Способ получения эпоксиагроклавина-1

)5 за ключ ающируют грибИБФМсодержащейта и Аосфовыделяют этуральной ся в еп 1 с 1 52 на источ а, от оксиа идкос Ьев Я,Ме ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗОБРЕК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(7.1) Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭПОКСИАГРОКЛАВИНАФормулыСН ом, что культиви 11 ыщ сегу 1 оин)1 чп 1питательной среде,ики углерода, азоеляют биомассу ироклавиниз кульи известными метода Е955 б 93 И сизН 0 2 30 б нс 50 Примерования Р.соИБФМ-Г.КультуруИБФМ-Рпках со скошеращивание ос5-7 дней притуру высеива750 мл со 15состава, г/лкислота - 5,КН 2 РО,0,1 л, значени 60 полу- ксиагро- посо- й Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения нового химического соединения, представителю ряда эрголинов - биологически активных соединений, конкретно, эпок5 сиагроклавину (6,8-диметил,9-эпоксиэрголин)1 Наиболее важным источником эрголиновых алкалоидов служат склероцииразличных видов аскомицетов родаС 1 а 1 сера. В последние годы эрголиновые производные были найдены также в грибах родов Аарегя 111 ца, НЬ 3.горца, Реп 1 с 1111 ищ, причем некоторые клавиновые алкалоиды ранее небыли найдены у представителей родаС 1 ачсера Ц,Эта группа соединений обладаетшироким спектром биологическойактивности. Эргоалкалоидь 1 широкоприменяются для получения ценныхФармакологических препаратов. Такзвестно действие эргоалкалоидовне центральную нервную систему 2,на гладкую мускулатуру матки 3ингибирование пролактина 4 .Изобретение касается способа получения. нового, ранее не описанногоэргоалкалоида, содержащего эпоксигруппу,Эпоксиагроклавин представляет итерес с точки зрения его биологичекой активности, как представителькласса аргоалкалоидов, и кроме того,является удобным объектом для получения производных эрголиновых алкалоидов, Биологическая активностьэгоалкалоидов, как правило, определяется наличием или отсутствием заместителей, а также характером этихзаместителей в 8-м и 9-м положениях эрголинового ядра. В связи с этимэпоксиагроклавин, содержащий в качестве реакционного центра эпоксигруппу в положении 8,9 представляетисключительный интерес как исходноесоединение для получения практическилюбых производных, биологическуюактивность которых можно варьировать, меняя характер заместителей,Структура эпоксиагроклавиана установлена с помощью физико-химическихи химических методов.Целью изобретения являетсячение ранее не описанного эпоклавиана микробиологическим сбом. Поставленная цель достиг;ется тем, что в способе получения эпоксиагроклавианаформулы культивируют гриб Реп 1 с 111 цщ согу 1 орЬд 1 цщ ИБФМ-Рна питательной среде, содержащей источники углерода, азота и фосфора, отделяют биомассу и выделяют эпоксиагроклавиниэ культуральной жидкости известными методами.ГРИб Р.согу 1 орп 11 цщ 01 сгсКх ИБФМРхранится в коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР.Морфологические признаки Р.согу 1 орЬ 1 цщ 01 егсКх ИБФМ- -152.Колонии на Чапек-агаре (10 дней, 25 ОС) имеют диаметр 3 см, радиально изрезанные, сначала войлочные, плотные, с развитием конидиальных структур становятся бархатистыми. Зональность выражена. Центральная часть сначала кремовая, с возрастом оливково-коричневых тонов, края более светлые, сначала бирюзового, затем серовато-зеленоватого (голубоватого) оттенка. Эксудат образуется ограниченно, в очень мелких бесцветных каплях, Запах заметный, но неопределенный. Обратная сторона коричневатоили серовато-черного цвета.Конидиеносцы поднимаются от су страта (в маргинальных областях) или отходят как веточки от тесно сплетенных гиф (в других частях колонии) . Длина варьирует от 40 до 200 м, а диаметр около 2 или 3 м, Кисточки изменяются по Форме и размерам от типично бивертициллятных и ассиметричных до моновертициллятных структур. Метулы 12-1 б 2-2,5 м, стеригмы 8- 122 м. Конидиии округлошаровидные 2-2,5 м, гладкостенные, в длинных цепочках. р . Условия культиви у 1 орп 1 цщ 01 егсКх,согу 1 орЬцщ 1)1 егсКх ддерживают в пробирным сусло-агаром, Выществляют в течение 24 сС. Полученную культ в колбы объемом мл среди следующего маннит - 50, янтарнаяМБоц 7 Н О - 0,3, ода дистиллированная рН среды доводят доее еееееЗаказ 3878/1 Тираж 522 ПодписноеВНИИПИ ГосударствеНнОго Комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д. 4/5еще ееФилиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул, Проектная, 4 5,2 концентрированным аммиаком, Куль тивирование проводят на качалке 24 С в течение 9 суток.Выделение и очистка эпоксиагроклавина. 5,5 л культуральной жидкости отфильтровывают под вакуумом. Нативный раствор подщелачивают концентрированным аммиаком до рН 7,5 и экстрагируют хлороформом трижды по 1,7 л. Контроль за полнотой экстракции осуществляют с помощью реактива Ван Урка, Объединенный хлороформенный экстракт высушивают над безводным Н 8.80,упаривают в вакууме, Остаток от упаривания - 645 мг суммарной смеси алкалоидов, выделенных из 15 культуральной жидкости, разделяют методом колоночной хроматографии силикагель Л (5-40 м, ЧССР), вес 250 г, диаметр колонки 30 мл, элюент хлороформ;метанол;конц.аммиак=90: 20 10:0,14 объем Фракций 15-17 мл, Кон. троль за ходом разделения осущест-. вляют методом ТСХ на пластинках Яг 1 цГог Пу 254, обнаружение алкалоидов проводят с помощью реактива 25 Ван Урка, Фракции 33-122, содержа- щие эпоксиагроклавин, объединяют и упаривают в вакууме. Выход эпоксиагроклавина 494 мг, Дальнейшую очистку проводят высаживанием эпоксиагроклавина из хлороформа гексаном,Вещество дает положительную реакцию на эргоалкалоиды с реактивом Ван Урка (Риолетовое окрашивание), является основанием, экстрагируется органическими растворителями при щелочных значениях рН. Оно хооршо растворимо в хлороформе, ацетоне, спиртах, в этилацетате, хуже - в гек" сане, гептане. Плохо растворяется в воде при щелочных значениях рН, легко растворимо при кислых значениях рН, Вещество вступает в реакции, типичные для эпоксисоединений 45 Эпоксиагроклавин представляет собой после очистки из смеси хлороформ/гексан белый аморфный порошок.Ниже приведены его физико-химические характеристики. 50 Хроматографические характеристикиТСХ, ВгиГог Оу 254;метанол:хлороформ=1,4, 10,4, диэтиламин:хлороформ=1,9, В 0,61; метанол:хлоро-.Форм:конц,аммиак=20:80:0,2, В 0,61,окись алюминия (1( акт) этанбл;хлороформ=4,96, И 0,48.Масс-спектр, ю /в Ъ ;154(81),168(52),182(42), 196 (27), 197 35211(70), 239(44), 254(100,М),Брутто-Формула С,Н ИО определена масс-спектрометрйчески (Найдено 254,141891 рассчитано 254,14191).Уф-спектр Я макс, нм (3 Е);: этанол 226(4,60), 276(3,76), 282(3,79),292(3,72), 0,01 ННС 1 в спирте - 274(7 Н, 4 а, -р 4(3, 5-, 7 о.-,73,9-,10-Н),ИК-спектр, ( 1 СМ );3420, 2965-2800, 1625, 1610, 1475, 1450,1350.Данное вещество представляет практический интерес как исходное соединение для получения ряда производных по эпоксигруппе, биологическую активность которых можно варьировать, меняя характер заметистелейв кольце 3 эрголина,При нагревании эпоксиагроклавина 1 в водном растворе соляной кислоты найдены продукты присоединенияНС 1 по эпоксигруппе 8-С 1,9-ОН-агроклавини 8 - ОН, 9 - С 3- агроклавин, При нагревании растворовэпоксиагроклавинав этиловом спирте в присутствии катализатора происходит образование продуКтов присоединения этилового спирта по эпоксигруппе, Образование гликоля,9 диоксиагроклавина водным растворомН 250,4, При взаимодействии эпоксиагроклавинас уксусной кислотойобразуются оксиацетаты и диацетатагроклавина. Все перечисленные соединения получены с хорошими выходами