Способ извлечения эстрогенов

.А,Волков Р ьь ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(56) П.Владев-Иордановаледсвания экстрогенноществ в некоторых нашихНИИ курортологии и физинститута, 1962, М 2, с(57) Изобретение относитименно к химико-фармамышленности, и касаетсяния эстрогенов. Цельявляется повышение эфф Химические иссдействующих вепелоидах, София,иотерапии, труды53-55,ИЯ ЭСТРОГЕНОВся к медицине, ацевтической проспособа иэвлечею изобретенияективности извлеИзобретение относится к лекарственным препаратам и может быть использовано для извлечения экстрогенов из сапропеля.Цель изоНретения - повышение эффективности способа.Поставленная цель достигается тем, что в способе извлечения эстрогенов иэ лечебных грязей, заключающемся в том, что исходный продукт подвергают экстракции, для чего его смешивают с зкстрагирующим веществом, а после экстракции производят разделение и идентификацию эстрогенов, в качестве исходного продукта используют воздушно-сухой сапропель, который перед экстракцией подвергают кислотному гидро- лизу, для чего заливают его концентрированной соляной кислотой при соотношении масс 1:1, тщательно перемешивают и оставляют на сутки, после чего нагревают в тече,Ж, 1826908 А чения. Сущность изобретения заключается в том, что подвергают кислотному гидролизу соляной кислотой воздушно-сухой сапропель при соотношении 1:1, оставляют на сутки, затем нагревают в течение часа на водяной бане и затем трижды экстрагируют спирто-эфирной смесью при соотношении 1:1, затем экстракт обезвоживают сульфатом натрия, выпаривают досуха и растворяют в этиловом спирте, а разделение проводят на незакрепленном слое окиси алюминия в системе хлороформ - зтанол в соотношении 9:1. Положительный эффект заключается в том, что предлагаемый способ позволяет четко получить индивидуальные эстрогены,ние часа на водяной бане, после остывания полученную массу трижды экстрагируют спирто-эфирной смесью при отношенииаеьВ масс экстрагируемого вещества и спирто- Оф эфирной смеси 1:1, затем полученный экстрактобезвоживают и выпаривают досуха, О после чего производят разделение и иден- ) тификацию зстрогенов. При этом, разделе- ( ние и идентификацию эстрогенов СО производят методом тонкослойной хроматографии, для этого полученный сухой остаток растворяют в этиловом спирте. Хроматографию проводят следующим образом; стеклянные пластинки покрывают неЗакрепленным слоем окиси алюминия, затем на этот слой микрошприцем наносят стандартные растворы экстрогенов и исследуемый раствор, после чего проводят двукратную разгонку в системе хлороформ - этанол с соотношением масс 9:1 соответст 1826908венно, затем пластины опрыскивают реактивом Фолина-Чиокалтеу и выдерживают впарах аммиака до появления на них темносиних пятен, по которым и определяют наличие эстрогенов. 5Положительный эффект достигаетсяблагодаря тому, что в качестве исходногопродукта в предлагаемом способе извлечения эстрогенов используют сапропель, который на порядок больше содержит 10органических веществ, чем минеральныелечебные грязи, а именно, в 100 г минеральной грязи содержится 3,0 органических соединения, в то время как в 100 г. сапропелясодержится 80 ф 6 органических соединений. 15Это уже заранее обеспечивает повышеннуюконцентрацию эстрогенов в конечном продукте способа, что повышает его эффектив- .ность.Уменьшение количества примесей в 20сапропеле достигается благодаря тому, чтосапропель перед экстракцией подвергаюткислотному гидролизу, для чего заливаютего концентрированной соляной кислотой,тщательно перемешивают и оставляют на 25сутки, после чего нагревают в течение 1 часав водяной бане, Причем, в качестве исходного продукта берут воздушно-сухой сапропель, для того, чтобы не снизитьконцентрацию кислоты. ЗОВ результате происходит разрушениекарбонатов, содержащихся в сапропеле.Благодаря тому, что в качестве зкстрагирующего вещества в предлагаемом способеиспользуют спирто-эфирную смесь, в кото- З 5рой хорошо растворяются эстрогены, этопозволяет произвести практически полноеизвлечение эстрогенов из сапропеля, взятого в качестве исходного продукта, Полученный экстракт обезвоживают сульфатом 40натрия и выпаривают досуха. Для разделения полученных зстрогенов и их идентификации в предлагаемом способе используютметод хроматографии .в тонком слое, Дляэтого сухой конечный продукт растворяют в 45этиловом спирте, так как он хорошо испаряется. Хроматографию проводят на стеклянных пластинах, покрытых незакрепленнымслоем окиси алюминия. Для индентификации полученных эстрогенов на пластинки 50наносят стандартные эстрогены, Системахлороформ - этанол, с массовым соотношением 9:1 соответственно, как показали эксперименты, позволяет достичь лучшегоразделения трех классических эстрогенов. 55Двукратная разгонка обеспечивает болеечеткое разделение эстрогенов,Способ используют следующим образом В качестве исходного продукта для извлечения эстрогенов в предлагаемом способе используют воздушно-сухой сапропель, что позволяет исключить примеси, содержащиеся в отстойных водах, которые присутствуют в жидком сапропеле. Кроме того, использование воздушно-сухого сапропеля позволяет уменьшить расход реактивов для осуществления способа. Перед экстракцией воздушно-сухой сапропель подвергают кислотному гидролизу, для чего заливают его концентрированной соляной кислотой при соотношении масс 1:1. Тщательно перемешивают и оставляют на сутки, После этого нагревают в течение 1 ч на водяной бане. После остывания полученную массу экстрагируют трижды спиртно-эфирной смесью при соотношении масс экстрагирующего вещества и спирто-эфирной смеси 1:1, Полученный экстракт обезвоживают сульфатом натрия и выпаривают досуха, после чего производят разделение и индентификацию зстрогенов методом тонкослойной хроматографии. Для этого полученный сухой остаток растворяют в этиловом спирте, стеклянные пластинки покрывают незакрепленным слоем окиси алюминия, На этот слой наносят микрошприцем стандартные растворы эстрогенов и исследуемый раствор. После этого. производят двукратную разгонку в системе хлороформэтанол с соотношением масс 9:1, соответственно, Затем пластины опрыскивают реактивом Фолина-Чиокалтеу и выдерживают в парах аммиака до появления на них темно-синих пятен, по которым и определяют наличие эстрогенов, Для кислотного гидролиза воздушно-сухой сапропель помещают в емкость из кислотостойкого материала и заливают его концентрированной соляной кислотой, Тщательно перемешивают до образования однородной массы и оставляют на сутки при комнатной температуре для постепенного удаления СО 2 при разложении карбонатов, Через сутки емкость со смесью ставят на водяную баню и нагревают в течение 1 ч. В результате карбонаты, всегда присутствующие в сапропеле, разрушаются, что способствует дополнительной очистке исходного продукта от примесей. После остывания полученную массу экстрагируют спирто-эфирной смесью, Для этого полученную массу смешивают со спиртозфирной смесью в массовом соотношении 1:1, Тщательно перемешивают и отстаивают. После того, как четко обозначится граница отстоя, верхний слой сливают, Оставшийся осадок еще разсмешивают со спирто-эфирной смесью и процедуру повторяют. Экстракцию спирто-эфирной смесьюпроводят трижды, что позволяет наиболее полно выделить зстрогены иэ исходного продукта. Полученный экстракт обезвоживают сульфатом натрия и выпаривают досуха.После этого полученный сухой продукт разделяют на конкретные эстрогены, Для этого используют метод тонкослойной хроматографии. Для проведения хроматографии полученный сухой продукт растворяют в этиловом спирте. Хроматографию проводят на стеклянных пластинках, покрытых незакрепленным слоем окиси алюминия, С помощью микрошприца на пластинки наносят стандартные эстрогены и исследуемый раствор, Стандартные эстрогены позволяют идентифицировать эстрогены, содержащиеся в исследуемом растворе, Как показали опыты, разделение трех классических эстрогенов лучшие всего достигается в системе хлороформ - этанол в массовом соотношении 9:1 соответственно. Для более четкого разделения эстрогенов применяют двукратную разгонку. Для обнаружения стероидов пластину опрыскивают реактивом Фолина-Чиокалтеу и выдерживают в парах аммиака до появления на пластине темно- синих пятен. Темно-синие пятна указывают на наличие эстрогенов, которые проявляются в виде темно-синих пятен.При проявлении хроматограм обнаружено четкое пятно, имеющее такую же константу передвижения, как и эстрон стандартного раствора. Расстояние между стартовой линией фронта составило 15,0 см. Пятно исследуемого раствора находилось в зоне 10,5-10,7 см (Рт = 0,70).Из 100 г воздушно-сухого сапропеля было выделено с помощью предлагаемого способа 25 мГ эстрогенов. Биологическая активность полученных эстрогенов была проверена на белых мышах. Сравнение проводилось с фолликулином, который в весовом колицестве равнялся также 25 мГ. Опыты показали, что биологическая активность выделенных эстрогенов превышает биологическую активность фоликулина,По сравнению с прототипом, предлагаемый способ извлечения эстрогенов из лечебных грязей является более эффективным, Прежде всего эффективность способа повышается благодаря тому, что в качестве исходного продукта для извлечения эстрогенов используют сапропель, который на порядок больше содержит органических веществ, чем минеральные грязи, а именно в 100 г минеральной грязи содержится 3,0органических веществ, в то20 время как в 100 г сапропеля - 80, органических веществ. Зто уже заранее обуславливает повышенную концентрацию эстрогенов в конечном продукте способа, что повышает его эффективностьпо сравнению с прототипом, Кроме того, благодаря тому, что сапропель используют воздушно- сухой, исключаются примеси. содержащиеся в отстойных водах, которые присутствуют в жидком сапропеле,уменьшение 1 римесей в воздушно-сухом сапропеле достигается и благодаря тому; гто перед з.":тракцией сапропельподвогэют кисло 3 ному гидролизу, цто приводит к разрушению карбонатов, содержащихся в сапропеле, Наиболеа полно и.-вле ь эстрогенные веества из гидролизованного сапропеля, по сравнению с прототипом, пазволяет использование для экстракции спирто-эфирной смеси, так как эстрогены хорошо растворяются в эфире, цто также повышает эффективность способа, по срав нению с прототипом. Благодаря тому, чтопри разделении эстрогенов методом хроматографии в предлагаемом способе используют двукратную разгонку в системе хлороформзтзнол при их массовом соот ношении 9:1 соответственно, удается достичь более четкого разделения трех классических зстрогенов, цто также повышает эффективность предлагаемого способа, по сравнению с прототипом.35 Таким образом, по сравнению с прототипом, предлагаемь 1 й способ извлечения эстрогенов является более эффективным.Формула изобретения Способ извлечения зстрогенов путем 40 экстракции лечебных грязей органическимрастворителем, разделения методом тонкослойной хрома.ографии и идентификации экстрогенов,отлича ю щийс я тем, что, с целью повышения эффективности разде левил, в качестве лечебной грязи, используют воздушно-сухой сапропель, перед зкстракцией его подвергают кислотному гидролизу соляной кислотой при соотношении 1:1, тщательно перемешивают и остав ляют на сутки, после чего наревают втечение 1 ч на водяной бане, после остывания полученную массу трижды экстрагируют спирто-эфирной смесью при соотношении 1:1, затем полученный экс тракт обезвоживают сульфатом натрия, выпаривают досуха и растворяют в зтиловом спирте, а разделение проводят на незакрепленном слое окиси алюминия двукратно в системе хлороформ-зтанол в соотношении 9:1.