Способ определения наличия афлотоксинов в и g в продуктах растительного сырья

а 928226 Союз СоветскикСоцианистичесиикРеспублик Оп ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ.с присоединением заявки Рй(5). л С 01 8 33/10 Гооулерстеееиьй комитет СССР ао делам изебретееий и открытий(53) УДК 614. ,3 (088.8) Дата опубликования описания 18. 05. 82(5 Й) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ АФЛОТОКСИНОВ В И С В ПРОДУКТАХ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ Изобретение относится к анализу микроколичеств органических соединений и может быть использовано для определения токсичных и канцерогенных веществ в объектах окружающей среды, в частности в пищевых продуктах и кормах для сельскохозяйственных животных.Установлено, что в различных продуктах зерновых, бобовых, масличных и др. могут содержаться продуцируемые плесневыми грибами афлотоксины, обладающие выраженной канцерогенной активностью и высокой токсичностью. Установлено, что в пищевых продуктах допустима предельная концентрация афлотоксинов в пищевых продуктах.Наиболее близким к .предлагаемому по решаемой задаче и достигаемому. эффекту является способ определения наличия афлотоксинов В и С в продуктах растительного сырья, включающий проведение хромотографии экстракта из продуктов растительного 2сырья на хроматографической пластин"ке, подтверждение наличия афлотоксинов на этой пластинке путем выявления Флуоресцирующих пятен в исследуемом образце и сравнение их со стандартным образцом. При этом выявленияФлуоресцирующих пятен ведут с помощью трифторуксусной кислоты (1.Недостатком в известном способеявляется то, цто при его применении 10полуцаатся недостаточно точные результаты, из-за присутствия загрязненных частиц на пластинке, частькоторых также как афлотоксины обладают флуоресцирующей способностью.15ыПри использовании трифторуксусноикислоты образуются соединения Флуорес.цирующие в той же области, что и про"дукты, образующиеся из афлотоксиновВ и С,1, цто делает подтверждениев этом случае недостоверным, на хроматограммах получаются широкие полосы фона и размытые пятна В.и Сщчто резко затрудняет определение, 3 92822 б фнижняя часть хроматографической плас- ракта продуктов растительного сырья тинки сильно загрязнена примесными отсекают загрязненную примесями часть веществами, что мешает обнаружению пластины ниже уровня пятен афлотоксипятен образующихся В,1 и Сщ, лежа" нов Ви С, а выявление флуоресцищих в этой области, рующих пятен в исследуемом образцеЦель изобретения - повышение точ- ведут продуктами бромирования.ности определения. При этом в качестве продуктов броПоставленная цель достигается тем, мирования может быть использован что согласно способу определения на- раствор брома в диоксане.личия афлатоксинов В.и Св продуктах 1 орастительного сырья, включающему прове- Установлено, что при использовадение хроматографии экстракта из про- нии для бромирования афлотоксинов В. дуктов растительного сырья на хромато- и С раствора брома в диоксане в графической пластинке, подтверждения результате реакции, протекающей как наличия афлотоксинов на этой пластин в растворе, так и непосредственно ке путем выделения Флуоресцирующих на хроматографической пластинке, обпятен в исследуемом образце и срав- разуются только продукты присоединенение их со стандартным образцом, ния брома по двойной связи терминальпосле проведения хроматографии экст- ного фуранового кольца, например;ов афлотоксиновинтенсивной Флуолено масс-спектСтроение дибромидВ,1 и С, обладающихресценцией, установрометри чески .Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.Экстракт из продуктов раститель ного сырья подвергают очистке хроматографией и концентрируют его 0,05- 0,1 мл. На хроматографическую пластинку наносят по 2-20 мкл два пятна очищенного концентрата и два пятна " смеси стандартов Ви С 1 и хроматографируют, подсушивают и рассматривают в Уф при 360 нм, Отмечают Флуоресцирующие пятна стандартов и соответствующие пятна концентрата. Обрезают часть пластинки на 10- 12 мм. ниже пятен афлотоксинов, Затем по одному отмеченному пятну стандарта и концентрата обрабатывают 10-15 ыкл 5- 10-ного раствора брома в диокса" не, выдерживают 1-3 мин при комнатной температуре и снова хроматограФируют в той ие системе. Совпадение Ву Флуоресцирующих пятен как самих афлотоксинов в стандартных и опытных пробах, так и В соответствующих дибромидов подтверждает наличие афлот" оксинов в анализируемом продукте.и м е р 2. Экс продукта подвер й очистке, напри 3-ным водным рас ония и гексаном,ракт афлотоксиают предвариер обработвором сульфаводный слой нов и тельн кой 2 та ам ОП р и м е р 1. Экстракт афлотоксинов из продукта подвергают очисткеколоночной хроматографией и концентрируют до 0,05-0,1 мл. На пластинкусилуфол наносят по 10 мкл два пятнаочищенного концентрата и два пятнасмеси стандартов Ви Си хроматографируют в системе хлороформ-бензолацетон 9:1:1, подсушивают и рассматривают в Уф при 360 нм. Отмечают флуоресцирующие пятна стандартов и соот ветствующие пятна концентрата. Обре"зают часть пластинки на 10 мм нижепятен афлотоксинов. Затем по одномуотмеченному пятну стандарта и концентрата обрабатывают 10 мкл 5 Ф-ного 45 раствора брома в диоксане, выдерживают 1 мин при комнатной температуреи снова хроматографируют в той же системе, Совпадение К Флуоресцирующихпятен как самих афлотоксинов в стан дартных и опытных пробах, так В соответствующих дибромидов подтверждает наличие афлотоксинов в анализируемом продукте.92822 б Формула изобретения 20 Составитель М. ВыражейкинаРедактор В. Бобков Техред М. Надь Корректор Г. Огар Тираж 883 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, И, Раушская наб д. 4/5Заказ 3227/55 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 5обрабатывают хлороформом. Хлороформенную вытяжку концентрируют до 0,1 мл. На пластину силуфол на линию старта на расстоянии 15 мм от края пластинки наносят концентрат (слева) и стандарт (справа) и хроматографируют в негерметично закрытой камере в системе бензол-гексан-эфир 1;1:1 в течение 1 ч, Затем пластинку подсушивают, поворачивают на 90 о, наносят стандарты слева и справа от пятна концентрата и хроматографируют в системе хлороформ-бензол-ацетон 9:1:1. Пластинку рассматривают в УФ свете, отмечают соответствующие пятна стандартов и концентрата и отрезают часть пластинки на 12 мм ниже пятен афлотоксинов. Обрабатывают пятна концентрата и правого стандарта 15 мкл 10:ь-ного раствора брома в диоксане, выдерживают 3 мин при комнатной температуре и снова хроматографируют в той же системе. Совпадение йр Флуоресцирующих пятен как самих афлотоксинов в стандартных и опытных пробах, так и К соответствующих дибромидов подтверждает наличие афлотоксинов в анализируемом продукте.Использование предлагаемого способа подтверждения наличия афлотоксинов В 1 и Ообеспечивает по сравнению с существующими способами следующие существенные преимущества: повышение достоверности результатов определения и подтверждения наличия афлотоксинов Ви Св объектах окружающей среды; исключение ложных результатов подтверждения, что предотвращает возможность запрещения употребления кондиционных пищевых продуктов и кормов; улучшение наглядности при подтверждении наличия афлотоксинов путем получения четких пятен дибромидов и удаления загрязненной части пластинки.Способ проверен на различных зерновых (пшеница, рожь, кукуруза, рис, овес) и масляничных (арахис, кешью) продуктах сравнительно со способом,основанным на применении трифторуксусной кислоты, и установлено, чтоон существенно превосходит последний.Надежное подтверждение достигаетсяпри содержании афлотоксинов В и О0,5-1,0 нг в пятне, что обеспечивает возможность определения и подтверждения наличия афлотоксинов на уров О не и ниже предельно допустимой концентрации порядка 2,5-5 мкг/кг.Предлагаемый способ рекомендуетсяиспольэовать для подтверждения нали"ция афлотоксинов В 1 и 61 при их оп ределении любыми флуоресцентными методами. 1. Способ определения наличияафлатоксинов В и С 1 в продуктах растительного сырья, включающий проведение хроматографии экстракта из про.2 дуктов растительного сырья на хроматографической пластинке, подтверждение наличия афлотоксинов на этойпластинке путем выявления флуоресцирующих пятен в исследуемом образцеи сравнение их со стандартным образцом, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью повышения. точности определения, после проведения хроматографии экстракта продуктов растительного сырья отсекают загрязненную примесями. часть пластины ниже уровняпятен афлотоксинов Ви 6,1, а выявление флуоресцирующих пятен в исследуемом образце ведут продуктами бро 40 мирования2. Способ по и. 1, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, цто в качестве продуктов бромирования используют раствор брома в диоксане.Истоцники информации,принятые во внимание при экспертизеф 1, "3. Аээоэ оЛ 1 с, Апа 1. С 11 ешн60, й 4, 1977, 95-8 см. М, ТгиссэеээеФа 1 ТСХ (определение Афл.В.).