Способ выделения рsеudомоnаs aeruginosa

СОЮЗ СОВЕТСОЦИАЛИСТИЧРЕСПУБЛИК их(71) Институт эпидемиологии и микробиологии Восточно-Сибирского филиала СО АМН СССР и Иркутский институт органической химии СО АН СССР(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ РЯЕОООМО АЯ АЕЯ 06 ВОЗА.(57) Использование; медицинская микробиология, лабораторная диагностика инфекций, вызываемых Рвебогпопаз аегдпоза. Сущность: исследуемый материал высевают жа- еп- ый ил(4- реды ерисевы ч и онйи дуе- эво, так оза, ение в соИзобретение относится к медицинскоймикробиологии и может быть использованодля выявления инфекций, вызываемыхРз,аегэпова,Известен способ выделенияРз.аегодпоза на селективной среде, состоящей из сухого дагестанского пептона(20,6г), К 2304 (10,0 г), МдС 32(1,5 г), арага 15;0 г,в качестве селективного агента - 0,2-0,5%цетилперидинового хлорида (Ц 1 Х), вода -до 1 л,Однако используемая среда не обеспечивает высокой селективности в отношенииРз,аегид 1 поза, так как на ней наблюдаетсярост ассоциантов, а также не обладает достаточной чувствительностью,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ К АВТОРСКОМУ СВИ на плотную питательную среду. соде щую белковую Основу - источник азота тон, дрожжевой гидролиэат), хлори натрий в дистиллированной воде и:с тивный агент - 10-ный раствор фен гидроксифенил)сульфида в ДМСО, рН с 7,2-7,4. Среду перед употреблением ст лизуют при 120 С в течение 20 мин, По инкубируют при 37 С в течение 18 - 24 учитывают результаты. Наличие кол свидетельствует о присутствии в иссле мом материале возбудителя. Способ по ляет выявить как пигментообразующие и беспигментные штаммы Р,аетцди Способ высокочувствителен (выдел возбудителя из смеси культур, взятых отношении 1:1000), 2 табл,Известен способ выделения Рз.аегдпоза путем посева на питательную среду, содержащую источники азота, углерода, минеральные соли, агар. и селективный агент, в качестве которого используются и-оксифенилсалициламид в определенной концентрации.Однако используемый селективный агент при повышении его концентрации в пределах указанных величин угнетает рост Рз,аегодпоза, что снижает чувствительность способа. Показатель угнетения роста Рз.аегцд поза 2,6.Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет снижения угнетающего действия селективного агента.П р и м е р 1, Навески, масо : сухой пептон СК 1,086; агар 1,130; хлорид натрия 0,495, растворяют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полного расплавления агара, Раствор доводят водой до первоначального обьема и добавляют в качестве селективного агента 0,3 мл 1 о -ного раствора фенил(4-гидроксифенил)сульфидэ (17 О-ный раствор готовят путем растворения 0,03 г селективного агента в 2,8 мл диметилсульфоксида), Среду разливают во флаконы и стерилизуют в автоклаве при 120 С в течение 20 мин (рН среды 7,2 - 7,4), Готовую питательную среду расплавляют в водяной бане и разливают в чашки Петри, Материал от больчого с диагнозом "хронический остеомиелит" засевают ватным тампоном на поверхность питательной среды, инкубируют посев при 37 С в течение 18 - 24 ч, после чего учитывают результаты. Наличие выросших колоний указывает на из принадлежность к виду Рз,аегцдпоза, Колонии имеют размер до 2 мм, выпуклые, серые, рост других микроорганизмов отсутствует.П р и м е р 2. Нэвески, мас. : сухой пептон 1,146; агар 1,170; хлорид натрия 0,510, растворяют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полногорасплавления агара, Доводят водой до первоначального объема и добавляют 0,31 мл 1 о -ного раствора фенил(4-гидроксифенил)сульфида, разливают во флаконы и стерилизуют в автоклаве при 120 С в течение 20 мин (рН среды 7,2-7,4), Готовую питательную среду расплавляют в водяной бане и разливают в чашки Петри. Матераил от больного с диагнозом "параректальный свищ" ватным тампоном засевают на поверхность питательной среды, посев инкубируют в течение 18-24 ч, после чего учитывают результат, Колониии имеют размер до 2,0 мм, выпуклые, серые. Рост других микроорганизмовв отсутствует.П р и м е р 3, Нэвески, мас, : сухой пептон 1,160; агар 1,208; хлорид натрия 0,532, растворя ют в дистиллированной воде до 100 мл и нагревают до полного растворения агара, доводят водой до первоначального объема и добавляют 0,32 мл 1-ного раствора фенил(4-гидроксифенил)сульфида. Разливают во флаконы и стерилизуют в эвтоклаве при 120 С в течение 20 мин (рН среды 7,2-7,4), Готовую питательную среду 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 расплавляют в водяной бане и разливают вчашки Петри, Материал от больного с диагнозом "апендэктомия" ватным тампоном засевают на поверхность питательной среды,инкубируют посев в течение 18-24 ч, послечего учитывают результат, Колонии имеютразмер до 2,0 мм, серые, выпуклые. Ростдругих микроорганизмов отсутствует,Результаты изучения чувствительностипредлагаемой среды даны в табл. 1,Чувствительность среды была изученана пяти штаммах Рз.аегцдпоза выделенныхиз клинического материала, Сто микробных .клеток засевают в количестве 1 мл на 2 чашки из разведения 10, инкубируют при 37 ОС-7в течение 18 - 24 ч и подсчитывают числовыросших колоний, Результаты показывают, что предлагаемый селективный агентоказывает меньшее ингибирующее действие на рост Рз.аегцдпоза (в 1,5 раза меньшепо сравнению с известным).Данные, приведенные в табл, 2, свидетельствуют о том, что при использованиифенил(4-гидроксифенил) сульфида и оксафенамида возможно выделение основноговозбудителя иэ смеси культур. взятых в соотношении 1:1000.Вместо пептона в составе среды можноиспольэовать гидролизат кормовых дрожжей в аналогичной концентрации с получением аналогичного положительногорезультата.Результаты изученных селективныхсвойств предлагаемой среды даны в табл. 2,Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить селективность выделения при одновременномснижении ингибирующего действия в отношении роста Рз.аегцд поза.Формула изобретенияСпособ выделения Рзецбощопазаегцрпоза путем посева исследуемого материала на питательную среду, содержащуюисточник азота, агар, хлористый натрий, селективный агент и дистиллированную воду,с последующим инкубированием посевов иисследованием выросших колоний, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышениячувствительност способа эа счет сниженияугнетающего действия селективного агента,в качестве селективного агента используют1 о -ный раствор фенил(4-гидроксифенил)сульфида в диметилсульфоксиде.Изучаемыеассоциации ост штаммов на предлагаемся среде евная доз т да с фенил(4-гидроксифенил)сульфидори содержании компонентов ие тт минимальном оптимальном ксимальноме 32Роста в.аегц 81 повс,ацгецв 00 00 Роста не Роста нет оста н 49Роста нет Роста не Роста нет оста нет 8 Роста Ро ста н нет 75 Ро аегцяиово 11 Роста нет ста нет т ста нет 1001000 Рв.аегц 8 ьпозв Вг,ерИегцйг В аваев ва вГв в в в в ста н оста не Составитель А.ЛеонтьеваТехред М.Моргентал Корректор О.Юрковеэктор Н,Гуньк аказ 2734Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ ССС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 о-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 роизводст Рз,аегц 81 позаК 1 еьв 1 е 11 аРв. аегцв 1 поваРгосецв+ 10010000 + 10010000 г е в тттВ71 Р ет 80 68Роста нетРостаг тт Среда с оксафе амидом при оптмальном содержкомпонентов 37Роста нет29