Способ получения смеси аминокислот и низших пептидов

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) Заявлено 12.02.81(21) 3247623/28-13 131)М.КП.з сприсоединением заявки Йо -А 23 Л 1/18 Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытийДата опубликования описания 15,09,82 А.Н.Клюквин, Д.И.Островский, Л.В. Дмитренк Н.Ф.Езерская, А.Е.Гутманис, А.Х.Зицманис и(72) Авторы изобретения Попов авдина учйо-производственное гидролизное объе нение 1) Заявител(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЩСИ АИИНОКИСЛИ НИЗШИХ ПЕПТИДОВ Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам получения сме-, си аминокислот и низших пептидов. 5Известен способ получения смеси аминокислот и низших пептидов, предусматривающий кипячение дрожжей в кислом растворе в присутствии катионита Кус последующей десорбцией аминокислот 13.Недостатком этого способа является низкое качество целевого продукта.Наиболее близким техническим решением к предлагаемому по технической сущности н достигаемому эффекту является способ получения смеси аминокислот и низших пептидов, предусматривающий автолиз дрожжей при нагревании в присутствии плаэмолиэующего и стерилиэующего агента с последующей очисткой автолизата путем пропускания его через анионообменную смолу. Согласно известному способу очистку ,автолиэа проводят путем пропускання автблизата через слабоосновной макропористый анионит Иар и катионообменную смолу КУв водородной форме, элюцией аминокислот и низших пептидов со смолы Куаммиаком, упариванием элюата н сушкой целевого про" дукта 23.Однако процесс выделения и очистки целевого продукта является многоступенчатык, что приводит к потерям продукта в процессе выделения на каждой стадии; большая длительность процесса .выделения и очистки целевого продукта в целом и в особенности условия проведения фильтрации автолизата через смолу ИАр при рН 5-6 приводит к неизбежному включению в технологические стадии неоднократных стерилизаций автолнзата из-за возможности бактериального инфицирования растворов, содержащих биологически активные вещества; кроме того, продукт содержит в качестве примеси нуклеиновые кислоты до 1, тогда как содержание их не должно превышать 0,5, продукт загрязнен красящими веществами.Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта, атакже упрощение и удешевление процесса.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения смеси аминокислот и низших пептидов, предусматривающему автолнэдрожжей при этой схеме выделения целевого продукта можно получить также зргостерин и смесь нуклеиновых кислот,Полученная смесь аминокислот и низших пептидов содержит в своем составе все незаменимые аминокислоты, а соотношение незаменимых аминокислот (Н) к общему азоту (О) соответствует требованиям, предъявляемым к высокопитательным смесям.Определение аминокислотного состава проводят с использованием аминоанализатора фирмы ЛКВ с точностью по 3. В таблице приводится сравнительная характеристика смеси аминокислот и низших пептидов, полученной известным и предлагаемым способами. Выход целевогопродукта на 1 кгпрессованныхдрожжей, г 6 Содержание низших пептидов,% 8б Отсутствуют тсутстуют 8,2,4 6,1 2,5 0,8 3 2,5 анныхиз ниэг. Из 0,8 дрожжей при нагревании в присутствии плаэмолизующего и стерилизующего агента с последующей очисткойавтолиэата путем пропускания егочерез анионообменную смолу, передочисткой автолизат обрабатывают щелочным агентом до РН 10-13, фильтруют,а из анионообменных смол используютвысокоосновной анионит АРА в ОН-форме.Сущность способа заключается втом, что обработка автолизата щелочным агентом приводит к быстройфлокуляции высокомолекулярных фрагментов белков, оставшихся после цеятрифугирования мелкодисперсныхклеточных остатков, Кроме того, повышение рН до величины 10-13 позволяет исключить стадию стерилизации,так как в этих условиях вероятностьбактериального заражения мала.20Пропускание щелочного автолизатачерез высокоосновный анионит типа АРА ,. Характеристикв ОН-Форме позволяет отделитьнуклеотиды, олигонуклеотиды, не подвергшиеся разрушению при автолизе пиг 25ментирующие вещества.Ионообменная очистка осуществляется в одну стадию. При этом аминокислоты и низшие пептиды не сорбируются анионитам.П р и м е р. В промытый и простерилизованный аппарат заливают 250 млдистиллированной воды, нагревают до50 С, загружают при перемешивании.1 кг свежих прессованных дрожжей,добавляют 1,2 мл толуола. Аппарат 35 Содержание нугерметически закрывают, нагревают .клеиновых кидо 48 С и при непрерывном перемешивании выдерживают при этой температуре 20 ч. Зольность,ВАвтолиэат,. содержащий 58 г/л аминокислот, 20 г/л низших пептидов, Тяжелые ме 12 г/л нуклеиновых кислот, клеточ- таллы, кач.ные остатки 160 г/л и пигментирующиевещества, центрифугируют при 8000 об/минв течение 10 мин. Осадок промывают 45 СодеРжание320 мл воды и снова центрифугируют . незаменимыхпри 8000 об/мин в течение 20 мин, аминокислот,Супернатант и промывные воды объе- г/1 бг общегодиняют и.обрабатывают 25-ным рас- азотатвором аммиака до рН 11,0. Образовавшийся осадок мелкодисперсных кле- Изолейцинточных остатков, высокомолекулярныхФрагментов белков через 10 мин от- Лейцинфильтровывают на бумажном фильтре.Фильтрат пропускают через колон- Лизинку.с высокоосновным анионитом АРА вОН-форме (80 г, д 33 мм, н 350 мм) Фенилаланинсо скоростью 60.мл/ч. Анионит промывают 300 мл аммиачной воды при рН Тирозин11,0, присоединяют их к раствору после прохождения автолизата через 60 Триптофананионит, упаривают под вакуумом ивысушивают. Метиони нНа 1 кг прессов дрожжейвыход аминокислот ших пепти- Цистиндов составляет 68 биомассы 65 цистеин957835 Продолжение таблицы Способ Характеристика известный предлага- емый ТреонинВалин 6,2 5,9 8,2 7,6 Итого незаменимыхаминокислот 59,5 58,1 АланииАргиннн 12,1 10,2 2,5 4,6 Аспарагиноваякислота 6,9 6,8 16,6 5,4 2,5 6,2 8,3 14,0 3,9 2,8 4,9 5,6Заказ 6646/3 Тирах 570 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 3-35, Раушская иаб., д,4/5.еринОтношение Н/О, едОтношение к общему содержанию аминокислот, В Таким образом, предложенный спо-. соб позволяет повысить выход целевого продукта на 13-26 по сравнению с известным, а также сократить расход реактивов и время выделения про дукта за счет резкого снижения в нем концентраций нуклеиновых кислот. формула изобретения 10Способ получения смеси аминокислот и низших пептидов, предусматривающий автолиз дрожжей при нагревании в присутствии плазмолиэующего 15 н стерилизующего агента с последую.- щей очисткой.автолизата путем пропускания его через анионообменнуюсмолу, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения выхода целевого продукта, а также упрощения иудешевления процесса, перед очисткойавтолиэат обрабатывают щелочнымагентом до рН 10-13 и фильтруют,а из аниоиообменных смол используютвысокоосновной анионит АРА в ОН-форф 25ме. Источники информации,принятые во внимание при экспертизеЗО 1. Авторское свидетельство СССР Р 355219, кл. С 12 В 13/06, 1972. 2. Авторское свидетельство СССР 9 602543, кл. С 12 В 13/06, 1978.