Способ определения аминогликозидных антибиотиков в биологических жидкостях

ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз СоветсимкСоциалистичесиикРеспублик и 892278 ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(23)приоритетС 01 М 21/27 С 01 М 21/78 О 01 М 33/52 двретеапаб кемнт СССР дю делам нзобрете н открытий ликоваио 23.1 ень47 3) УДК 543.062:) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНО-ГЛИКОЗИДНЫХ АНТИБИОТИКОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ обрете тичти ескои химческое при иническом овня аминов в раэлич х человека ределения амиотиков в биоло ключающий обра с последующим причем в каьзуют периодат оты 11 . способ опых антибикостяхреактивоованием,ива испо Известено-гликоэид ических жи отку пробы колориметри честве реак вои ки т известный способн, поскольку его2,5 мкг/млэобретения являетвительности ы тния. Однако точно точ тельность Целью шение чув и определ Поставвст ся по вычности аетсяа исполь енная цель дост качестве реакт ем, ч е относится к аналии и может найти прак"енение, например, внализе при опредеттенигликозидных антибиотиых биологических жидки животных. зуют смесь водных растворов солипраэеодима и фталексонапри их соотношении 2:8, причем обработку проводят в водноэтанольной среде прирН 5,3-5,8,В результате реакции формируетсясоединение, окрашенное в синий цвет(максимум полосы поглощения при619 нм) с высоким значением молярно. го коэффициента поглощения, Наприто мер, для соединения мономицина с праэеодимом и фталексономэта величина равна 145000,для гентамицина160000, для зигомицина " 155000, Припроведении реакции в водном этаноле,фталексон = 1:2:8.Проведению реакции не мешаютсульфаты, нитраты, хлориды, ацетатыщелочных и щелочноэемельных ионов,большинство ионов металлов прирн 53"5,8, углеводы, также амино15 35 Х=Х Й р 5/1 ГП Антибиотики Моча Кровь Молоко 0,098+ О, 002 0)09"+0002 0)098+0,002 0,0970,003 0,098+0,002 0)097+0,003 Мономицин Канамицин 38922кислоты, как глицин, аналин, тирозин,триптофан, новокаин, бензилпенициллин, тетрациклиновые антибиотики(если их содержание в анализируемомобразце не превышает 1000-кратноеколичество по отношению к амино-гликозидным антибиотикам). Мешающеевлияние железа ( алюминия, меди, кальция, цинка устраняется введением в исследуемый раствор до 20 кратных количеств по отношению кпразеодиму фторида натрия.П р и м е р 1, Определение амино-гликозидных антибиотиков в крови,К 0,2 мл крови приливают 2 млводы; 2 мл 303-ного водного растворатрихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют при 5000 об/минв течение 1 О мин, Центрифугат переносят в колбу на 20 мл, вносят0,2 мл 0)013-ого водного растворааскорбиновой кислоты; 0,1 мл 0,01 Мфторида натрия; 0,2 мл 103-ноговодного аммиака; 5 мл ацетатногобуяера с рН 5)5; 1 мл 0,002 М фталексона; 0,5 мл 0,001 М хлорида пра-,зеодима и 963-ный этанол до 20 мл.Через 2 мин измеряют оптическую плот"ность раствора в двухсантиметровойкювете при 619 нм относительно воды.ЗоСодержание амино-гликозидных антибиотиков находят по калибровочномуграфику, построенному обработкой,проб крови, в которые добавлены различные количества того или иного антибиотика,П р и м е р 2, Определение амино-гликозидных антибиотиков в моче.К 0,5 мл мочи приливают 0,5 млводы; 0,2 мл 0)01-ого водного раствора аскорбиновой кислоты; 0,1 мл001 М фторида натрия; 10 мл ацетатного буферного раствора с рН 5,5;1 мл 0,002 М водного раствора фталексона"5; 05 мл 0,001 М хлоридапразеодима перемешивают и вносят96-ный этанол до 20 мл. Через 2 минизмеряют оптическую плотность раство 78ра в двухсантиметровой кювете при619 нм относительно воды.Содержание амина-гликозидных антибиотиков находят по калибровочному графику, построенному обработкой проб мочи, в которые вносятсявозрастающие количества тех илииных,амино-гликозидных антибиотиков.П р и м е р 3, Определение амино-гликоэидных антибиотиков в молоке.К 0,2 мл молока приливают 2 млводы; 0,2 мл 303-ого раствора трихлоруксусной кислоты, перемешиваюти центрифугируют при 5000 об/мин втечение 10 мин. Центрифугат фильтруют в колбу на 20 мл, промывают осадок на фильтре 5 мл ацетатного буфера с рН 5,5 в колбу вносят 0,2 мл001-ого водного раствора аскорбиновой кислоты; 0,1 мл 0,01 М фторида натрия; 0,3 мл 103-ого водногоаммиака, перемешивают содержимое, колбы, приливают 1 мл 0,002 М водного раствора фталексона; 0,5 мл0,001 М хлорида праэеодима и 961-ныйзтанол до 20 мл. Через 2 мин измеряют оптическую плотность растворав двухсантиметровой кювете при 619 нмотносительно воды,Содержание антибиотиков находятпо калибровочному графику, строящемуся путем обработки проб молока,в которые вносятся возрастающие количестваа того или иного антибиотика.Результаты определения амино-гликозидных антибиотиков в различныхматериалах представлены в таблице.Метрологические характеристикиспособа определения амино-гликозидныхантибиотиков в биологических материалах следующие: число опытов п=20,критерий Стьюдента й=2)10 при степени надежности р=095, Х - среднеарифметическое из п определений5 - квадратичная ошибка,Введено 0,1 мкг антибиотика в 1 млисследуемого материала.- Продолжение таблицы Антибиотики Х=Х с 5/и а ае аКровьеееа иМолоког ге Моча 0)098+0)002 0,097+0,003 ЗигомицинГентамицин 0,099+0,002 0,099+0,002 0,097+0,003 0,099+0,002 Составитель Д. РубиноваРедактор И,Николайчук Техред А, Бабинец Корректор М.Коста. Заказ 11240/64 Тираж 910 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Же 35, Раушская наб д,4/5 . т г г а и ииюатттаюатигигиа а иге гег Филиал ППП "Патент", г;Ужгород, ул,Проектная, 4 Изобретение позволяет определять0,01 а 50 мкг мономицина, кинацина,неомицина, зигомицина, наромомицина,гентамицина, стрептомицина и гидроксимицина в крови, молоке и моче человека и животных. Результаты идентичны, независимо от того, от какогообьекта (человека, собаки, кроликаили мышей) был взят материал дляпроведения исследования,Чувствительность способа 0,01 мкг//мл,формула изобретения Способ определения аминоггликоазидных антибиотиков в биологических жидкостях, включающий обработку пробы реактивом с последующим колориметрированием, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышениячувствительности и точности определения, в качестве реактива используют смесь водных растворов солипразеодима и фталексонапри ихсоотношении 2:8, причем обработкупроводят в водноэтанольной среде прирн 5,3-5,8,Источники информации,,принятые во внимание при экспертизе1, Рццвойо Н 1 эао 1,Ну 9.СИеа1976, р.22, 380 а 384,