Способ получения карбоксилсодержащих полимерных носителей для иммобилизации белковых антител

СО 03 СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК Ю 1754727 А 5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССРОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ДЛЯ ИММОБИЛИЗАЦИИ БЕЛКОВЫХ АНТИТЕЛ(57) Сущность изобретения; взаимодействие с азотной кислотой продуктов реакции макропористого хлорметилированного сополимера стирола и дивинйлбензола с гликолями формулы НО(СН 2 СН 20)ОН, где п=1 - 3, при 10-60 С, концентрация азотной кислоты 10-30;6 до Содержания карбоксильных групп 0,48-1,60 ммоль/г, Условия реакции сополимера с гликолями: 160- 200 С, 7-12 ч, молярное соотношение количеств хлорметильных групп и гликолей 1:(7,8-20), 1 табл. Ь. 30дственное объединение , О, Н, Власовская; Ю. С. Лебедин а,-Воспев ет ЫорЬуз1, р. 192.Б, и др, Заводская лабос, 1042 - 1049.ЧЕНИЯ КАРБОКСИЛСОМЕРНЫХ НОСИТЕЛЕЙ 1ных сополимеров на осйове стирола и дивинилбензола азотной кислотой.Недостатком этого способа является низкая специфическая активность белковых антител, иммобилизованных на носйтеле.Цель изобретения. - повышение специфической активности иммобилизованных белковых антител.П:р и м е р 1. 20 г хлорметилированного макрапористого сополимера"стирола-и 15% дивинилбензола, полученного в присутствии 120; бензина и содержащего 4,51 ммоль хлора на 1 г, загружают в колбу, заливают 100 мл этиленгликоля, нагревают до 160 С и выдерживают при этой температуре и перемеширании 12 ч. Затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной.реакции, переносят в колбу и заливают 100 мл водного 100/О-ного раствора азотной кислоты. Реакционную смесь выдерживают 8 ч при 40 С и перемешивании, после чего полимерный носитель отделяют и промывают водой до нейтральной реакции промыв(21) 4735527/05.(54) СПОСОБ ПОЛУДЕРЖАЩИХ ПОЛИ Изобретение относится к химии вйсокомолекулярных соединений, а именно к получению полимерных носителей дляиммобилизации белковых антител, и можетбыть использовано в биотехнологии и меди-;цине для создания иммуйосорбентов, аф- .финных сорбентов и биокатализаторов.Известен способ получения карбоксил. содержащих носителей для иммобилизациибелковых антител обработкой оксиэтилме- .такрилатного геля бромцианом и последующим взаимодействием с аминокапроновойкислотой,1 4 едостатками известного способа явля ются сложность получения, необходимость:использования высокотоксичного бромциана.Наиболее близким к предлагаемому потехнической сущности и достигаемым результатам является способ получения карбоксилсодержащих полимерных носителейдля иммобилизации белковых антител,включающий обработку реакционноспособС 08 Р 212/14; А 61 К 39/44 // (С 08212/14, 212:36)ных вод, Полученный носитель содержит 1,6ммоль/г карбоксильных групп.В ИК-спектрах носителя имеются характеристические полосы поглощения при1290 см (валентные колебания карбонильного кислорода), 1700 см (карбонильныйкислород), 1360 см (деформационные ко-.лебания ОН-группы карбоксила), (1110 см ),(группы простых эфиров).П р и м е р 2.20 г хлорметилированногосополимера стирола и 15% дивинилбензола, полученного в присутствии 100 бензина и содержащего 17,2 хлора, загружаютв колбу, заливают 100 мл диэтиленгликоля,нагревают до 180 С и выдерживают приэтой температуре и перемешивании 10.ч,Затем сонолимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции, переносят вколбу, заливают 100 мл 20 О-ной азотнойкислоты и выдерживают при 50 С и перемешивании 4 ч, после чего сополимер отделяйй; промывают водой до нейтральнойреакции. Полученный продукт содержит0,82 ммоль/г карбоксильных групп,В ИК-спектрах продукта имеются характеристические полосы поглощения карбонильного кислорода карбоксильных групп. П р и м е р 3, 20 г макропористого хлорметилированного сополимерастирола и 15 дивинилбензола, полученного в присутствиии 100 ф 6 бензина и .содержащего 17,2 хлора, загружают в колбу, заливают 100 мл триэтиленгликоля, нагревают до 200 С, выдерживают при этой температуре и перемешивании 7 ч, затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции, переносят в колбу, заливают 100 мл 30-ной азотной кислоты и выдерживают 1 ч при 60 С и постоянном перемешивании. Затем сополимер отделяют, промывают водой до нейтральной реакции, Полученный носитель содержит 0,48 ммольг карбоксильных групп.В ИК-спектрах носителя имеются характеристические полосы поглощения карбонильного кислорода карбоксильных групп (1290 и 1700 см ), ОН-группы карбоксила(1360 см ), группы простого эфира(1110 см 1),Для получения иммуносорбентов карбоксилсодержащие носители активировали обработкой эпихлоргидрином и затем иммобилизовывали соответствующие белковые антитела, Готовые иммуносорбенты отмывали от непрореагировавших антител последовательной обработкой 5-ным растрия.Результаты сорбции показаны в таблице,Как виднб из данных таблицы, применение полученных по предлагаемому способу карбоксилсодержащих носителей позволяет по сравнению с прототипом существенно увеличить специфическую активность иммобилизованных белковых антител, что выра 20 жается в способности связывать находящиеся в плазме крови соответствующие иммуноглобулины.Носители, полученные по предлагаемому способу, механически прочны, не набухают в биологических жидкостях и могут быть применены для приготовления иммуносорбенсов, применяемых в биотехнологии и медицине для очистки крови больных.Формула изобретения 30 Способ получения карбоксилсодержащих полимерных носителей для иммобилизации белковых антител, включающий обработку реакционноспособных сополимеров на основе стирола и дивинилбензола азотной кислотой, о т л и ч а ю щ и й с я тем,35 что, с целью повышения специфической активности иммобилизованных белковых антител, в качестве реакционноспособных сополимеров используют хлорметилиро 40 ванные сополимеры стирола и дивинилбензола, которые предварительно подвергают взаимодействию с гликолями формулы НО(СНгСНгО)пОН, где п=1 - 3, при 160 - 200 С в течение 7-12 ч, при молярном соотношении количеств хлорметильных групп и гликолей 1:7,8-20, а обработку производят водным раствором азотной кислоты с концентрацией 10-30 ОР, при 40-60 С до содержа н и я ка рбоксильных групп 0,4845 50 1,60 ммоль/г,10 твором альбумина, 3-ным раствором Твини 0,14 М раствором хлорида на61754727Составитель И. Стояченк Редактор Н. Киштулинец Техред М.Моргентал рректалко Заказ 2867 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ С113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4(5Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, уд,Гагарина, 101