Способ контроля процесса гидролиза крахмалистого сырья

Сфюэ Сфветскид Социалистических РеспубвеОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ пп 7295 ОЗ(51)М. Кл.2 С 01 Н 33/14С 12 С 7/04 Государственный комитет СССР по делам изобретений н открытий(54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ ПРОЦЕССА ГИДРОЛИЗА КРИИАЛИСТОГО СЫРЬЯ Изобретение относится к спиртовой промышленности, а именно, к способам контроля процесса гидролиза крахмалистого сырья,5Известен способ гидролиэа крахмалистого сырья путем обработки его комплексом ферментных препаратов фосФатазы, глюкоамилазы и мальтазы (1) .Недостатком известного способа явО ляется то, что он не предусматривает определение скорости ферментативного гидролиэа различными группами ферментов, а именно, не дает возможности изучить влияние фосфатазы и амилоли тических Ферментов на скорость и глубину гидролиэа.Целью изобретения является определение скорости ферментативного гидролиза различными группами ферментов.20Это достигается тем, что в предлагаемом способе гидролиэ осуществляют в две параллельные стадии, на одной из которых в культуральную жидкость илн Ферментный рйствор вводят ингибитор кислой фосфатазы, представляющий собой соль переходных металлов - молибдат или вольфрамат натрия, не влияющий на активность сопутствующих. вмилолитических ферментов, а вторую 30 стадию гидролиэа осуществляют в ана- . логичных условиях беэ ингибитора и по динамике накопления восстанавливающих углеводов и Фосфора регулируют процесс гидролиэа Фосфодекстринов до восстанавливающих углеводов.Предлагаемый способ осуществляют следующим образом,В качестве источника ферментов используют культуральную жидкость гриба Аврегд 111 аа аъавог 1 шт, 22. Определяют активность кислой фосфатазы колориметрическим методом, субстратом служит Фенолфталеинфосфат натрия; активность мальтазы-трансферазы определяют методом с применением глицерина в качестве акцептора, а ос-амилазы - такае колориметрическн. Осуществляют первую стадию гндролиза, вводя в культуральную жидкость ингибитор кислой Фосфатаэы, молибдат натрия, в количестве на 100 ед. активности фермента 1 мл раствора, содержащего 40- 44 мг молибдата при рН 5,0.Ингибирование кислой Фосфатазы в кльтуральной аидкости осуществляется мгновенно.Вторую стадию процесса гидролиэа крахмалистого сырья осупествлячт в729508 2,55 0,31 1,48 1,50 100 2,50 0,30 Формула изобретения аналогичных условиях, также культу- ральной жидкостью гриба Аврек 111 ив ачиаог 5. шт. 22, но без ингибитора.Таким образом, первую стадию гидролиза проводят без кислой фосфатаэы, только амилолитическими ферментами, а вторую стадию-комплексом ферментов.Результаты гидролиза на стадиях сравнивают по накоплению восстанавливающих углеводов и фосфора в гидролизатах и регулируют по ним процесс гидролиэа. При этом гидролиз фосфодекстринов амилолитическими ферментами (глюкоамилазой, мальтаэой и ав амидазой) отличается низкой степенью ферментатинного расщепления до восстанавливающих углеводов . Фосфор н гидролизатах не накапливается,Таким образом, изучение процесса гидролиэа дает воэможность оценить значение кислой фосфатаэы, освобожПараллельно осуществляют вторуюстадию процесса гидролиза без внесения ингибитора.Субстратом для изучения действияамилолитических ферментов при наличии активности кислой фосфатазы ипосле ее ингибирования служат низкомолекулярные фосфодекстрины ячменя.Декстрины получают при осахариванииячменного затвора амилолитическимиферментами микробного происхождения:,глюкоамилаэой Епйопусорв 1 я Ь 1 ярогаи сС-амилазой Аврегд 111 ив Ьа 1 аас - 61с последующим сбраживанием осахаренных затворов, упариванием фильтратабражки и осаждением этанолом,Действие амилолитических ферментов и кислой фосфатазы на фосфодакстрины оценивают по накоплению восстанавливающих углеводов и Фосфсра вгидролизатахГидролиэ 1-ных растворов фосфодекстринон проводят в 0,1 Мацетатном буфере рН 5,0 при 30 С .Фильтрат глубинной культуры дозируютпо активности кислой фосфатазы иэрасчета 100 ед на 1 г декстринов. Приэтом расход амилолитических ферментов, вводимых с выбранной дозировкойФильтрата, составляет ед/г декстринов: глюкоамилазы 2,5; -амилазы 1,0;мальтаэы 0,3Гидролиз фосфодекстринов глюкоамилаэой, мальтазой и оС-амилаэой в выб-ранных дозиронках на перной стадии,характеризуется низкой степенью их.Ферментатинного расщепления: 24 эа данцей химически связанный с декстри" нами фосфоРП р и м е р . Перед началом опыта анализ фильтрата культуральной жидкости гриба Аврегд 111 цв аюалог 1 шт, 22 показывает наличие в них активностей, ед/мл: кислой Фосфатаэы 100, глюкоамилаэы 2,5; амилаэы 1,5; мальтаэы 0,3(О Осуществляют первую стадию гидролиза при РН 5,0 и температуре 20 фСв присутстнии ингибитора. Для ингибиронания используют соль молибдатанатрия Ма Мо 04 2 Н О в концентрации110 М.В таблице показано влияние молибдата натрия на активность амилолитических ферментов фильтрата культуральной жидкости Аврегц 111 цв аыалюг 1шт. 22.,72 ч гидролиэа. При этом фосфор нгидролиэатах не накапливается, Совместное действие тех же количествамилолитических Ферментов и кислойфосфатаэы на фосфодекстрины на второй стадии приводит к освобождениюхимически связанного с декстринамифосфора и сопровождается унеличениемскорости и глубины их ферментативного расщепления. Максимальная.,скоростьнакопления фосфора и сбраживаемыхуглеводов приходится на первые 24 чгидролиэа. За это время количествоосвобожденного фосфора достигает 71 45 и не меняется с течением времени, астепень ферментативного расщеплениядекстринов до восстанавливающих углеводов достигает 48,5 (в пересчетена глюкозу) и медленно возрастает с 50 увеличением длительности гидролиэадо 72 ч. 55Способ контроля пРоцесса гидролиэакрахмалистого сырья путем обработкиего комплексом ферментных препаратовфосфатаэы, глюкоамилазы и мальтаэы,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, 60 с целью определения скорости ферментативного гидролиэа различными группами Ферментов, гидролиэ осуществляют.в дне параллельные стадии, на однойиз которых в культуральную жидкость 65 или ферментный раствор вводят ийги729508 Составитель Л. ПашининаРедактор П. Горькова Техред Ж.Кастелевич КорректорЕ, Папп Заказ 1254/38 Тираж 1019 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5Филиал ППП фПатентф, г. Уагород. ул. Проектная, 4 битор кислой фосфатазы, представляющий собой соль переходных металловмолибдат или вольфрамат натрия, невлияющий на активность сопутствующихамилолитических ферментов, а вторуюстадию осуществляют в аналогичных условиях без ингибитора и по динамикенакопления восстанавливающих углеводов и фосфора регулируют процесс гидролиза фосфодекстринов до восстанавливающих углеводов.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Авторское свидетельство СССР 9 460292, кл. С 12 С 7/04, 1973 (прототип) .