут, охлаждают и фильтруют, Полученный осадок промывают безводным эфиром и сушат. Получают 26 мг 2-хлор(2-оксиэтоксиметил) гипоксантинбарийфосфата. К перемешиваемой суспензии 7 мг 2-хлор(2-оксиэтохсиметил) гипоксантинбарийфосфата в 0,5 мл воды добавляют 3,96 мг сульфата аммония. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин, затем охлаждают на ледяной бане. Выпавший осадок сульфата бария отделяют Фильтрованием и промывают 1 мл воды и 10 мл метанола. Соединенные фильтрат и промыв.45 ные воды выпаривают при пониженном давлении, Образовавшийся при этом остаток растворяют в 3 мл метанола. Метанольный раствор переносят в Футеро" ванную теФлоном бомбу ив нержавеющей стали. В бомбу также загружают 8 мл метанола, насыщенного газообразным аммиаком при температуре ледяной бани. Закрытую бомбу помещают на 4 ч в печь при 122 С, затем ее охлаждают и0открывают. Растворитель отгоняют до минимального объема. Оставшуюся реакционную смесь каплями наносят на целлюлозные листы для тонкослойной хроматографии 9:тмен Хроматограм, которые затем проявляют в смеси пропа- бО нолг вода (70 г 30 по объему). Полосы при В 0,16 и 0,34 вырезают, суспендируют в 0,6 мл буферного раствора Трис при РН 8 и целлюлозу удаляют ,фильтрованием. В этих полосах содержится 9-(2- "оксиэтоксиметнл) гуанинфосфат и 2- -хлор-(2-оксиэтоксиметнл гипоксантинфосфат, как зто показано энзимньи дефосфорилированием щелочной фосфата" зой до 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанина и 2-хлор-(2-оксиэтоксиметнл) гипоксантина соответственно,К фильтрату добавляют 2 мкл щелочной фосфатазы из Е, со 21 и смесь нагревают при 32 С в течение 2 ч, Затем ее исследуют тонкослойной хроматограФией на целлюлозных листах Истман Хроматограм в трех смесях растворителейг1) пропанолгвода (70 г 30 по объему)2) вода3) пропанол:концентрированный раствор гидроокиси аммониягвода (60 г30 г 10 по объему).Для каждой смеси имеется по два пятна, соответствующие 9-(2-оксиэтоксиметил)-гуанинфосфату (А) и 2-хлор 9"(2-оксиэтоксиметил) гипоксантину(В) .Смесь раст- ворителей 1 0,51 0,04 051 и 0,652 0,68 0,97 0,67 и 0,973 0,51 0,71 0,51 и 0,71Целевой продукт начинает разлагаться при 210 С.Злементарный анализ,Найдено, г С 31,23) Н 3,851И 23,00) Р 10,09,Вычислено, г С 31,49 г Н 3.,69 гН 22,95; Р 10,15.П р и м е р 2Получение 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинаммонийфосфата.0,28 г 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинфосфата растворяют в 30 мл воды ирН раствора доводят до 6 с помощьюб н. водного раствора соляной кислоты. Продукт сорбируют 14 мл уплотнен- .ного угля (Фишер 5-690 В, 50-200 меш,промытый кислотой и дезактивированныйтолуолом), Уголь хорошо промывают водой и элюйруют 70 мл 50-ного водногоэтанола,содержащего 2 концентрированного раствора гидроокиси аммония.Растворитель отгоняют при пониженном давлении и получают 0,048 г 9-(2-оксиэтоксиметил) гуанинаммонийфосфата.Вы"ход 15.Н= 0,30 на целлюлозе Истменав смеси пропанол:вода (70 г 30 по объему). Продукт начинает разлагаться при210 С.П р и м е р 3. Таблетки.9-(2-Оксиэтоксиметил)гуаниннатрийфосфат, мг 100Лактоза, мг 200Крахмал, мг 50Поливинилпирролидон, мг 5Стеарат магния, мг 4Общий вес 359(аналитический), г 5Тимеросал, ггДстиллированнаявода, мл. До 100рН 5,5-7,5П р и м е р 5. Раствор для нньек-ций.Натрийфосфат 9-(2-окси-этоксиметил) гуаниннатрийфосфат, г 0,775Стерильный, не содержащий пирогенов,фосфатный буфер с рН 7,мл До 25П р и м е р 6. Получение 9-(2;оксиэтоксиметил) гуаниндинатрийфосФата. 2654 ил хлорокиси Фосфора добавляютв течение 3 ч к переиешиваемой, охлажденной до (-30) - (-.20)еС, смеси 25 г9-(2-оксиэтоксиметил) гуанина н 250 мл;триэтилфосфата. Температуре реакционной смеси дают подняться до 0 С в теочение 45 мин и смесь держат при этойтемпературе еще 45 мин, затем рН.смеси проводят до 1 с помощьв 2 н,водного раствора гидроокиси натрия. 39Полученный раствор экстрагируют одинраэ хлороФормом и один раз эфиром.рН оставшегося водного раствора доводят до 6,8 с помощьв 2 н. водного1раствора натрия, затем до 7,3 с помощьв 10 н,водного раствора гндрооки- иси натрия и получавт окончательный тобъем смеси - 2,5 л. Нейтрализован- зный раствор вносят в колонку с 2000 г сДовекс 1 х 8, уравновешенный 50 мольКНСОЭ. Элюирование ведут при линей"иои градиенте 30 л 50- 500 моль КНСОЗс последующей промывкой 30 л 500 моль3Фракции, содержащие продукт, объединяют, большую часть КНСО удаляют 45добавлением Довекс 50-Н+ и удалениемСО 2 в вакууме. Объем уменьшают до2 л в вакууме и продукт высаживаютпри 4 фС добавлением 10 л ацетона, Вьв.сушенный осадок в количестве 55 г вно-Ясят в колонку Био-Гель Р10 х 110 сии элвирувт водой. Получают 22 г твердого вещества. Вещество перекристаллизовывавт при 4 С в виде кислой со"ли из раствора с рН 3, Большую 5часть вещества получают из маточногораствора путем кристаллизации из20-ного этанола при рН 3. Кислуюсоль растворяют в минимальном объемеводы с рН - 8,5 (за счет добавлениягидроокиси натрия) н осаждают 2 объег 60мами этанола при 4 С. Этот осадок растворявт в 100 ил воды, осаждают 9 объе; ами этанола при 4 С и получают 15,1 дигидрата дннатриевой соли 9-(2-оксиэто;-. ксиметнл)гуанинфосфата. Выход 35.Чистоту продукта подтверждают элементньм анализом, жидкостной хроматографией под давлением и ультрафиолетовьи спектром.Элементный анализ.Найдено,г С 25,20 г Н 3,63 г.И 18,10 у Р 7,89.СэНМ 04 Р2 иа -2 Н)Вычислено,г С 24,949 г Н 3,66 гЯ 18,19 г Р 8,04.уф-спектр.Растворитель 3 макс Е Эщ ВЬ 0,9 0,0010,1 Н НСУ 254 12970 225 272 рН 7 209 14060 219 266 0,1 М МаОН 255-264 11760 228 По жидкостной хроматографии под давлением чистота 99. Отношение основание г Фосфат - 1,00:1,01. Размягчение продукта наблюдается при 175 Со с постепенныи разложением и потемнее нием при температуре вьше 250 С.формула изобретенияСпособ получения 9-(2-оксиэтоксиметил)гуанинфосфатов общей Форкуюаа 1ф ОИ Е айагеИэй И 40 ЮН 2 СЕ 20 Р,ОЮде Я и 7; - одинаковые ияв разные,представляют собой водород или ка"ион натрия, калия, лития или агаоня,а к л ю ч а в щ и й с я в том, чтооединение общей формулы ЙгОИ г э ОН,и (-Юф.ЮМОРОН .где С - галонд, подвергают вза-имодействию с амьегаком в спиртовой среде с последующим выделением целевого продукта в виде кислоты и ее соли.Нсточники нформации,принятые во внимание при экспертизе1. Патент Великобритании9 1523865, кл. С 2-С, опублик. 1978.2: М 1 сЬейвоп А.М., ТскИ А.Н,МопсншсйеогЫев Йег 1 чей йгов Асгепоз 1 пе, УиапОз 1 пе, СуСЫ 1 пе аЫ ОгЫЮ, Сажею, Бос 1949, 2476-2486.3. Патент,Бельгии В 756704,кл. С 07 й. опублик. 1971.4. Вейганд-Хильгетаг Методы эксперимента в органической химии. М.,Химияф; 1968, с. 414.Тираж 385 Подписно 1 пе. е ВНИИПИ Заказ 1