Способ количественного определения полиэтиленоксида

(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯПОЛИЭТИЛЕНОКСИДА Изобретение относится к медицине,в частности к способам количественного определения полиэтиленоксида, и может быть использовано в терапии, хирургии, экспериментальной и клинической фармакологии, в биологии, в том5числе криобиологии,Наиболее близким к предлагаемомуизобретению является способ количественного определения полиэтиленоксидапутем инкубации пробы с нитратпикра 10том натрия с последующей экстракциейорганическим растворителем и фотометрии полученного продукта, основанныйна спектрофотометрическом определениикомплексов полиэтиленоксидов с катиона 13ми натрия после экстракции их в видепикратов в 1,2-дихлорэтан, 50 мл водной пробы переносят в делительную воронку на 250 мл со стоп-краном, добавляют 50 мл нитратпикрата натрия(56,6 г нитрата натрия и 0,92 г высушенной в эксикаторе под вакуумом спятиокисью фосфата пикриновой кислоты растворяют в О,1 н,растворе едкого натра в мерной колбе на 100 мл, объем доводят до метки), перемешивают и дают постоять в течение 1 ч.Затем добавляют 5 мл 1,2-дихлорэтана, энергично взбалтывают в течение 3-х мин.органи" ческий слой переносят в коническую центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 10 мин при 2000 об/мин, Параллельно ставят контроль с 50 мл дистиллированной воды, Спектрофотометрируют при 378 нм в 1-2 см кварцевых кюветах против контроля, Чувствительность способа 1-0,1 мг/л с точностью от - 6 до +87 по анализам в воде 11 ,Известный способ разработан на примере п-тертнонилфенилового эфира полиоксиэтилена и не пригоден для определения полиэтиленоксида в сложных биологических субстратах, например, крови, растительных соках и, следовательно, не обеспечивает возможности определения токсико- и фармакокинетики, фармакодинамических свойств введенного по 3 859лиэтиленоксида в организм животногоили человека. Воспроизведению способамешают имеющиеся в этих биологическихс томах белки и некоторые сахара, обладающие способностью образовыватькомплексы с нитратпикратом натрия, а5также красный цвет гемоглобина,К недостаткам способа относится иневозможность добиться полного растворения пикриновой кислоты и нитрата натрия в 0,1 н.едком натре в указанныхсоотношениях.Цель изобретения - определение полиэтиленоксида в биологических жидкостях.Поставленная цель достигается тем,что в предлагаемом способе количественного определения полиэтиленоксидапутем инкубации пробы с нитратпикратом натрия с последующей экстракциейорганическим растворителем и фотометрии полученного раствора, к пробе перед инкубацией последовательно добавляют хлорид бария, 1-2,57-ного раствора гидроокиси бария, 5-67-ного раствора сульФата цинка, образовавшийся 25осадок удаляют, а супернатант обрабатывают 10-207-ным раствором сульфатамеди, 12"257.-ным гидроокиси калия,затем смесь инкубируют 5-20 мин приперемешивании и полученный осадок удаляют.Способ осуществляют следующим образом,К 0,5-1 мл биологического материала, содержащего полиэтиленоксид для 35осаждения белков, последовательно добавляют 0,5-1 мл 20-107-ного хлоридабария, 1-2 мл 1-2,57.-ной гидроокисибария, 1-2 мл 5-6 Е-ного сульфата цинка. Смесь перемешивают после добавления каждого реагента, оставляют стоять 10-15 мин и затем центрифугируют15-20 мин при 2500-3000 об/мин. Недостаток переносят в другую пробирку идля осаждения сахаров добавляют 2- 454 мл 20-107.-ного сульфата меди Сц 50,и 2-4 мл 25-127.-ной гидроокиси кальцияСа(ОН)2, смесь энергично взбалтывают15-20 мин, затем центрифугируют 510 мин при 2000-3000 об/мин. Лишенный 50белков и сахаров надосадок переносятв другую пробирку и добавляют 3-5 млкомплексообразующего реагента нитратпикрата натрия (1,5-2,2 И нитрата натрия и 0,015-0,01 И пикриновой кислоты 5на 0,15-0,1 н,едком натре), смесьвзбалтывают и экспонируют в течение50-60 мин, Затем прибавляют 4-5 мл 1,2-дихлорэтана, энергично взбалтываютвтечение 3-5 мин. Центрифугируют 1015 мин при 2000-2500 об/мин. Органический слой переносят в другую пробирку и определяют оптическую плотностьспектрофотометрически при 378 нм, Расчет количества ПЭО проводят по калибровочной кривой,П р и м е р, Кмл крови, взятойиз вены после внутривенного введенияПЭО, последовательно добавляют1 мл 107-ного хлорида бария, 2 мл2,57.-ной гидроокиси бария, 2 мл 57-ного сульфата цинка. Смесь перемешиваютпосле добавления каждого реагента испустя 10 мин после прибавления последнего из них центрифугируют 15 мин при3000 об/мин, Недостаток переносят вдругую центрифужную пробирку, добавляют 2 мл 207.-ного сульфата меди и 2 мл257.-ной гидроокиси кальция, смесьвзбалтывают первые 5 мин непрерывнои последующие 10 мин периодически,затем центрифугируют 10 мин при3000 об/мин. Надосадок переносят вдругую пробирку, добавляют 5 мл реагента нитратпикрата натрия, Смесь тщательно перемешивают, выдеоживают в течение 1 ч при комнатной температуре.Затем добавляют в 5 мл 1,2-дихлорэтана, энергично взбалтывают в течение3-х мин и центрифугируют 10 мин при2000 об/мин. Оптическую плотность органического экстрата определяют спектрофотометрически (на спектрофотометреСф) при 378 нм и толщине слоясм.Плотность исследуемого образца составляет 0,115, что по калибровочной кривой соответствует 0,046 мг ПЭОвданном объеме крови .Предлагаемый способ обеспечиваетвозможность определения полиэтиленоксида в малых объемах (домл) сложных биологических материалов (например, кровь, стекловидное тело, сокирастений, амниотическая жидкость идр.), Способ специфичен - положительную реакцию дают только вещества, содержащие оксиэтильные (СН -СН -О) группы. Положительной реакции не даютспирты, альдегиды, кетоны. Способ высокочувствителен - обеспечивает определение полиэтиленоксида в концентрациях 0,0025-0,017,Предлагаемый способ позволяет повысить точность определения токсикои фармакокинетики и фармакодинамических свойств полиэтиленоксидов при5 859927 6введении их в организм человека и жи- биологических жидкостях, к пробе певотных и тем самьв способствовать раз- ред инкубацией последовательно добавработке национальных доэ препарата ляют хлорид бария, 1-2,57-ного растпри его парентеральном введении. вора гидроокиси бария, 5-6 Х-ного раствора сульфата цинка, образовавшийсяосадок удаляют, а супернатант обрабаформула изобретения тывают 10-203-ныл раствором сульфатамеди, 12-25%-ным гидроокиси калия,Способ количественного определения затем смесь инкубируют 15-20 мин.приполиэтилеиоксида путем инкубации пробы 1 я перемешивании и полученный осадокс нитратпикратом натрия с последующей удаляют.экстракцией органическим растворителем Источники информации,и фотометрии полученного продукта, принятые во внимание при экспертизео т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с 1. Ну 1 у Зг 1 езйе Апа 1 уС. 1976,целью определения полиэтиленоксида в 1 у ч. 101, р. 198-200,Составитель А, БражниковаРедактор М, Лысогорова Техред З,фанта Корректор М. ДемчнкЗаказ 7538/67Тираж 907 Подписное ЗНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушакая наб., д, 4/5 филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4