Способ получения целлюлазы

(51 соединением заявкиГосударственный комитет Совета Министров СССР по делам изобретенийи открытий 32) Приоритет1 убликовано 30.0юллетень Ле 3 Лата опубликовани писания 04.01.76 72) Авторы изобретени(71) Заявитель 54) СПОСОБ ЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛАЗЫ На синтетической среде Чапека с сахарозойколонии распростертые, достигают краев чашки Петри диаметром 9 см. Вначале развивается стерильный мицелий, бесцветный. На Б 3-и сутки по краю колонии (ширина 1,5 см)появляется конидиальное спороношение, окрашенное в темно-зеленый цвет. Обратная сторона колонии не окрашена, пигмента нет.На сусло-агаре (сусло 5 по Баллингу) ко лонии распростертые, с более развитым мицелием, достигают краев чашки Петри. На 3-и сутки появляется конидиальное спороношение, доходящее до центра, колонии темно- зеленого цвета. Обратная сторона колонии 15 желтовато-бурого цвета, есть пигмент,На среде состава, %: фильтровальная бумага (измельченная) 1,00, (КН 4),Ю 4 - 0,15, МаМОз - 0,15, КК 2 РО 4 - 0,05, 10% -ный экстракт из пшеничных отрубей, 300 (мл), вода 20 водопроводная до 14 л, - колонии распростертые, достигают краев чашки Петри, мицелий хорошо развитый, паутинистый. Конидиальное спороношение появляется на 3-и сутки. Колонии темно-зеленого цвета по всей 25 поверхности.Обратная сторона колонии не окрашена.пигмента нет.Морфологическая характеристика культурыгриба Тг 1 с 1 тодегпта 11 дпогцгп бСна всех 30 средах сходна. огическая характериТг 1 сйодегпта 11 дпогцгп культивирования при Изобретение относится к ферментной отрасли микробиологической промышленности и может быть использовано в сельском хозяйстве при силосовании грубых кормов, а также для получения сахаристых растворов из отходов пищевой и деревообрабатывающей промышленности,Известен способ получения целлюлазы путем культивирования грибов, относящихся к виду Тг 1 с)тос 1 еггпа 11 дпогцгп, поверхностным способом на питательной среде, содержащей пшеничные отруби и свекловичный жом.Однако с помощью известного способа получают недостаточно активную целлюлазу.С целью устранения указанного недостатка по предлагаемому способу для получения целлюлазы используют штамм 6 С, а в питательную среду дополнительно вводят солодовые ростки при следующем соотношении компонентов, %:Пшеничные отруби 55 - 60 Свекловичный жом 20 - 25 Солодовые ростки 25 - 15Культура гриба Тг. 11 дпогшп 6 Свыделена из гниющей бумаги путем рассева на питательных средах.Культурально-морфолстика культуры гриба6 Сна 4-е сутки ожемякнна, Т, И. Кудряшовадионова и И. С. Коршуновий институт биосинтезаств45 50 55 60 65 3Конидиеносцы в виде боковых ответвлений воздушного мицелия, большей частью вильчато или тройчато разветвленные, бесцветные. Фиалиды бутылевидные или конусовидные, слегка изогнутые, расположенные часто одиночно или мутовчато по 2 - 3 штуки размером 6 - 13 Р,2,5 - 4,5 мкм. Конидии шаровидные овальные 2,5 к,3,5 - 4,0 мкм в диаметре, зеленые, скученные в шаровидные головки.Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.Культуру гриба Тпс 11 ос 1 еппа 11 дпогцсп 6 С выращивают на питательной среде следующего состава, Я: пшеничные отруби 55 - 60, свекловичный жом 20 - 25, солодовые ростки 25 - 15. Среду увлажняют водопроводной водой до влажности 60 - 65/ стерилизуют при 0,8 - 1 ати 1 час, охлаждают до 35 - 38 С и производят засев споровой суспензии 4 в 5- дневной культуры, Продолжительность выращивания 50 - 64 час при температуре 25 - 32 С.Активность культуры по осахариванию фильтровальной бумаги (Сгфермент) 70 - 80 ед/г, по разжижению натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (С.-фермент) 40 - 60 ед/г абсолютно сухой культуры,Ферментный экстракт из культуры получают при соотношении абсолютно сухой культуры и воды 1: 3,5 - 1:4.Препарат целлюлазы выделяют из ферментных экстрактов одним из известных способов, используя органические растворитсли (этиловый или изопропиловый спирт, ацетон) или высаливанием. Осадок отделяют центрифугированием при 3000 - 4500 об/мин. Полученный препарат высушивают, например, лиофильно.Выход препарата составляет 4 - 6 по весу культуры с активностью Сгфермента - 600 - 700 ед/г, С,-фермента - 450 - 600 ед/г.П р и м е р 1 (контроль), 20 г пшеничных отрубей, 20 г свекловичного жома смешивают и увлажняют водопроводной водой до влажности 60%,Увлажненную питательную среду помещают в колбу емкостью 500 см и стерилизуют в течение часа при 1 ати. Затем охлаждают до температуры 38 С и засевают споровой суспензией 5-дневной культуры гриба Тп- спос 1 еггпа 11 дпогцгп 6 С.Засеянную питательную среду помещают в кювету (толщина слоя 2,5 см). Продолжительность выращивания 60 час при 30 С.Активность С,-фермента - 23 ед/г абсолютно сухой культуры.Активность С-фермента в готовой культуре - 29 ед/г,Готовую культуру измельчают водой в количестве 350 (по абсолютно сухому весу). Экстракцию проводят 1 час при 30 С. Затем производят отжатие биошрота до влажности 60. Фильтрат центрифугируют при 6000 об/ /мин и используют для получения препарата. 5 10 15 23 25 Зо 35 43 4Выделение препарата целлюлазы проводятэтиловым спиртом при крепости в смеси 72,Полученный осадок отделяют центрифугированием нри 4500 об/мин.Активность С,-фермента в лиофильно высушенном препарате 282 ед/г, активность С,- фермента - 226 ед/г.П р и м ер 2, 20 г пшеничных отрубей, 20 гсвекловичного жома смешивают и увлажняютводопроводной водой до влажности 607 о.Увлажненную питательную среду помещают в колбу емкостью 500 см и стерилизуютв течение часа при 1 ати, Затем охлаждаютдо температуры 38 С и засевают споровойсуспензией 5-дневной культуры гриба Тп- с 11 ос 1 еппа 11 дпогцгп 6 С.Засеянную питательную среду помещают вкювету (толщина слоя 2,5 см), Продолжительность выращивания - 60 час при 30 С.Активность Сгфермента в готовой культуре - 43,5 ед/т, активность С,-фермента -34,5 ед/г абсолютно сухой культуры.Готовую культуру измельчают, заливаютводой в количестве 350 (по абсолютно сухому весу). Экстракцию проводят 1 час при30 С. Затем производят отжатие биошрота довлажности 60/с. Фильтрат центрифугируютпри 6000 об/мин и используют для полученияпрепарата.Выделение препарата проводят этиловымспиртом при крепости в смеси 72. Полученный осадок отделяют центрифугированием4500 об/мин.Активность С,-фермента в лиофильно высусненном препарате 420 ед/г, активность С.; -фермента - 340 ед/г.Таким образом, предлагаемый способ получения целлюлазы с культуры гриба Тпсс 1 ос 1 еппа 11 дпогцгп 6 С, выращиваемой на питательной среде, содержащей, кроме пшеничных отрубей и свекловичного жома, солодовые ростки, позволяет повысить активностьфермента в 1,5 раза,П р и м ер 3. 22 г пшеничных отрубей, 10 г свекловичного жома и 8 г солодовых ростков смешивают и увлажняют водопроводной водой до влажности 60/.Увлажненную питательную среду помещают в колбу емкостью 500 см и стерилизуют в течение часа при 1 ати, Затем охлаждают до температуры 38 С и засевают споровой суспензией 5-дневной культуры гриба Тп- с 11 ос 1 еппа 11 дпогцгп 6 С,Засеянную питательную среду помещают в кювету (толщина слоя 2,5 см). Продолжительность выращивания - 60 час при 30 С,Активность С,-фермента в готовой культуре - 76 ед/г, активность С.-фермента - 60 ед/ /г абсолютно сухой культуры.Готовую культуру измельчают, заливают водой в количестве 350% (по абсолютно сухому весу). Экстракцию проводят 1 час при 30 С. Затем производят отжатие биошрота до влажности 60/ц. Фильтрат центрифугируют при482494 Составитель Л. Лосякова Редактор Н. Спиридонова Корректор Н. Аук Техред 3. Тараненко Заказ 3051/15 Изд. М 1751 Тираж 529 Подписное Ц 1-1 ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, )К, Раушская наб., д. 45Типография, пр. Сапунова, 2 6000 об/мин и используют для получения препарата.Выделение препарата целлюлазы проводят этиловым спиртом при крепости в смеси 72. Полученный осадок отделяют центрифугированием при 45000 об/мин,Активность С-фермента в лиофильно высушенном препарате - 700 ед/г, активность С,-фермента - 585 ед/г.Таким образом, культивирование нового продукта на предлагаемой среде позволило повысить активность фермента в 2,5 раза.Культура гриба Тг 1 с 1 тодеггпа 11 дпогцгп 6 С, выращенная по предлагаемому способу, может быть использована непосредственно, без выделения ферментного препарата, в сельском хозяйстве для силосования грубых кормов.При действии целлюлазы на силосуемые растения увеличивается содержание редуцирующих сахаров в 5 - 10 раз. Добавление целлюлазы при силосовании кормов ускоряет процесс созревания силоса и сокращает потери питательных веществ,5 Предмет изобретенияСпособ получения целлюлазы путем культивирования грибов, относящихся к виду Тг 1 с 1 тос 1 еггпа 11 дпогцпт, поверхностным способом на питательной среде, содержащей пшеничные отруби и свекловичный жом, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью получения более активной целлюлазы из грибов вида Тг 1 сйодеггпа 11 дпогцгп, используют штамм 15 6 С, а в питательную среду дополнительновводят солодовые ростки при следующем соотношении компонентов, о/о.Пшеничные отруби 55 - 60 Свекловичный жом 20 - 25 20 Солодовые ростки 25 - 15.